Modulation of heat shock protein expression and cytokine levels in MCF-7 cells through photodynamic therapy.

In this study, we assess the impact of photodynamic therapy (PDT) using aluminum phthalocyanine tetrasulfonate (AlPcS4) on the viability and cellular stress responses of MCF-7 breast cancer cells. Specifically, we investigate changes in cell viability, cytokine production, and the expression of stress-related genes. Experimental groups included control cells, those treated with AlPcS4 only, light-emitting diode (LED) only, and combined PDT. To evaluate these effects on cell viability, cytokine production, and the expression of stress-related genes, techniques such as 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), and real-time quantitative PCR (RT‒qPCR) were employed. Our findings reveal how PDT with AlPcS4 modulates mitochondrial activity and cytokine responses, shedding light on the cellular pathways essential for cell survival and stress adaptation. This work enhances our understanding of PDT's therapeutic potential and mechanisms in treating breast cancer.

Development and validation of alternative methods by non-aqueous acid-base titration and derivative ultraviolet spectrophotometry for quantification of sildenafil in raw material and tablets

Sildenafil citrate (SILC) is a potent phosphodiesterase-5 inhibitor used for erectile dysfunction and pulmonary hypertension. This study shows two simple, fast and alternative analytical methods for SILC determination by non-aqueous titration and by derivative ultraviolet spectrophotometry (DUS) in active pharmaceutical ingredient and/or dosage forms. The quantitation method of SILC active pharmaceutical ingredient by non-aqueous acid-base titration was developed using methanol as solvent and 0.1 mol/L of perchloric acid in acetic acid as titrant. The endpoint was potentiometrically detected. The non-aqueous titration method shows satisfactory repeatability and intermediate precision (RSD 0.70-1.09%). The neutralization reaction occurred in the stoichiometric ratio 1:1 in methanol. The determination of SILC active pharmaceutical ingredient or dosage forms by DUS was developed in the linear range from 10 to 40 µg/mL, in 0.01 mol/L HCl, using the first order zero-peak method at λ 256 nm. The DUS method shows selectivity toward tablets excipients, appropriate linearity (R2 0.9996), trueness (recovery range 98.86-99.30%), repeatability and intermediate precision in three concentration levels (RSD 1.17-1.28%; 1.29-1.71%, respectively). Therefore, the methods developed are excellent alternatives to sophisticated instrumental methods and can be easily applied in any pharmaceutical laboratory routine due to simple and fast executions.

Monitoring of post-vaccination anti-HBs titles vaccine in children and adolescents in the pre-dialysis of chronic kidney disease / Monitoramento dos títulos de anti-HBs pós-vacinal em crianças e adolescentes em fase pré-dialítica da doença renal crônica

Abstract Introduction: Bacterial or viral diseases are one of the major causes of death in patients with chronic kidney disease (CKD). These patients show a quantitative reduction of levels of antibodies over time. Among the infectious diseases that affect CKD patients, stands out hepatitis B (HB). Immunization and control of antibodies levels against the hepatitis B surface antigen (anti-HBs) are ways to prevent the HB infection in this population. Patients with anti-HBs levels ≥10 IU/ml are considered adequate responders, whereas those with anti-HBs levels ≥ 100 IU/ml are considered excellent responders. Objective: To analyze the variation of the anti-HBs levels obtained after vaccination against HB in children and adolescents in the pre-dialysis stage of CKD. Methods: A retrospective cohort study on anti-HBs levels of children and adolescents in the pre-dialysis stage of CKD. Correlation between levels of anti-HBs titers and time since the vaccination were estimated. Results: From the total of 116 studied patients most of the studied patients were considered excellent responders, obtaining in the three anti-HBs titers percentages of 70.7%, 62.1% and 54.9% respectively. The anti-HBs titer levels showed a negative correlation with the time since vaccination (Kendall Tau-b = -0.16; p = 0.02). Conclusion: The majority of the studied population was vaccinated by PNI and showed excellent anti-HBs titer levels, even experiencing a progressive reduced response over the time.

Resumo Introdução: As doenças infecciosas, bacterianas ou virais, são uma das principais causas de morte dos pacientes com doença renal crônica (DRC), que apresentam um decréscimo na duração da imunidade em comparação às pessoas saudáveis. Entre as doenças infecciosas que acometem os portadores de DRC, destaca-se a hepatite B (HB). A imunização e o controle dos níveis de anticorpos contra o antígeno da superfície da hepatite B (anti-HBs) são formas de evitar a contaminação da HB nessa população. Pacientes com o nível de anti-HBs ≥ 10 UI/ml são considerados adequados respondedores, enquanto aqueles com níveis de anti-HBs ≥ 100 UI/ml são considerados excelentes respondedores. Objetivo: Analisar a variação dos níveis de anti-HBs adquiridos após a vacinação contra a HB em crianças e adolescentes na fase pré-dialítica da DRC. Métodos: Estudo de coorte retrospectivo dos níveis de anti-HBs de crianças e adolescentes na fase pré-dialítica da DRC. Resultados: Dos 116 pacientes do estudo, a maior parte foi considerada respondedores excelentes, obtendo nas três titulagens percentuais de 70,7%, 62,1% e 54,9%, respectivamente. Os níveis de anti-HBs apresentaram uma correlação negativa com o tempo de vacinação (Kendall Tau-b = - 0,16; p = 0,02). Conclusão: Conclui-se que a maior parte da população do estudo apresenta níveis de anti-HBs excelentes, ocorrendo uma queda progressiva da titulagem ao longo do tempo.

