Comparison of three methods of DNA extraction from peripheral blood mononuclear cells and lung fragments of equines.

We compared three different protocols for DNA extraction from horse peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and lung fragments, determining average final DNA concentration, purity, percentage of PCR amplification using beta-actin, and cost. Thirty-four samples from PBMC, and 33 samples from lung fragments were submitted to DNA extraction by three different protocols. Protocol A consisted of a phenol-chloroform and isoamylic alcohol extraction, Protocol B used alkaline extraction with NaOH, and Protocol C used the DNAzol((R)) reagent kit. Protocol A was the best option for DNA extraction from lung fragments, producing high DNA concentrations, with high sensitivity in PCR amplification (100%), followed by Protocols C and B. On the other hand, for PBMC samples, Protocol B gave the highest sensitivity in PCR amplification (100%), followed by Protocols C and A. We conclude that Protocol A should be used for PCR diagnosis from lung fragment samples, while Protocol B should be used for PBMC.

Avaliação da nested PCR em comparação aos testes sorológicos IDGA e ELISA para o diagnóstico da anemia infecciosa equina / Evaluation of nested PCR compared with AGID and ELISA serological tests for equine infectious anemia diagnosis

Comparou-se a técnica nested PCR (nPCR) com os testes sorológicos IDGA e ELISA para o diagnóstico da anemia infecciosa equina. Amostras do DNA provenientes das células mononucleares do sangue periférico foram submetidas à amplificação do gene gag pela nPCR, que apresentou valores de sensibilidade e especificidade relativas de 90 por cento e 52,9 por cento, respectivamente, em relação à IDGA, e valores de 85,7 por cento e 49 por cento, respectivamente, em relação ao ELISA. Considerando-se os fatores referentes às limitações de cada técnica, pode ser sugerido o uso da nPCR como teste de diagnóstico complementar para AIE em amostras brasileiras.

The nested polymerase chain reaction (nPCR) technique was compared to AGID and ELISA serological tests for the diagnosis of Equine Infectious Anemia. DNA samples from the peripheral blood mononuclear cells were subjected to the amplification of the gag gene by nPCR, which showed relative sensibility and specificity values of 90.0 percent and 52.9 percent respectively, compared to the AGID and values of 85.7 percent and 49.0 percent, respectively, as compared to ELISA. Considering the factors concerning the limitations of each technique, the use of nPCR can be suggested as a complementary diagnostic test for EIA in Brazilian samples.

Avaliação do tratamento com isoniazida em bovinos infectados naturalmente pelo Mycobacterium bovis / Evaluation of the treatment with isoniazid carried out in bovines naturally infected with Mycobacterium bovis

Foi adotado o tratamento intermitente da tuberculose com isoniazida em 240 bovinos de um rebanho naturalmente infectado pelo M. bovis. No início do tratamento 36,6 por cento dos animais foram reagentes positivos e 2,9 por cento inconclusivos. Todos os animais do rebanho receberam isoniazida por via oral em doses de 25mg/kg de peso vivo, administrada três vezes por semana, às segundas, quartas e sextas-feiras, durante 10 meses, perfazendo 120 doses. A cura de 98,9 por cento dos animais tratados foi verificada por meio da dessensibilização alérgica realizada pela tuberculinização e controle bacteriológico de 39 animais abatidos. O tratamento neste rebanho não resultou em seleção de cepas resistentes a isoniazida, comprovada pelo teste de sensibilidade a essa droga, realizado em cultura de M. bovis isolada de um animal não curado.