Avaliação morfológica do cólon proximal de ratos diabéticos suplementados com extrato de Agaricus blazei murrill / Morphological evaluation of the proximal colon of diabetic rats supplemented with agaricus blazei murrill extract / Evaluación morfológica del colon proximal de ratas diabéticas suplementadas con extracto de agaricus blazei murrill

O diabetes mellitus tipo I é resultado da absoluta deficiência de insulina, estando associado à anormalidades no metabolismo. Transtornos no trato gastrointestinal, tais como vômitos, disfagia e diarreia são frequentes no diabetes, sendo relacionados a alterações na morfologia intestinal e no sistema nervoso entérico. Compostos ricos em antioxidantes vem sendo utilizados como prevenção ou tratamento do diabetes. Agaricus blazei Murrill possui grande interesse farmacológico pelas propriedades anti-inflamató- rias, hipoglicêmicas e antioxidantes. Neste trabalho, avaliamos a integridade estrutural da parede e inervação intrínseca do cólon proximal em modelo experimental de diabetes induzido por estreptozotocina, tratados ou não com A. blazei. Ratos Wistar foram dividi- dos em grupos: normoglicêmicos (N), diabéticos (D) e com suplementação (NB e DB) por gavagem do extrato hidroalcoólico de Agaricus blazei (200mg/Kg), por 120 dias. Amostras do cólon proximal foram destinadas à técnicas histológicas para análise mor- fométrica da túnica mucosa, profundidade das criptas, muscular da mucosa, muscular ex- terna e parede total, número de células caliciformes e avaliação morfoquantitativa da pop- ulação mioentérica. O diabetes promoveu redução da muscular externa e muscular da mucosa com aumento na profundidade das criptas e área nuclear neuronal. O extrato promoveu hipertrofia da mucosa e muscular da mucosa. Houve manutenção na espessura da parede total, número de células caliciformes e na população neuronal mioentérica no diabetes e na suplementação. Conclui-se que o diabetes induzido por estreptozotocina e a suplementação com o extrato de Agaricus blazei causam ajustes morfológicos nas túnicas intestinais, sem interferir na parede e inervação mioentérica do cólon proximal, preservando a morfofisiologia absortiva e motora deste segmento

Type I diabetes mellitus is a result of absolute insulin deficiency and is associated with abnormalities in metabolism. Disorders in the gastrointestinal tract, such as vomiting, dysphagia and diarrhea are common in diabetes, being related to changes in intestinal morphology and enteric nervous system. Antioxidant rich compounds have been used as prevention or treatment of diabetes. Agaricus blazei Murrill is highly pharmacologically interested in anti-inflammatory, hypoglycemic and antioxidant properties. In this work, we evaluated the structural integrity of the wall and intrinsic innervation of the proximal colon in an experimental model of streptozotocin-induced diabetes, treated or not with A. blazei Wistar rats were divided into groups: normoglycemic (N), diabetic (D) and supplementation (NB and DB) by gavage of the hydroalcoholic extract of Agaricus blazei (200mg / kg) for 120 days. Samples of the proximal colon were used for histological techniques for morphometric analysis of the mucosa, depth of the crypts, muscularis mucosa, external muscular and total wall, number of goblet cells and morpho-quantitative evaluation of the myenteric population. Diabetes promoted reduction of muscularis mucosa and external muscular with increased depth of the crypts and nuclear neuronal area. The extract promoted mucosa and muscular of the mucosa hypertrophy. There were maintenance of total wall thickness, number of goblet cells and in the myenteric neuronal population in diabetes and supplementation. It is concluded that streptozotocin-induced diabetes and supplementation with Agaricus blazei extract cause morphological adjustments in the intestinal tunica, without interfering with the wall and myenteric innervation of the proximal colon, preserving the absorptive and motor morphophysiology of this segment.

La diabetes mellitus tipo I es el resultado de la deficiencia absoluta de insulina y se asocia con anomalías en el metabolismo. Los trastornos del tracto gastrointestinal, como vómitos, disfagia y diarrea son frecuentes en la diabetes, estando relacionados con cambios en la morfología intestinal y en el sistema nervioso entérico. Los compuestos ricos en antioxidantes se han utilizado como prevención o tratamiento de la diabetes. Agaricus blazei Murrill está muy interesado farmacológicamente en propiedades antiinflamatorias, hipoglucémicas y antioxidantes. En este trabajo, se evaluó la integridad estructural de la pared e inervación intrínseca del colon proximal en un modelo experimental de diabetes inducida por estreptozotocina, tratada o no con ratas A. blazei Wistar, divididas en grupos: normoglucémico (N), diabético (D) y suplementación (NB y DB) por sonda del extracto hidroalcohólico de Agaricus blazei (200mg/kg) por 120 días. Se utilizaron muestras del colon proximal para técnicas histológicas de análisis morfométrico de la mucosa, profundidad de las criptas, mucosa muscular, pared externa muscular y total, número de células caliciformes y evaluación morfo-cuantitativa de la población mientérica. La diabetes promovió la reducción de la muscular de la mucosa y de la muscular externa con el aumento de la profundidad de las criptas y del área neuronal nuclear. El extracto promovió la hipertrofia mucosa y muscular de la mucosa. Hubo mantenimiento del espesor total de la pared, número de células caliciformes y en la población neuronal mientérica en diabetes y suplementación. Se concluye que la diabetes inducida por estreptozotocina y la suplementación con extracto de Agaricus blazei causan ajustes morfológicos en la túnica intestinal, sin interferir con la pared e inervación mientérica del colon proximal, conservando la morfofisiología absortiva y motora de este segmento.