Comparative analysis of different doses of coherent light (laser) and non-coherent light (light-emitting diode) on cellular necrosis and apoptosis: a study in vitro

Introduction Threshold doses of electromagnetic radiation can initiate necrosis and apoptosis in cells. The purpose of this study was to evaluate cellular apoptosis and necrosis immediately (t0) and 24 hours (t24) after irradiation with different doses of coherent light (laser) or non-coherent light (LED). Methods CHO-K1 lineage cells were irradiated with laser (810nm) or LED (945±20nm), with 24mW, contact area of 1cm2 and doses of 10, 20, 30, 40 and 50J/cm2 for 300, 660, 960, 1230 and 1620s, respectively, at both wavelengths. Cells were evaluated by fluorescence microscopy, differentiating viable, apoptotic and necrotic cells immediately and 24 hours after irradiation. Results The number of necrotic cells at t0 was higher in the LED 40 and 50J/cm2 groups (86±14 and 84±16% respectively, p <0.05), than in the 10 and 20J/cm2 laser (5±2 and 5±3%, p<0.05) and LED (5±3 and 4±1%, p<0.05) conditions. At t24, the LED 40J/cm2 (80±20%, p<0.05) group also showed more necrosis than the control and lower dose groups (laser 10, 20, and 30J/cm2 percentage of 6±4, 10±3 and 7±3%, p<0.05; LED 10 and 20J/cm2 percentage of 3±1 and 17±10%, p<0.05). A decrease in apoptotic cells was observed in the laser group with doses of 10, 40, and 50J/cm2 (6±4, 3±1 and 1±1% respectively, not significant), as well as in the LED 40J/cm2 (2±2%, not significant) group versus control. The cells had a higher percentage of apoptosis cells in the control group and with laser doses of 10 and 30J/cm2 (percentage of 20±1 and 20±4%, not significant), while only the LED 40J/cm2 (10±10%, not significant) had a lower percentage compared the control group. Conclusion Laser or LED stimulation promoted an increase in cell necrosis in a high energy density condition as characterized in a dose-dependent inhibition therapy. Laser or LED infrared irradiation in low doses (up to 20J/cm2) reduced the percentage of apoptosis in CHO-K1 cells, while high doses (30J/cm2) elevated apoptosis.

Efeito da terapia ultrassônica de baixa intensidade em cultura celular de fibroblastos / Efecto del ultrasonido de baja intensidad en cultivo celular de fibroblastos / Effect of low-intensity pulsed ultrasound therapy on a fibroblasts cell culture

Dentro da prática fisioterápica verifica-se a ampla utilização do ultrassom terapêutico para tratamento das diversas afecções musculoesqueléticas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da irradiação Ultrassônica de Baixa Intensidade, com diferentes regimes de pulsos e intensidade, em cultura celular de fibroblastos L929 (ATCC CCL-1 NCTC), de modo a verificar a viabilidade celular e definir parâmetros de dosimetria. Para isso, utilizou-se a aplicação de ultrassom pulsado, com frequência de 1Mhz, em cultura de células fibroblásticas, divididas em cinco grupos (controle e com intensidade instantâneas de 0,3W/cm2-10%; 0,3W/cm2 -20 %; 0,5W/cm2 -10% e US 0,5W/cm2 -20 % - 100Hz). A irradiação ocorreu com intervalos de 24, 48 e 72 horas, por dois minutos, e após 24 horas de cada irradiação foi realizado teste de MTT Brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol)-2,5-difeniltetrazólio]. Os resultados revelaram que ao compararem-se os valores de células viáveis pelo método MTT nos cinco grupos, não foi possível encontrar diferença estatisticamente significativa em nenhum deles, nos três momentos avaliados (24, 48 e 72 horas); enquanto que, ao se realizar a análise de medida repetida nos diferentes grupos, encontrou-se diferença estatisticamente significativa apenas no grupo irradiado com ultrassom a 0,5W/ cm2com regime de pulso de 10% (p=0,003). Com base nesses resultados, conclui-se que a irradiação Ultrassônica de Baixa Intensidade em cultura celular de fibroblastos L929, somente no grupo com intensidade de 0,5W/cm2-10% obteve o crescimento numérico, com significância estatística em todos os períodos de avaliação.

En la práctica fisioterápica se utiliza bastante el ultrasonido como terapia para el tratamiento de diversos trastornos muscoloesqueléticos. Este artículo tiene por objetivo evaluar el efecto de la irradiación ultrasónica de baja intensidad, con diferentes regímenes de pulsos y de intensidades, en cultivo celular de fibroblastos L929 (ATCC CCL-1 NCTC), para verificar la viabilidad celular y establecer los parámetros de dosimetría. Se utilizó el ultrasonido pulsado, con frecuencia de 1Mhz, en un cultivo de células fibroblásticas, divididas en cinco grupos (con control y con la intensidad instantánea del 0,3W/cm2-10%; 0,3W/cm2 -20%; 0,5W/cm2 -10% y US 0,5W/cm2-20 % - 100Hz). La irradiación se llevó a cabo en intervalos de 24, 48 y 72 horas, durante dos minutos y después de las 24 horas de cada irradiación se realizó la prueba de MTT {Bromuro de [3-(4,5-dimetiltiazol)-2,5-difeniltetrazólio]}. Los resultados mostraron que en la comparación entre los valores de células viables por el método MTT en los cinco grupos evaluados no ha sido posible encontrar ninguna diferencia estadísticamente significativa en los tres momentos evaluados (24, 48 y 72 horas). En cambio, al llevar a cabo el análisis de medida repetida en los diferentes grupos, se obtuvo una diferencia estadísticamente significativa solamente en el grupo irradiado con ultrasonido a 0,5W/cm2 con el régimen de pulso del 10% (p=0,003). Basándose en estos resultados se concluyó que la irradiación ultrasónica de baja intensidad en cultivo celular de fibroblastos L929 obtuvo el aumento sólo en el grupo con intensidad de 0,5W/cm2-10%, con significancia en todos los periodos de evaluación.

