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1.
Nat Biotechnol ; 22(4): 418-26, 2004 Apr.
Artículo en Inglés | MEDLINE | ID: mdl-15024387

RESUMEN

We describe a transcriptional analysis platform consisting of a universal micro-array system (UMAS) combined with an enzymatic manipulation step that is capable of generating expression profiles from any organism without requiring a priori species-specific knowledge of transcript sequences. The transcriptome is converted to cDNA and processed with restriction endonucleases to generate low-complexity pools (approximately 80-120) of equal length DNA fragments. The resulting material is amplified and detected with the UMAS system, comprising all possible 4,096 (4(6)) DNA hexamers. Ligation to the arrays yields thousands of 14-mer sequence tags. The compendium of signals from all pools in the array-of-universal arrays comprises a full-transcriptome expression profile. The technology was validated by analysis of the galactose response of Saccharomyces cerevisiae, and the resulting profiles showed excellent agreement with the literature and real-time PCR assays. The technology was also used to demonstrate expression profiling from a hybrid organism in a proof-of-concept experiment where a T-cell receptor gene was expressed in yeast.


Asunto(s)
Perfilación de la Expresión Génica/métodos , Análisis de Secuencia por Matrices de Oligonucleótidos , Regiones no Traducidas 3' , Algoritmos , Animales , Fragmentación del ADN , Enzimas de Restricción del ADN/metabolismo , ADN Complementario/metabolismo , Galactosa/metabolismo , Humanos , Procesamiento de Imagen Asistido por Computador , Ratones , Modelos Genéticos , Músculo Esquelético/metabolismo , Músculos/metabolismo , Regiones Promotoras Genéticas , ARN Mensajero/metabolismo , Reacción en Cadena de la Polimerasa de Transcriptasa Inversa , Saccharomyces cerevisiae/metabolismo , Análisis de Secuencia de ADN , Linfocitos T/metabolismo , Transgenes
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