Tumor carcinoide de células caliciformes apendicular con metástasis endometrial

El tumor carcinoide de células caliciformes es una neoplasia mixta casi exclusiva del apéndice, con diferenciación neuroendocrina y mucinosa. La afección metastásica endometrial por carcinomas extragenitales, especialmente el tipo de células de anillo de sello, es rara. Se presenta un caso de tumor carcinoide de células caliciformes apendicular con metástasis endometrial. Se trató de paciente femenina de 70 años quien presentó sangrado genital. El examen ginecológico mostró sangrado genital en moderada cantidad de color rojo-marrón y cuello uterino endurecido. En la biopsia endometrial se halló nidos de células de anillo de sello. La impresión diagnóstica provisional fue carcinoma mal diferenciado de probable origen intestinal. Durante la intervención, el útero tenía consistencia pétrea, el apéndice cecal era fibrótico y engrosado y el epiplón engrosado con nódulos tumorales. Las secciones anatómicas del cuello y cuerpo uterino mostraron focos tumorales. En el apéndice cecal se encontró acúmulos de pequeño tamaño compuestos por células caliciformes. La inmunotinción fue positiva a sinaptofisina, CDX-2, EMA, CK20, CD56 focal. Estos hallazgos confirmaron el diagnóstico de tumor carcinoide de células caliciformes, un tumor caracterizado por infiltración de la pared apendicular por pequeños nidos o cordones de células caliciformes con mucina intracitoplasmática y expresión focal de marcadores neuroendocrinos. Estas neoplasias tienen un comportamiento más agresivo que los tumores neuroendocrinos. La metástasis endometrial es rara y puede ser confundida con un carcinoma primario de células de anillo de sello. Se debe considerar como diagnóstico diferencial después de excluir otros tumores primarios.

Goblet cell carcinoid tumor is an almost exclusive mixed neoplasm of the appendix with neuroendocrine and mucinous differentiation. Endometrial metastatic involvement by extragenital carcinomas, especially the signet ring cell type, is rare. A case of appendiceal goblet cell carcinoid tumor with endometrial metastasis is presented. This was a 70-year-old female patient who presented with genital bleeding. The gynecological examination showed moderate red-brown genital bleeding and hardened cervix. Endometrial biopsy reported nests of signet ring cells. The provisional diagnostic impression was poorly differentiated carcinoma of probable intestinal origin. During surgery, the uterus had a stony consistency, the cecal appendix was fibrotic and thickened, and the omentum was thickened with tumor nodules. Anatomical sections of the cervix and uterine body showed tumor foci. In the cecal appendix, small clusters composed of goblet cells were found. Immunostaining was positive for synaptophysin, CDX-2, EMA, CK20, focal CD56. These findings confirmed the diagnosis of goblet cell carcinoid tumor, a tumor characterized by infiltration of the appendiceal wall by small nests or cords of goblet cells with intracytoplasmic mucin and focal expression of neuroendocrine markers. These neoplasms have a more aggressive behavior than neuroendocrine tumors. Endometrial metastasis is rare and can be mistaken for a primary signet ring cell carcinoma. It should be considered as a differential diagnosis after other primary tumors have been excluded.

Anatomy and histology of the digestive tract and immunolocalization of Npy in the fish Cichlasoma dimerus (Cichliformes: Cichlidae) / Anatomía e histología del tracto digestivo e inmunolocalización del Npy (péptido orexigénico) en el pez Cichlasoma dimerus (Cichliformes: Cichlidae)

Abstract Introduction: The digestive tract of Neotropical cichlids has not been deeply studied, and it is a fundamental topic for understanding fish physiology, nutrition, trophic associations, and evolution. Objective: To describe anatomically and histologically the digestive tract of the Neotropical cichlid fish Cichlasoma dimerus and to immunolocalize the orexigenic peptide (Npy) along the intestine. Methods: We euthanized 14 adult individuals and fixed the organs in Bouin´s solution; we stained 7 μm thick paraffin sections for general description and with Alcian Blue (pH = 2.5, AB) and Periodic acid-Schiff (PAS) to identify acid or neutral glycoconjugates, respectively. Additionally, we performed immunohistochemistry for Npy in 3 adult individuals. We manually counted PAS- and AB-positive cells, and Npy-immunoreactive cells per fold. Results: There is a short oesophagus, a sac-like stomach, and a tubular intestine with two loops. The oesophagus has a stratified epithelium with a high density of PAS- and AB-positive goblet cells and striated muscle fibers in the tunica muscularis. The stomach mucosa is formed by simple columnar epithelium. The intestine has a simple columnar epithelium, with brush border and interspersed PAS- and AB-positive goblet cells, and Npy-immunoreactive cells. There is an ileorectal valve in the transition between the posterior intestine and the rectum. This last gut portion has goblet cells and a thicker tunica muscularis. Conclusions: C. dimerus shares features with other Neotropical cichlids, but the goblet cells and gastric glands distribution seems to be unique for the species. To our understanding, this is the first work to describe Npy-immunoreactive cells distribution in the intestine of a Neotropical cichlid fish.