Within the physiotherapy practice there is a wide use of therapeutic ultrasound for the treatment of various musculoskeletal disorders. The aim of this study was to evaluate the effect of Low Intensity Ultrasonic irradiation with differents forms of pulse and intensity in cell culture of L929 fibroblasts (ATCC CCL-1 NCTC), in order to check cell viability and define parameters of dosimetry. For this purpose, it was used the application of pulsed ultrasound with a frequency of 1MHz in cultured fibroblast cells divided into five groups (control and instantaneous intensity of 0.3W/cm2-10%, 0.3W/cm2 -20%, 0.5W/cm2-10% and US 0.5W/cm2-20% - 100Hz). Irradiation occurred at intervals of 24, 48 and 72 hours for two minutes and 24 hours after each irradiation test MTT [3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was performed. Results showed that when comparing the values of viable cells by MTT method in the five groups, we could not find statistically significant difference in any of them, in these three conditions (24, 48 and 72 hours); while. Whereas, when performing the analysis of repeated measures in the different groups, it was found a statistically significant difference only in the group irradiated with ultrasound at 0.5W/cm2 with pulse regime of 10% (p=0.003). Based on these results, it is concluded that the Low Intensity Ultrasonic irradiation in L929 fibroblast cell culture, only in the group with an intensity of 0.5W/cm2 -10% obtained numerical growth, with statistical significance in all periods evaluation.

Preliminary study of coconut water for graft tissues preservation in transplantation / Estudo preliminar da água de coco para preservação de enxertos teciduais em transplante

OBJECTIVE: To verify the effectiveness of coconut water in preserving tissues for transplant. METHODS: Fifty male Wistar rats were randomly distributed in five groups, according to the following preservation solutions for tissue grafts: Group 1: Lactated Ringer; Group 2: Belzer solution; Group 3: mature coconut water; Group 4: green coconut water; Group 5: modified coconut water. In Group 5, the green coconut water has been modified like the Belzer solution. From each animal we harvasted the spleen, ovaries and skin of the back segment. These tissues were preserved for six hours in one of the solutions. Then, the grafts were reimplanted. The recovery of the function of the implanted tissues was assessed 90 days after surgery, by splenic scintigraphy and blood exame. The implanted tissues were collected for histopathological examination. RESULTS: The serum levels did not differ among groups, except for the animals in Group 5, which showed higher levels of IgG than Group 1, and differences in relation to FSH between groups 1 and 2 (p <0.001), 4 and 2 (p = 0.03) and 5 and 2 (p = 0.01). The splenic scintigraphy was not different between groups. The ovarian tissue was better preserved in mature coconut water (p <0.007). CONCLUSION: the coconut water-based solutions preserves spleen, ovary, and rat skin for six hours, maintaining their normal function.

OBJETIVO: Verificar a eficácia da água de coco na preservação de tecidos para transplante. MÉTODOS: cinquenta ratas Wistar foram distribuídas aleatoriamente em cinco grupos, de acordo com as seguintes soluções de preservação para enxertos teciduais: Grupo 1- Ringer lactato, Grupo 2- Solução de Belzer, Grupo 3- Água de coco maduro, Grupo 4- Água de coco verde, Grupo 5- Água de coco modificada. No Grupo 5, a água de coco verde foi modificada à semelhança da solução de Belzer. De cada animal, retirou-se o baço, os ovários e um segmento de pele do dorso. Esses tecidos foram preservados durante seis horas em uma das soluções. Em seguida, os enxertos foram reimplantados. A recuperação da função dos tecidos implantados foi avaliada 90 dias após a cirurgia, por meio de cintilografia esplênica, exames de sangue. Os tecidos implantados foram coletados para estudo anatomopatológico. RESULTADOS: as dosagens séricas não apresentaram diferença entre os cinco grupos, exceto pelos animais do Grupo 5, que apresentaram valores mais elevados de IgG do que o Grupo 1,e pelas diferenças em relação ao FSH entre os grupos 1 e 2 (p<0,001), 4 e 2 (p=0,03), 5 e 2 (p=0,01). A cintilografia esplênica não foi diferente entre os grupos. O tecido ovariano foi melhor preservado em água de coco maduro (p<0,007). CONCLUSÃO: as soluções à base de água de coco preservam baço, ovário e pele de rato durante seis horas, mantendo sua função normal.

Wound healing properties and mucilage content of Pereskia aculeata from different substrates

Physiologic growth parameters Wound healing Pereskia aculeata Mill., Cactaceae, is a cactus with high mucilage production, well-known for its nutritional properties. Folk use consists on skin injuries, and mucilage is probably involved in the wound healing activity. This work studied some aspects of its cultivation, specifically regarding soil (substrate), to correlate the effects of nutritional content to mucilage production and to the wound-healing property. Plants were grown under five different soil treatment (sand, crude soil, sand and soil, sand and cattle manure, soil and cattle manure), and after eight months extracts were prepared by turbo-extraction to obtain a crude hydroethanolic extract. We evaluated the effects of these extracts on swelling index, cytotoxicity, and in vitro wound healing property. The results show that the substrate used in cultivation may interfere with mucilage production, but not with cytotoxicity and wound healing, this shows the safety of its use, despite the soil treatment received along the various biomes where P. aculeata is cultivated. Furthermore, morphological studies demonstrated the beneficial effect of the mucilage-containing extract on the fibroblast cell culture, corroborating its folk use for wound healing.