Resumen Introducción: El tracto digestivo de los cíclidos neotropicales no ha sido profundamente estudiado y es un tema fundamental para entender la fisiología, nutrición, asociaciones tróficas y evolución de los peces. Objetivo: Describir anatómica e histológicamente el tracto digestivo del pez cíclido neotropical Cichlasoma dimerus e inmunolocalizar el péptido orexigénico (Npy) a lo largo del intestino. Métodos: Sacrificamos 14 individuos adultos y fijamos los órganos en solución de Bouin; teñimos secciones de parafina de 7 μm de espesor para una descripción general y con azul alcián (pH = 2.5, AB) y ácido periódico-Schiff (PAS) para identificar glicoconjugados ácidos o neutros, respectivamente. Además, en 3 individuos adultos se realizaron inmunohistoquímicas contra Npy. Contamos manualmente las células PAS y AB positivas, y las células inmunorreactivas a Npy por pliegue. Resultados: Hay un esófago corto, un estómago en forma de saco y un intestino con dos vueltas. El esófago tiene un epitelio estratificado con una alta densidad de células caliciformes PAS- y AB- positivas y fibras esqueléticas estriadas en las capas musculares. La mucosa del estómago está revestida por epitelio simple cilíndrico. El epitelio intestinal es simple cilíndrico con chapa estriada y células caliciformes PAS- y AB- positivas intercaladas, y células inmunorreactivas a Npy. Hay una válvula ileorrectal en la transición entre el intestino posterior y el recto. Esta última porción intestinal tiene células caliciformes y una túnica muscular más gruesa. Conclusiones: C. dimerus comparte características con otros cíclidos neotropicales, pero la distribución de las células caliciformes y las glándulas gástricas, serían rasgos propios de esta especie. A nuestro entender, este es el primer trabajo que describe la distribución de células inmunorreactivas a Npy en el intestino de un pez cíclido neotropical.

Comparative study of the histomorphological structure of the small intestine of Lonchura striata and Copsychus saularis / Estudio comparativo de la estructura histomorfológica del intestino delgado de Lonchura striata y Copsychus saularis

SUMMARY: Six Lonchura striata and six Copsychus saularis birds were selected in this study, morphological index of the small intestine was measured by quantitative biology and image analysis. The changes of goblet cells and Na+/K+ATPase were detected by AB-PAS staining and ELISA to inform the different mechanisms of the digestion and absorption of nutrients between the Lonchura striata and Copsychus saularis. The villus height, crypt depth and muscle thickness of each segment of small intestine of Lonchura striata were smaller than those of Copsychus saularis, and the difference of ileum muscle thickness was significant. In addition, the ileum villus height/crypt depth (VH/CD) value of Lonchura striata was significantly less than that of Copsychus saularis. The number of goblet cells in duodenum and jejunum of Lonchura striata and Copsychus saularis had no significant difference, but the number of goblet cells in ileum of Copsychus saularis was significantly larger than that of Lonchura striata. The vitality of Na+/K+-ATPase in different intestinal segments of the Lonchura striata and the Copsychus saularis was different. The vitality of Na+/K+-ATPase in the Lonchura striata was significantly higher than that of the Copsychus saularis. It can be concluded that the digestion and absorption capacity of Copsychus saularis and Lonchura striata are significantly different, and the reason may be due to their different diets and intestinal floras.

RESUMEN: En este estudio se seleccionaron seis aves Lonchura striata y seis Copsychus saularis, a las cuales se midió mediante biología cuantitativa y análisis de imágenes el índice morfológico del intestino delgado. Los cambios de las células caliciformes y Na+/K+ATPasa se detectaron mediante tinción AB- PAS y ELISA para informar los diferentes mecanismos de digestión y absorción de nutrientes entre Lonchura striata y Copsychus saularis. La altura de las vellosidades, la profundidad de las criptas y el grosor del músculo de cada segmento del intestino delgado de Lonchura striata fueron menores que los de Copsychus saularis, y se observó una diferencia significativa en el grosor de la músculatura del íleon. Además, el valor de la altura de la vellosidad del íleon/profundidad de la cripta (VH/CD) de Lonchura striata fue significativamente menor que el de Copsychus saularis. En el número de células caliciformes del duodeno y del yeyuno de Lonchura striata y Copsychus saularis no hubo una diferencia significativa, pero el número de células caliciformes en el íleon de Copsychus saularis fue significativamente mayor que el de Lonchura striata. Hubo diferencias en la vitalidad de Na+/K+-ATPasa en diferentes segmentos intestinales de Lonchura striata y Copsychus saularis. La vitalidad de Na+/K+-ATPasa en Lonchura striata fue significativamente mayor que la de Copsychus saularis. Se puede concluir que la capacidad de digestión y absorción de Copsychus saularis y Lonchura striata son significativamente diferentes, posiblemente debido a sus distintas dietas y floras intestinales.

Anatomía general, histología y morfometría del sistema digestivo del pez Pterophyllum scalare (Perciformes: Cichlidae) / Gross anatomy, histology and morphometry of the digestive tract in the fish Pterophyllum scalare (Perciformes: Cichlidae)

Introducción: El pez escalar (Pterophyllum scalare) es una de las principales especies de peces ornamentales comercializados de Sur América. Objetivo: Describir histológica y morfométricamente el tracto digestivo del pez tropical P. scalare. Métodos: Se utilizaron 19 individuos adultos, y se calculó el coeficiente intestinal. Se realizó una descripción macroscópica e histológica del esófago, estómago e intestino (región anterior parte a, anterior parte b, media y posterior). Las muestras fueron procesadas en parafina, se obtuvieron cortes de 5 µm, que fueron teñidos con H&E y P.A.S. Se realizó conteo de células P.A.S +. Para la morfometría se digitalizaron los cortes y se midió el área y perímetro del lumen, y el área tisular para cada región. Resultados: P. scalare presenta un esófago corto, un estómago en forma de saco ciego poco muscular junto a un intestino con una longitud similar a su tamaño, coeficiente intestinal (1.66 +/- 0.52). Se identificaron cuatro capas constitutivas: mucosa, submucosa, muscular y en algunas regiones serosa. El esófago se destacó por ser la región con mayor número de células caliciformes P.A.S. + y mayor área tisular. En cuanto al área y perímetro luminar, la región anterior parte a del intestino fue la de mayor valor. Conclusiones: A partir del coeficiente intestinal (1.66 +/- 0.52), y las características histológicas y morfométricas de los órganos evaluados, se puede decir que P. scalare presenta un hábito alimenticio omnívoro con preferencia de presas blandas.

Introduction: Ornamental Angel fish (Pterophyllum scalare) is one of the main commercialized species from South America, with an important number of national and international dealers. Objective: To make a histological and morphometric description of P. scalare digestive tract. Methods: Nineteen adult individuals were used. Intestinal coefficient values were obtained, and a macroscopic and microscopic description of esophagus, stomach, and intestine (anterior, middle and posterior) was carried out. Samples were processed for paraffin embedding, and 5 µm sections were stained with H&E and P.A.S. Positive P.A.S. cells were counted. Lumen area and tissue area were measured in representative digitalized sections from each region. Results: P. scalare exhibited a short esophagus, followed by a blind bag shaped, scarcely muscular stomach, and a short intestine (intestinal coefficient 1.66 +/- 0.52). Four constitutive tissue layers were identified: mucosa, submucosa, muscular and in some areas also a serosa layer. Esophagus exhibit abundant globet P.A.S. + cells and shows the larger tisular area was observed. Luminal area and perimeter are larger in anterior intestinal region. Conclusions: The intestinal coefficient value (1.66 +/- 0.52), and the histological and morphometric characteristics of the evaluated organs, suggest that P. scalare is omnivorous with soft prey preferences.

[Conjunctival impression cytology in patients with normal and impaired OSDI scores]. / Citología de impresión conjuntival en pacientes con valores OSDI normales y alterados.

PURPOSE: To describe goblet cell density and Nelson grading in different areas of the ocular surface using conjunctival impression cytology (CIC) among patients with normal and impaired Ocular Surface Disease Index (OSDI) scores. MATERIAL AND METHODS: Patients (n=166) under assessment for dry eye were recruited between 2011 and 2012 and classified according to the OSDI score in 4 categories (normal and impaired). Cytological study (CIC plus Papanicolaou staining) using the Nelson grading system, with modifications in staging, and goblet cell counting were performed on the nasal, temporal, inferior, and superior bulbar conjunctival surfaces. RESULTS: Nelson grading was significantly higher in patients with a severely impaired OSDI score (1.41±0.14) compared to normal patients (0.86±0.09) (P<.01). Goblet cell density was significantly reduced in patients with a severely impaired OSDI score (310.24±56.24 cells per sample) compared with normal subjects (497.31±50.07 cells per sample) (P<.001). Compared with the photoexposed bulbar conjunctiva, goblet cell density on the non-photoexposed conjunctiva was significantly higher both in patients with mild (P<.01) and moderate (P<.001) OSDI scores. CONCLUSION: Patients with severely impaired OSDI scores have less goblet cells and a higher Nelson grade. Goblet cells are more abundant on the non-photoexposed conjunctiva.

Effects of benzalkonium chloride and cyclosporine applied topically to rabbit conjunctiva: a histomorphometric study / Efeitos do uso tópico do conservante cloreto de benzalcônio e ciclosporina na conjuntiva de coelhos: estudo histomorfométrico