Avaliação da atividade mitocondrial no processo de morte celular em células tumorais de mama após tratamento com Ciclosporina A e Photosan3® / Evaluation of mitochondrial activity in the cell death process in breast tumor cells after treatment with Cyclosporine A and Photosan3®

INTRODUÇÃO: A terapia fotodinâmica (PDT) é uma modalidade terapêutica para o tratamento de doenças neoplásicas e não neoplásicas tendo como alvo a mitocôndria, organela que tem atraído maior atenção devido ao seu envolvimento direto no processo de morte celular. Inibindo a atividade mitocondrial é possível estudar outras organelas envolvidas no processo de morte celular. O objetivo deste estudo foi avaliar a importância da mitocôndria no processo de morte celular na linhagem celular M3, induzida após a fotossensibilização com Photosan3®. MÉTODOS: Para os experimentos foram utilizados os seguintes grupos: grupo controle I, células sem nenhum tratamento; grupo II PDT, células incubadas com Photosan3®; grupo III PDT, células incubadas com CsA e Photosan3®; grupo IV células tratadas somente com Estaurosporina (STS). Após a incubação com o fotossensibilizador os grupos II e III foram irradiados com diodo laser semicondutor (λ 670 nm). Todos os grupos foram incubados a 37 ºC em estufa com atmosfera de 5% de CO2, por 24 h e 48 h. No final destes períodos todos os grupos foram submetidos ao ensaio de citotoxicidade, pelo teste de MTT (brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio) e corados com anexina V e iodeto de propídio para determinar a proporção de morte celular, sendo as análises realizadas por microscopia de fluorescência. RESULTADOS: Os resultados mostraram que as células realizaram apoptose por via independente de mitocôndria. A CsA apresentou-se eficiente na inativação da mitocôndria no processo apoptótico durante a fotossensibilização com Photosan3®. CONCLUSÃO: A associação de CsA e Photosan3® na terapia fotodinâmica demonstrou a presença de morte celular por apoptose independente da participação mitocondrial.

INTRODUCTION: Photodynamic therapy (PDT) is a therapeutic modality for the treatment of neoplastic and non-neoplastic diseases. Mitochondria have attracted great attention due to their direct involvement in the cell death process. By inhibiting the mitochondrial activity, it is possible to study other organelles involved in the cell death process. The objective of this study was to evaluate the involvement of mitochondria in induced cell death process in M3 cell line after photosensitization with Photosan3®. METHODS: The experiments involved the following groups: control group I, cells with no treatment; group II PDT, cells incubated with Photosan3®; group III PDT, cells incubated with CsA and Photosan3®; group IV, cells treated only with treated only Staurosporine (STS). After incubation with the photosensitizer, the groups II and III were irradiated using a semiconductor laser diode (λ 670 nm). All groups were incubated at 37 ºC in an atmosphere of 5% CO2 for 24 and 48 h. After this period, all groups were subjected to the MTT (3 - [4,5-dimethyl-thiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide) cytotoxicity assay and labeled with Annexin V and Iodide Propidium to determine the rate of cell death. The analyses were performed by fluorescence microscopy. RESULTS: The results show that PDT Photosan leads to apoptosis of breast cell line M3 by a route independent of the mitochondria. CONCLUSION: The association of CsA and Photosan3® in photodynamic therapy showed the occurrence of cell death (apoptosis) independent of mitochondrial participation.

In vitro dissolution kinetic for mycophenolic acid derivatives tablets

Mycophenolate mofetil (MMF) and mycophenolate sodium (MPS) are an ester and a salt of mycophenolic acid. They have different kinetic in vivo characteristics due to differences in molecular structures, physicochemical properties and formulations administered. In this study, dissolution profiles of reference products were tested in different media to evaluate the effect of pH, kinetic dissolution and the best statistical model that can be used to predict the release of both drugs. The drug release was determined by using a validated ultraviolet spectrophotometry method, λ 250 nm. The method showed to be selective, linear, precise and accurate for MMF in 0.1 M HCl and MPS in sodium phosphate buffer pH 6.8. Dissolution kinetics models of zero order, first order, Higuchi, Hixson-Crowell and Weibull were applied to data in order to select the best fit by linear regression. The regression parameters were estimated and the models were evaluated with the results of residuals and coefficient of determination. The residuals obtained from dissolution kinetics models were random, uncorrelated, and normally distributed with constant variance. The R² values (74.7% for MMF and 95.8% for MPS) demonstrated good ability of the Weibull regression to explain the variability and to predict the drugs' release.

Micofenolato de mofetila (MMF) e micofenolato sódico (MPS) são, respectivamente, éster e sal sódico do ácido micofenólico. Os fármacos possuem características farmacocinéticas distintas em função das diferenças na estrutura molecular, nas propriedades físico-químicas e nas formulações administradas. Neste trabalho, os perfis de dissolução dos medicamentos referências foram testados em diferentes meios de dissolução com o objetivo de avaliar o efeito da variação de pH, a cinética de dissolução e o modelo estatístico mais adequado para prever a dissolução dos fármacos. A liberação dos fármacos foi determinada com método validado por espectroscopia no ultravioleta, λ 250 nm. O método mostrou-se seletivo, linear, preciso e exato para dissolução de MMF em 0,1 M HCl e MPS em tampão fosfato pH 6,8. Os modelos cinéticos de dissolução de ordem zero, primeira ordem, Higuchi, Hixson-Crowell e Weibull foram aplicados com o objetivo de selecionar aquele com o melhor ajuste por regressão linear. Os parâmetros de regressão foram estimados e os ajustes dos modelos foram verificados pelos resíduos e coeficientes de determinação. Os resíduos obtidos foram aleatórios, independentes, apresentaram variância constante e seguiram a distribuição normal. Os valores de R² (74,7% para MMF e 95,8% para MPS) indicaram bom ajuste da regressão de Weibull para explicar a variabilidade e estimar a liberação dos fármacos.