ABSTRACT Purpose: Chronic instillation of benzalkonium chloride, a preservative, has inflammatory effects on the ocular surface. However, addition of the anti-inflammatory agent cyclosporine to a therapeutic protocol may mitigate these effects. This study compared the toxic effects of a 0.1% benzalkonium chloride solution and the possible protective effect of 0.05% cyclosporine when applied topically to the rabbit conjunctiva. Methods: Fifteen age- and weight-matched, female New Zealand white rabbits were categorized into three groups and treated for 30 consecutive days. Group 1, 2, and 3 - benzalkonium chloride received 0.1% every 24 h, 0.05% cyclosporine every 6 h, and both treatments, respectively. In each rabbit, the left eye was subjected to treatment and the right eye was a control. The rabbits were euthanized at after the experiment. Goblet cells and blood vessels were then enumerated in conjunctival tissues stained with periodic acid-Schiff and hematoxylin-eosin, respectively. Differences between treated and untreated eyes and between groups were compared using the t-test and analysis of variance. Results: Benzalkonium chloride treatment, with and without cyclosporine, significantly reduced (p≤0.05) in the number of goblet cells in treatment eyes compared with that in respective control eyes. Alternatively, adding cyclosporine to benzalkonium chloride did not prevent the loss of conjunctival goblet cells, and a significant reduction in the number of goblet cells was noted. Benzalkonium chloride-induced significant increase in the number of new blood vessels was mitigated significantly by the addition of cyclosporine. Conclusion: This study demonstrated the magnitude of conjunctival injury caused by chronic instillation of benzalkonium chloride. Although cyclosporine did not mitigate the effects on goblet cells, its addition minimized inflammatory angiogenesis induced by benzalkonium chloride.

RESUMO Objetivo: A instilação crônica de cloreto de benzal­cônio, um conservante, tem efeitos inflamatórios na superfície ocular. No entanto, a adição do agente anti-inflamatório ciclosporina a um protocolo terapêutico pode atenuar esses efeitos. Este estudo comparou os efeitos tóxicos de uma solução de cloreto de benzalcônio a 0,1% e o possível efeito protetor de ciclosporina a 0,05% quando aplicado topicamente à conjuntiva de coelho. Métodos: Quinze coelhos fêmeas brancos da raça Nova Zelândia, pareados por idade e peso, foram categorizados em três grupos e tratados por 30 dias consecutivos. Os grupos 1, 2 e 3 - receberam cloreto de benzalcônio 0,1% a cada 24h, ciclosporina a 0,005% a cada 6h e ambos os tratamentos, respectivamente. Em cada coelho, o olho esquerdo foi submetido a tratamento e o olho direito foi controle. Os coelhos foram submetidos à eutanásia após o experimento. Células caliciformes e vasos sanguíneos foram então enumerados em tecidos conjuntivais corados com ácido periódico-Schiff e hematoxilina-eosina, respectivamente. As diferenças entre os olhos tratados e não tratados e entre os grupos foram comparadas usando o teste t e análise de variância. Resultados: O tratamento com cloreto de benzalcônio, com e sem ciclosporina, reduziu significativamente (p£0,05) o número de células caliciformes nos olhos tratados em comparação com os olhos controle correspondentes. Alternativamente, a adição de ciclosporina ao cloreto de benzalcônio não impediu a perda de células caliciformes conjuntivais, e foi observada uma redução significativa no número de células caliciformes. O aumento significativo induzido pelo cloreto de benzalcônio no número de novos vasos sanguíneos foi significativamente mitigado pela adição da ciclosporina. Conclusão: Este estudo demonstrou a magnitude da lesão conjuntival resultante da instilação crônica de cloreto de benzalcônio. Embora a ciclosporina não tenha atenuado os efeitos nas células caliciformes, sua adição minimizou a angiogênese inflamatória induzida pelo cloreto de benzalcônio.

Effect of 0, 15% sodium hialuronate and 0, 5% carboxymethylcellulose on tear film breakup time in healthy dogs and in dogs with keratoconjunctivitis sicca / Efeito do hialuronato de sódio a 0, 15% e da carboximetilcelulose sódica a 0, 5% no tempo de ruptura do filme lacrimal de cães saudáveis e com ceratoconjuntivite seca

This study aimed to evaluate the effect of the 0.15% sodium hyaluronate (SH) and of 0.5% carboxymethylcellulose (CMC) on tear film breakup time (TFBUT) in 10 healthy dogs and in 32 eyes of dogs with keratoconjunctivis sicca (KCS). In addition, the goblet cell density (GCD) of this population was quantified. TFBUT was assessed at baseline and at different time points following the instillation of SH and CMC. KCS was graded as mild, moderate, and severe. GCD were quantified from conjunctival biopsies. The number of GCD differed significantly between patients with mild and moderate KCS (P<0.01). TFBUT of healthy dogs increased only for 1 minute after treatment with SH (P<0.01). Regarding baseline and treatments, SH significantly increased TFBUT for up to 30 minutes on the ocular surface, in comparison to CMC, in all categories of KCS (P<0.01). TFBUT and GCD correlated positively when the healthy and diseased eyes were grouped (r=0.41, P=0.006). It can be concluded that in dogs with KCS, SH lasts longer periods on the ocular surface than CMC, but such agents does not increase TFBUT in healthy dogs. Additionally, tear film stability tends to reduce in a linear fashion from the mild to severe form of KCS.(AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos do hialuronato de sódio a 0,15% (HS) e da carboximetilcelulose a 0,5% (CMC) no teste de ruptura do filme lacrimal (TRFL) em 10 cães saudáveis e em 32 olhos de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS). Ademais, quantificou-se a densidade de células caliciformes (DCC) deles. Mensurou-se o TRFL em momentos distintos antes e após a instilação do HS e da CMC. Graduou-se a CCS em leve, moderada e severa. Quantificou-se a DCC a partir de biópsias conjuntivais. A DCC diferiu apenas entre pacientes com CCS leve e severa (P<0,01). Em cães saudáveis, o TRFL se elevou apenas após um minuto do tratamento com HS (P<0,01). Relativamente ao período basal e entre os tratamentos, o HS elevou o TRFL de forma mais eficaz e permaneceu por até 30 minutos na superfície ocular, comparativamente à CMC, em todas as categorias de CCS (P<0,01). Ao se agruparem os olhos saudáveis e os com CCS, o TRFL se correlacionou com a DCC (r=0.41, P=0.006). Conclui-se que o HS permanece por maior tempo na superfície ocular que a CMC em cães com CCS, mas que tais substâncias não elevam o TRFL em cães saudáveis. Ademais, a estabilidade do filme lacrimal tende a se reduzir de modo linear da forma leve até à severa da CCS.(AU)

The effect of low protein on colonic mucosal barrier in pigs / El efecto de baja proteína en la barrera mucosa colónica en cerdos

Reducing nitrogen nutrients concentration in dairy food is economic for pig industry. Here, we used finishing pig as model to investigate the effect on colon mucosal barrier and nutrients absorption after reducing crude protein (CP) in dietary from 16 % to 13 %. The results showed that crypt depth, cells, claudin-1 and E-cadherin expression level will not be changed, which implied the integrity of colon mucosal structure. Furthermore, the expressions of ASCT1, EAAT3 and SGLT1 in colon were also maintained at normal levels in 13 % CP dietary. Interestingly, the CAT1 and GLUT2 expression were increased significantly after reducing CP level to 13 %, which might be attributed to the compensatory nutrients absorption. This study implied that 13 % CP was sufficient to maintain normal colon structure and will not change intestinal morphology, which provided a basis for an ideal economic protein feed formula.

La reducción de concentración de nitrógeno en los alimentos lácteos es económicamente favorable para la industria porcina. En este trabajo se utilizó el cerdo de acabado como modelo para investigar el efecto sobre la barrera de la mucosa del colon y la absorción de nutrientes después de reducir la proteína bruta (CP) en la dieta del 16 % al 13 %. Los resultados mostraron que la profundidad de la cripta, las células globulares, el nivel de expresión de Claudin-1 y E-cadherina no cambiaron, lo que implicaría la integridad de la estructura de la mucosa del colon. Además, las expresiones de ASCT1, EAAT3 y SGLT1 en el colon también se mantuvieron en niveles normales en el 13 % de la dieta de CP. Sin embargo, la expresión de CAT1 y GLUT2 incrementó significativamente después de reducir el nivel de CP a 13 %, lo que podría atribuirse a la absorción de nutrientes compensatorios. Este estudio indicó que el CP del 13 % era suficiente para mantener la estructura normal del colon y no cambiaría la morfología intestinal, lo que proporcionó una base para una fórmula económica ideal para la alimentación con proteínas.

Histochemical differences along the intestine of Corydoras paleatus (Siluriformes: Callichthyidae) / Diferencias histoquímicas a lo largo del intestino de Corydoras paleatus (Siluriformes: Callichthyidae)

AbstractThe Neotropical catfish Corydoras paleatus is a facultative air-breather and the caudal half of the intestine is involved in gas exchange. In South America, air-breathing fishes are found in tropical or sub-tropical freshwaters where the probability of hypoxia is high. The aim of this study was to characterize by traditional histochemical and lectinhistochemical methods the pattern of carbohydrate in the intestinal mucosa. Intestine samples were taken from 25 healthy adult specimens collected in Buenos Aires (Argentina). Samples were fixed by immersion in 10 % buffered formalin and routinely processed and embedded in paraffin wax. Subsequently, these sections were incubated in the biotinylated lectins battery. Labeled Streptavidin-Biotin (LSAB) system was used for detection, diaminobenzidine as chromogen and haematoxylin as a contrast. To locate and distinguish glycoconjugates (GCs) of the globet cells, we used the following histochemical methods: PAS; PAS*S; KOH/ PA*S; PA/Bh/KOH/PAS; KOH/PA*/Bh/PAS; Alcian Blue and Toluidine Blue at different pHs. Microscopically, the general structure of vertebrate intestine was observed and showed all the cell types characteristic of the intestinal epithelium. The cranial sector of catfish intestine is a site of digestion and absorption and its structure is similar to other fish groups. In contrast, enterocytes of the caudal portion are low cuboidal cells; and between these, globet cells and capillaries are observed, these latter may reach the mucosal lumen. Underlying the epithelium, observed a well-developed lamina propria-submucosa made of connective tissue; this layer was highly vascularized and did not exhibit glands. According to histochemistry, the diverse GCs elaborated and secreted in the intestine are associated with specific functions in relation to their physiological significance, with special reference to their role in lubrication, buffering effect and prevention of proteolytic damage to the epithelium together with other biological processes, such as osmoregulation and ion exchange. The lectinhistochemical analysis of the intestinal mucosa reveals the presence of terminal residues of glucose, mannose and galactose. In conclusion, this study has shown that GCs synthesized in the intestine of C. paleatus exhibit a high level of histochemical complexity and that the lectin binding pattern of the intestinal mucosa is characteristic of each species and the variations are related with the multiple functions performed by the mucus in the digestive tract. The information generated here may be a relevant biological tool for comparing and analyzing the possible glycosidic changes in the intestinal mucus under different conditions, such as changes in diet or different pathological stages. Rev. Biol. Trop. 64 (1): 327-340. Epub 2016 March 01.