Stryphnodendron adstringens (Mart. ) Coville (Fabaceae) proanthocyanidins quantitation by RP-HPLC

Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (barbatimão) is a tree belonging to the Fabaceae family, and it is commonly found in the southeastern Brazilian cerrado. The stem bark of this tree is traditionally used as an anti-inflammatory and antiseptic agent to treat leucorrhea and diarrhea, as well as to promote wound healing (owing to the presence of proanthocyanidins). Proanthocyanidins were obtained from the ethanolic extract of S. adstringens stem bark and assessed by reversed phase-high performance liquid chromatography with an ultraviolet/diode array detector. The identified compounds included gallic acid, catechin, gallocatechin (GC), epigallocatechin, and epigallocatechin gallate (EGCG). The selected markers, GC and EGCG, were simultaneously used for chromatographic validation (linearity range: 30-330 ng, equivalent to 3-33 µg/mL; r>0.998). The method showed precision (intra-day relative standard deviation [RSD]: 1.72% for GC; 1.16% for EGCG; inter-day RSD: 1.74%-2.60% for both markers), accuracy, robustness, and selectivity. The limits of detection and quantitation were 0.29 µg/ml and 0.89 µg/ml for GC, and 0.88 µg/mL and 2.67 µg/mL for EGCG, respectively. In addition, S. obovatum was evaluated and showed an average of 12.2 µg/mL for GC (equivalent to 1.22% w/w) and 14.2 µg/mL for EGCG (equivalent to 1.42% w/w) in the ethanolic extract. The quantitative results were compared to those obtained for S. adstringens, which showed that the markers are present in both species.

Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (barbatimão) é uma árvore da família Fabaceae encontrada no cerrado do sudeste do Brasil. As cascas do caule das espécies são tradicionalmente utilizadas como agente antiinflamatório e antisséptico para o tratamento de diarreia e leucorreia, bem como para promover a cicatrização de feridas, devido à presença de proantocianidinas. Estas substâncias obtidas a partir do extracto etanólico (EE) de cascas do caule de S. adstringens foram avaliadas por cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa. As substâncias identificadas foram ácido gálico, catequina, galocatequina (GC), epigalocatequina e galato de epigalocatequina (EGCG). Os marcadores selecionados, GC e EGCG, foram utilizados simultaneamente para validação cromatográfica (intervalo de linearidade 30-330 ng, equivalente a 3-33 µg/mL, r>0,998). O método mostrou precisão (intra-dia DPR 1,72% para GC; 1,16% para EGCG; inter-dia DPR 1,74%-2,60% para ambos os marcadores), exatidão, robustez e seletividade. Os limites de detecção e de quantificação de 0,29 µg/mL e 0,89 µg/mL para a GC, e 0,88 ng/mL e 2,67 µg/mL para EGCG, respectivamente. Outra espécie (S. obovatum) avaliada, mostrou valores médios 12,2 µg/mL de GC (equivalente a 1,22% p/p) e 14,2 µg/mL de EGCG (equivalente a 1,42% p/p) encontrados no EE. Os resultados quantitativos comparam-se aos de S. adstringens e mostram que tais marcadores estão presentes em ambas as espécies.

A qualidade, o custo e a dispensação de sinvastatina cápsulas em farmácias magistrais / Quality, cost and dispensing of simvastatin capsules at compounding pharmacies

Com base na RDC/ANVISA 67/2007, avaliou-se o serviço prestado na dispensação de sinvastatina cápsulas em farmácias magistrais. Vinte e quatro (16%) das 150 farmácias magistrais foram aleatoriamente selecionadas nas regiões de Belo Horizonte-MG, observando a distribuição geográfica. A qualidade do produto, os aspectos da dispensação e o custo foram considerados em estudos de correlação. Os resultados foram submetidos a análises estatísticas descritivas e inferenciais. Em apenas 25% destas farmácias, o fax da prescrição foi solicitado. Todos os pedidos foram entregues no prazo, porém sem comprovação da dispensação. Em uma das entregas, o medicamento era o incorreto. Seis (25%) dos produtos apresentaram rotulagem incompleta (ausência de posologia 16,3% ou de identificação do médico/paciente 8,7%). Apenas 11 (45,8%) das amostras apresentaram qualidade satisfatória. O custo do medicamento manipulado variou entre R$20,40 e R$44,00 com valor médio R$31,18. Não se observou associação entre a qualidade do medicamento e os aspectos do custo, prazo de entrega e localização geográfica. Verifica-se que a maioria das farmácias magistrais ainda precisa adequar-se à legislação para garantir à população uma assistência farmacêutica de qualidade.

The aim of the present study was to evaluate the dispensing of simvastatin capsules at compounding pharmacies in light of Brazilian public health regulations (RDC/ANVISA 67/2007). Twenty-four (16%) out of 150 compounding pharmacies were randomly selected in the city of Belo Horizonte based on geographic distribution among the different districts. Dispensing services, quality and cost were considered in the correlation studies. The results were submitted to descriptive and inferential statistical analyses. The prescription fax was requested in only 25% of the pharmacies. All orders were delivered on time, but without proof of dispensing. The medication was incorrect in one of the deliveries. Six (25%) product labels were incomplete (16.3% for absence of drug regimen; 8.7% for absence of physician/patient identification). Only 11 (45.8%) of the samples exhibited satisfactory quality. The cost of the compounded drug ranged from R$20.40 to R$44.00 (mean: R$31.18). No association was found between drug quality and cost, delivery or geographic location. In conclusion, the majority of compounding pharmacies need to make adjustments in order to meet the requirements of Brazilian legislation and ensure the quality of pharmaceutical services offered to the population.