ResumenEl pez neotropical Corydoras paleatus, de respiración aérea de tipo facultativa, utiliza el sector caudal del intestino para el intercambio gaseoso. En América del Sur, los peces con respiración aérea se encuentran en las aguas dulceacuícolas tropicales y subtropicales, donde la probabilidad de hipoxia es alta. El objetivo de este trabajo fue caracterizar mediante técnicas histoquímicas tradicionales y de lectinhistoquímica el patrón de carbohidratos de la mucosa intestinal. Para ello se utilizaron muestras de intestino de 25 ejemplares sanos adultos recolectados en la provincia de Buenos Aires (Argentina). Las muestras fueron fijadas en formol amortiguado al 10 % y se procesaron para su inclusión en parafina. Posteriormente, los cortes fueron incubados con una batería de lectinas biotiniladas. Se utilizó el sistema de marcado con estreptavidina-biotina (LSAB) para su detección, diaminobencidina como cromógeno y hematoxilina como colorante de contraste. Para localizar y diferenciar los glicoconjugados (GCs) de las células caliciformes, se utilizaron las siguientes técnicas histoquímicas: PAS, PAS*S, PAPS, KOH/PA*S, PA/Bh/KOH/PAS, KOH/PA*/Bh/PAS, Azul Alcian y Azul de Toluidina a diferentes pHs. Microscópicamente, se observa la estructura general del intestino de los vertebrados y el epitelio intestinal presenta todos los tipos celulares característicos de esta región. El sector craneal del intestino de este teleósteo, es el sitio de digestión y absorción, y posee una estructura similar a la de otros grupos de peces. En cambio, los enterocitos de la porción caudal, son células cúbicas bajas, entre ellos se observan células caliciformes y capilares sanguíneas que llegan hasta el lumen de la mucosa. Por fuera del epitelio, se observa una lámina propia-submucosa muy desarrollada compuesta por tejido conectivo, altamente vascularizada que no presenta glándulas. De acuerdo con las técnicas histoquímicas, los diversos GCs elaborados y secretados por la mucosa intestinal se encuentran asociados con funciones específicas de importancia fisiológica, como su rol en la lubricación, su efecto amortiguador y la prevención de daños proteolíticos del epitelio junto con otros procesos biológicos, tales como la osmorregulación y el intercambio iónico. El análisis lectinhistoquímico de la mucosa intestinal revela la presencia de residuos terminales de glucosa, manosa y galactosa. En conclusión, en este estudio se demuestra que los GCs sintetizados en el intestino de C. paleatus muestran un alto nivel de complejidad histoquímica y que el patrón de unión de lectina de la mucosa intestinal es característico para cada especie y las variaciones se hallan relacionadas con las múltiples funciones realizadas por el mucus en el tracto digestivo. La información brindada en este trabajo es una herramienta de relevancia biológica para comparar y analizar los posibles cambios glicosídicos del mucus intestinal bajo diferentes condiciones como los cambios en la dieta o diferentes estados patológicos.

Análise morfométrica da parede intestinal e dinâmica de mucinas secretadas no jejuno de frangos suplementados com probiótico Bacillus subtilis cepa C3102 / Morphometric analysis of the intestinal wall and the dynamic of mucins secreted in the jejunum of broilers supplemented with Bacillus subtilis strain C3102

O objetivo deste estudo foi analisar a morfometria da parede intestinal e a dinâmica de mucinas secretadas no jejuno de frangos de corte suplementadas com probiótico Bacillus subtilis cepa C3102. Foram utilizados 720 pintinhos com um dia de vida, divididos em dois grupos: GA (Grupo controle) - aves alimentadas com ração sem suplementação de Bacillus subtilis cepa C3102 (1º ao 35º dia) e GB (Grupo tratado) - aves alimentadas com ração com suplementação de Bacillus subtilis cepa C3102 (1º ao 35º dia). Aos 7 e 35 dias 2cm do jejuno foram coletados e submetidos à rotina de processamento histológico. Cortes transversais de 1μm foram corados pela técnica do Alcian Blue (AB) para detecção de sialomucinas (pH 0,5) e sulfomucinas (pH 2,5), como também para contagem de células caliciformes presentes. A análise histoquímica revelou uma maior quantidade de sialomucinas presentes no jejuno dos animais que foram suplementados com probiótico Bacillus subtilis cepa C3102 (GB), quando comparados com os animais do grupo controle (GA). O número de células caliciformes presentes no grupo tratado (GB) foi superior ao grupo controle (GA).