Comparison of pharmacopeial statistical methods applied in microbiological assay for antibiotics potency determination using parallel lines and three-dose level

Pharmaceutical equivalence studies, useful for checking the interchangeability of generic medicines and their respective innovator medicines, have been carried out in Brazil since 1999, as a consequence of the establishment of the generic medicine policy. For medicines containing antibiotics, microbiological assays are often the most appropriate method. However, the statistical methods applied in these assays are not widely known due to the difficult access to official codes and/or little knowledge of the statistical tools of analysis. Thus, the aim of this work was to compare the statistical methods for determining the potency of antibiotics through the cylinder-plate method using parallel lines and a three-dose level model, as described in the Brazilian Pharmacopeia (4th edition, 1988), British Pharmacopoeia 2011, European Pharmacopoeia (7th edition), The International Pharmacopoeia (4th edition), and United States Pharmacopeia (34th edition). The assay is illustrated with the antibiotic ofloxacin, and details on orthogonal coefficients, normality test, homogeneity of variance test, and detection of outliers are discussed. The calculations obtained by statistical analyses from different pharmacopeias lead to the same final interpretation. In practice, with the availability of alternative pharmacopeial methods, the analyst can choose the most appropriate statistical calculation to be used.

Os estudos de equivalência farmacêutica, úteis na verificação da intercambialidade entre os medicamentos genéricos e respectivos medicamentos de referência, têm sido realizados no Brasil desde 1999, como consequência do estabelecimento da política de medicamentos genéricos. Para medicamentos contendo antibióticos, os ensaios microbiológicos são, muitas vezes, o método mais adequado. Entretanto, os métodos estatísticos aplicados nesses ensaios não são amplamente conhecidos devido à dificuldade de acesso aos compêndios oficiais e/ou pouca compreensão das ferramentas estatísticas de análises. Portanto, o objetivo desse trabalho foi comparar os métodos estatísticos para determinação de potência de antibióticos pelo delineamento por retas paralelas e três níveis de doses, descritos nas farmacopeias Brasileira 4. ed. (1988), Britânica 2011, Europeia 7. ed., Internacional 4. ed. e na Farmacopeia dos Estados Unidos 34. ed. (2011). O ensaio é exemplificado com o antibiótico ofloxacino e detalhes sobre coeficientes ortogonais, teste de normalidade, teste de homogeneidade de variância e detecção de outliers são discutidos. Os cálculos obtidos pelas análises estatísticas segundo as diferentes farmacopeias resultaram na mesma interpretação final. Na prática, métodos farmacopéicos alternativos permitem ao analista a escolha do cálculo estatístico mais apropriado a ser utilizado.

Inflamação na doença renal crônica: papel de citocinas / Inflammation in chronic kidney disease: the role of cytokines

A doença renal crônica (DRC) é um grave problema de saúde pública cuja prevalência tem aumentado nos últimos anos. Apresenta caráter progressivo e está associada à elevada morbidade e mortalidade. Inúmeros fatores estão associados à instalação e progressão da DRC, tais como obesidade, hipertensão arterial e diabetes mellitus. Além desses fatores, existem evidências de inflamação na fisiopatologia da DRC. Diversas citocinas e quimiocinas têm sido detectadas no plasma e urina de pacientes em estágios precoces da DRC e também relacionadas às complicações da doença. A expressão desses mediadores e a lesão renal sofrem interferência de fármacos como inibidores de enzima conversora de angiotensina (ECA), estatinas e antagonistas de receptores de citocinas. A modulação da resposta imuno-inflamatória pode se tornar alvo para tratamento da DRC. O objetivo deste artigo de revisão foi resumir as evidências científicas do pa-pel da inflamação na DRC, destacando-se os efeitos de citocinas e quimiocinas.

Chronic kidney disease (CKD) is a serious public health problem whose prevalence has increased in the last few years. Its progression is associated with high morbidity and mortality. Several factors are associated with the onset and progression of CKD, such as obesity, hypertension and diabetes mellitus. Beyond these factors, there is evidence of a pathophysiological role for inflammation in CKD. Several cytokines and chemokines have been detected in the plasma and urine of patients at early stages of CKD, and have also been related to CKD complications. The expression of these mediators and renal injury may be influenced by drugs such as angiotensin-converting enzyme inhibitors, statins and antagonists of cytokine receptors. Modulation of the immune-inflammatory response can become a target for CKD treatment. The aim of this study was to review the scientific evidence on the role of inflammation in CKD, especially the effects of cytokines and chemokines.

Assessment of the genetic risks of a metallic alloy used in medical implants

The use of artificial implants provides a palliative or permanent solution for individuals who have lost some bodily function through disease, an accident or natural wear. This functional loss can be compensated for by the use of medical devices produced from special biomaterials. Titanium alloy (Ti-6Al-4V) is a well-established primary metallic biomaterial for orthopedic implants, but the toxicity of the chemical components of this alloy has become an issue of concern. In this work, we used the MTT assay and micronucleus assay to examine the cytotoxicity and genotoxicity, respectively, of an extract obtained from this alloy. The MTT assay indicated that the mitochondrial activity and cell viability of CHO-K1 cells were unaffected by exposure to the extract. However, the micronucleus assay revealed DNA damage and an increase in micronucleus frequency at all of the concentrations tested. These results show that ions released from Ti-6Al-4V alloy can cause DNA and nuclear damage and reinforce the importance of assessing the safety of metallic medical devices constructed from biomaterials.

Quality evaluation of simvastatin compounded capsules / Avaliação da qualidade de cápsulas manipuladas de sinvastatina

Simvastatin is commercially available as tablets and compounded capsules in Brazil. Very few reports regarding these capsules' quality, and consequently their efficacy, are available. The pharmaceutical quality of 30 batches of 20 mg simvastatin capsules from the market was evaluated by weight determination, content uniformity, disintegration (Brazilian Pharmacopeia), assay and dissolution test (USP32 tablet monograph). A HPLC method was developed for assay, content uniformity and dissolution test, and specifications were also established. Out of the 30 batches evaluated, 29 showed capsule disintegration within 45 min and individual weight variation was within ±10 percent or ±7.5 percent relative to average weight, for < or > 300 mg, respectively. Only 27 batches met dissolution test criteria with values >80 percent of the labeled amount in 45 min; 21 batches showed simvastatin content between 90.0-110.0 percent of the labeled amount and 19 batches had at least 9 out of 10 capsules with content uniformity values between 85.0-115.0 percent of the labeled amount with RSD<6.0 percent. Only 14 of all (30) batches fully met pharmacopeial quality standards. The establishment of test conditions and specification parameters for simvastatin capsules showed that there are relevant pharmacopeial quality differences between batches compounded by different pharmacies. For 53.33 percent of the tested products hypercholesterolemic treatment efficacy may be compromised.

No Brasil, a sinvastatina está comercialmente disponível na forma de comprimidos e cápsulas manipuladas. Poucos relatos estão disponíveis sobre a qualidade e, consequentemente, a eficácia dessas cápsulas. A qualidade de 30 lotes de sinvastatina 20 mg cápsulas do mercado foi avaliada através da determinação de peso, uniformidade de conteúdo, desintegração (Farmacopéia Brasileira), doseamento e teste de dissolução (monografia comprimidos USP32). Método por CLAE foi desenvolvido para o doseamento, uniformidade de conteúdo e teste de dissolução; além disso, especificações foram estabelecidas. Dos 30 lotes avaliados, 29 apresentaram desintegração da cápsula até 45 min e a variação do peso individual foi ± 10 por cento ou ± 7,5 por cento em relação ao peso médio, se < ou > 300 mg, respectivamente. Apenas 27 lotes preencheram os critérios do teste de dissolução com valores > 80 por cento da quantidade rotulada, em 45 min, 21 lotes apresentaram conteúdo de sinvastatina entre 90,0-110,0 por cento do valor rotulado e 19 lotes apresentaram pelo menos 9 em 10 cápsulas, com valores de uniformidade de conteúdo entre 85,0 -115,0 por cento da quantidade rotulada com RSD < 6,0 por cento. Apenas 14 de todos os lotes (30) atenderam completamente os padrões de qualidade farmacopéicos. O estabelecimento das condições para os testes e de especificações para os parâmetros das cápsulas de sinvastatina mostrou que houve diferenças relevantes na qualidade farmacopeica entre os lotes das cápsulas manipuladas por distintas farmácias. A eficácia do tratamento hipercolesterolêmico poderia estar comprometida para 53,33 por cento dos produtos testados.

Conhecimento de pacientes e familiares sobre a doença renal crênica e seu tratamento conservador / Patients and their family’s knowledge about chronic kidney disease and its treatment / Conocimientos de los pacientes y familiares acerca de la enfermedad renal cronica y su tratamiento conservador

Com este estudo realizado no Ambulatório de Nefrologia Pediátrica do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), teve-se como objetivo avaliar o conhecimento de pacientes portadores de doença renal crônica(DRC) e de seus familiares sobre a doença e seu tratamento conservador. A população do estudo foi composta de 75pacientes e seus familiares. A coleta de dados constou de uma entrevista feita ao paciente, quando maior de 12 anos em condições de responder, ou ao cuidador principal sobre a doença, tratamento e dieta. Os resultados mostraram que 54,7% dos informantes possuíam conhecimento insuficiente e que o informante ter entre 12 e 30 anos (OR= 3,44)e o paciente estar a 5 anos ou menos no programa (OR= 2,77) foram estatisticamente associados ao conhecimento insuficiente. O estudo mostrou a necessidade de reavaliação das estratégias que vêm sendo utilizadas nas atividades educativas, tornando-as mais adequadas a cada paciente, levando em consideração sua capacidade de compreensão e experiências acumuladas.

This study was developed in the Pediatric Nephrology Ambulatory at the University Hospital of the Federal University of Minas Gerais. Its objective was to evaluate the patients and their family’s knowledge about chronic kidney disease(CKD) and its treatment. The study population comprised 75 patients and their families. Data was collected though interview with a patient (or his/her caretaker) older than 12 years of age and capable of answering the questions that dealt with the disease, its symptoms, treatment and diet. The data showed that 54.7% of the informants had poor knowledge about their disease and its treatment. Two conditions were statistically related to this poor knowledge: the age of the people interviewed being that between 12 and 30 years old (OR= 3, 44) and their participation in the Program being less than 5 years (OR= 2, 77). This study showed the necessity of reevaluating the strategies that are being used in educational activities that need to be more adequate to each patient and that should take into consideration their ability to understand the condition and their own experiences with the whole process.

Este estudio fue realizado en la Unidad de Nefrología Pediátrica del Hospital das Clínicas de la Universidad Federal de Minas Gerais (UFMG) con el objeto de evaluar el conocimiento de los pacientes con enfermedad renal crónica (ERC) y de sus familiares cuidadores sobre la enfermedad, su tratamiento conservador y dieta. La población del estudio estaba compuesta por 75 pacientes y sus familiares. La recogida de datos consistió en una entrevista al paciente (si tenía más de 12 años y estaba en condiciones de responder) o al cuidador principal acerca de la enfermedad, el tratamiento y la dieta. Los resultados mostraron que 54,7% de los informantes tenían conocimiento insuficiente; los informantes entre12 y 30 años de edad (OR=3,44) y los pacientes con menos de 5 años en el programa (OR= 2,77) estadísticamente fueron asociados al conocimiento insuficiente. El estudio demostró la necesidad de efectuar una reevaluación de las estrategias utilizadas en las actividades educativas con miras a tornarlas más adecuadas a cada paciente, teniendo encuenta su capacidad de entender y las experiencias acumuladas.

Transtornos mentais e qualidade de vida em crianças e adolescentes com doença renal crônica e em seus cuidadores / Mental disorders and quality of life in pediatric patients with chronic kidney disease

A melhoria da atenção médica resultou em um aumento da sobrevida de pacientes pediátricos com doença renal crônica (DRC). Entretanto, as repercussões clínicas e as consequências do tratamento são inúmeras. O objetivo deste estudo foi a realização de uma revisão desta temática, incluindo estudos publicados desde 1980 até a atualidade, que abordam também a influência de outras doenças crônicas na população pediátrica. Foram revisadas as repercussões clínicas e as alterações neurológicas e neurocognitivas da DRC que podem influenciar na saúde mental e qualidade de vida destes pacientes. Estudaram-se também os efeitos emocionais e sociais da DRC e a sua influência na adesão à terapêutica e controle clínico nas diferentes modalidades de tratamento conservador, dialítico e transplante. Observa-se um comprometimento da qualidade de vida e da saúde mental desses pacientes. A compreensão das repercussões psicossociais e a tentativa de minimizá-las amenizam o impacto da doença renal no paciente. Esse cuidado mais adequado, completo e humanizado pode resultar na melhora da adesão e do controle clínico.

In the last decades there was a striking improvement in survival of children with chronic kidney disease. As life expectancy has increased in children with CKD, concern has risen about its physical, psychological, and social consequences. The aim of this study was to perform a review of the psychological consequences of CKD in the pediatric population, with the focus on mental disorders and on quality of life. We also reviewed studies regarding emotional and social effects and their possible influences on treatment adhesion. Several studies have shown impairment on quality of life and on mental health of these patients. A better understanding of emotional consequences of CKD in pediatric population possibly can reduce the impact of the renal disease on children. Moreover, a comprehensive approach of children and adolescents with CKD might result in a better clinical control and improve treatment adhesion.

Chromatographic evaluation and antimicrobial activity of Neem (Azadirachta indica A. Juss., Meliaceae) leaves hydroalcoholic extracts / Avaliação cromatográfica e atividade antimicrobiana de extratos hidroalcoólicos de folhas de Nim (Azadirachta indica A. Juss., Meliaceae)

Neem (Azadirachta indica) is an Indian tree well known for its several pharmacological activities, including antimicrobial activity. More than 300 composites have already been isolated and azadirachtin (AZA) is its main active component. In the present work, Neem leaves hydroalcoholic extracts were prepared by percolation in 96 percent ethanol different concentrations (50 percent, 60 percent, 70 percent, 80 percent and 90 percent (v/v)). The presence of AZA was tested by TLC by eluting the extracts and a standard solution of AZA through a chromatographic plate developed with anisaldehyde/sulfuric acid solution followed by heating. By HPLC, extracts elution took place on a C18 column, water:acetonitrile (60:40) as mobile phase, 1.0 mL/min flow rate and detection at λ217 nm. The extracts did not display AZA spots or peaks, however, they were tested against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts and a mold fungus. The extracts were tested in different increasing concentrations, in order to detect a dose-dependent relationship of the activity. Despite the absence of AZA, the 70 percent and 80 percent (v/v) ethanol extracts showed activity against Staphylococcus aureus. However, this activity was not dose-dependent according to Tukey's test (q0,05;3;7).

O Nim (Azadirachta indica A. Juss., Meliaceae) é uma árvore indiana conhecida por suas várias atividades farmacológicas, entre elas, a ação antimicrobiana. Dentre mais de 300 compostos já isolados, a azadiractina (AZA) é seu principal componente ativo. No presente trabalho, foram preparados extratos hidroalcoólicos de folhas de Nim em diferentes concentrações de etanol 96 por cento V/V (50 por cento, 60 por cento, 70 por cento, 80 por cento e 90 por cento (V/V)) por meio de percolação estática. A presença de AZA foi verificada por CCD, com eluição dos extratos e da solução padrão de trabalho AZA em cromatoplaca e revelação por solução de anisaldeído/ácido sulfúrico, seguida de aquecimento. Por CLAE, os extratos e da solução padrão de trabalho AZA foram eluídos em coluna C18, fase móvel água:acetonitrila (60:40), fluxo 1,0 mL/min e detecção em λ217 nm. Não foi verificada a presença de manchas ou picos correspondentes a AZA nos extratos. Entretanto, a sua atividade foi investigada contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas, leveduras e um fungo filamentoso. Os extratos foram testados em diferentes concentrações para avaliar a relação dose-resposta. Apesar da ausência de AZA, os extratos hidroalcoólicos a 70 por cento e 80 por cento (V/V) de etanol 96 por cento apresentaram atividade contra Staphylococcus aureus. Porém, não houve relação dose-efeito, de acordo com o teste de Tukey (q0,05;3;7).

Caracterização do fármaco hipoglicemiante glibenclamida / Characterization of the hypoglycemic drug glibenclamide

A glibenclamida (GLIB) é um fármaco de segunda geração, administrado por via oral na forma de comprimidos, utilizado para o tratamento de Diabetes mellitus. GLIB possui baixa solubilidade aquosa, o que pode levar a uma baixa liberação a partir de formas farmacêuticas sólidas no teste de dissolução e, portanto, a variabilidades no tratamento. Neste estudo, avaliam-se as características da matéria-prima GLIB, que podem influenciar o perfil de dissolução, e conseqüentemente, a biodisponibilidade, por meio de técnicas tais como, adsorção de nitrogênio, difração de raio laser, análise térmica, espectroscopia por IV/UV e difração de raios X.

Glibenclamide (GLIB) or glyburide, a second-generation hypoglycemic agent is orally used in the form of tablets for the treatment of diabetes mellitus. Bulk GLIB has a low aqueous solubility and it may yield low drug release in the dissolution test, causing variabilility in the treatment. This work evaluates the bulk GLIB features, which may influence drug release profile, hence, bioavailability, by means of techniques such as nitrogen sorption analysis, laser diffraction, thermal analysis, IV/UV spectroscopy and X-ray analysis.