The aim of this study was to analyze the morphology of the intestinal wall and the dynamics of mucins secreted in the jejunum of broilers supplemented with probiotic Bacillus subtilis strain C3102. We used 720 chicks with a day of life, divided into two groups: GA (control group) - birds fed diet without supplementation of Bacillus subtilis strain C3102 (1 to 35 days) and GB (treated group) - birds fed with supplementation of Bacillus subtilis strain C3102 (1 to 35 days). On the 7th and the 35th day, 2cm of jejunum were collected and submitted to histological processing. 1μm cross sections were stained by Alcian blue (AB) for detecting of sialomucins (pH 0.5) and sulphomucins (pH 2.5) as well as to count goblet cells. Histochemical analysis revealed a greater amount of sialomucins in the jejunum of animals that were supplemented with probiotic Bacillus subtilis strain C3102 (GB), when compared with the control group (GA). The number of goblet cells in the treated group (GB) was higher than the control group (GA).

Escherichia coli lipopolysaccharide affects intestinal mucin secretion in weaned pigs / El lipopolisacárido de Escherichia coli afecta la secreción de mucinas intestinales en cerdos destetados / O lipopolissacárido de Escherichia coli afecta a secreção de mucina intestinal em porcos desmamados

Background: to the best of our knowledge, the effects of lipopolysaccharide (LPS) from Escherichia coli on goblet cells and intestinal mucin secretion of weaned pigs has not been reported, and it is unknown whether these effects could trigger enteritis. Objective: to determine the effect of E. coli LPS on intestinal mucin secretion in weaning piglets. Methods: fifty-two piglets weaned at 21 days of age were fed a basal diet supplemented with four LPS levels (0.0, 0.3, 0.5, and 1.0 μg/mg) during 10 days. Piglets were slaughtered on days 1, 5, 7, and 10 post-weaning and samples of small and large intestine were taken for histochemical staining to determine goblet cell population and type of mucins produced (acidic, sulphated, non-sulphated, or neutral). Results: acidic mucin was reduced on day 5 post-weaning independently of the dietary LPS level supplied to piglets. Recovery of acidic mucins was observed during days 7 and 10 post-weaning. Neutral mucins increased on day 5 and decreased on days 7 and 10 post-weaning. High LPS levels decreased goblet cells population and secretion of all types of mucins. This effect was remarkably high for diet two (D2: 0.5 mg LPS/mg food). Conclusions: early weaning (21 d) and LPS addition to the diet affect mucin secretion and intestinal epithelium integrity by modifying goblet cell populations and their balance between acidic and neutral mucin secretion. These findings explain some abnormalities related with post-weaning diarrhea syndrome and help to explain its pathophysiology.

Antecedentes: actualmente se desconoce el efecto del lipopolisacárido (LPS) de Escherichia coli sobre la cantidad de células caliciformes y la secreción de mucinas en diferentes regiones del intestino en cerdos durante el período pos-destete. Tampoco se ha descrito si cambios en la distribución de las mucinas en el intestino están relacionados con el desarrollo de enteritis. Objetivo: determinar el efecto del LPS de E. coli sobre la secreción de mucinas en el intestino de lechones recién destetados. Métodos: cincuenta y dos lechones destetados a los 21 días fueron alimentados con una dieta basal adicionada con cuatro niveles de LPS (0,0, 0,3, 0,5 y 1,0 μg/mg) durante 10 días. Los cerdos se sacrificaron los días 1, 5, 7 y 10 pos-destete y se tomaron muestras de intestino delgado y colon para realizar coloraciones histoquímicas, que permitieran calcular la cantidad de células caliciformes y el tipo de mucinas ácidas sulfatadas, no sulfatadas o neutras por ellas producidas. Resultados: la producción de mucinas ácidas en las células caliciformes se redujo el día 5 del período pos-destete, con posterior restauración de los parámetros a los días 7 y 10 e independientemente de la dosis de LPS suministrada en la dieta. En contraste, la producción de mucinas neutras aumentó en el día 5 y disminuyó en los días 7 y 10 del período pos-destete. Al comparar las dietas experimentales, se observó que dosis mayores de LPS, disminuyen el número de células caliciformes y la secreción de los diferentes tipos de mucinas. Este efecto fue más marcado con la dieta dos (D2: 0,5 mg de LPS/mg de alimento). Conclusiones: el destete a los 21 días y la adición LPS de E. coli a la dieta generan cambios en la secreción de mucinas, afectan la integridad del epitelio y el balance entre la secreción de mucinas ácidas y neutras por las células caliciformes. Estos hallazgos sugieren explicaciones de algunas alteraciones que se producen en el síndrome de diarrea pos-destete y contribuyen a explicar su fisiopatología.

Antecedentes: actualmente é desconhecido o efeito do lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli sobre a quantidade de células caliciformes, sobre a secreção de mucinas em diferentes regiões do intestino em porcos durante o período de pós-desmame e se o padrão de distribuição das mucinas está relacionado com o desenvolvimento de enterite. Objetivo: determinar o efeito da LPS de E. coli sobre a secreção de mucinas no intestino de leitões recém desmamados. Métodos: foi realizado um estudo experimental com 52 leitões desmamados aos 21 dias, que foram alimentados com uma dieta basal adicionada com quatro níveis de LPS (0,0, 0,3, 0,5 y 1,0 μg/mg) durante 10 dias. Os porcos foram sacrificados os dias 1, 5, 7 e 10 pós-desmame para tirar amostras de intestino delgado e grosso, realizar colorações histoquímicas, calcular a quantidade de células caliciformes e o tipo de mucinas ácidas sulfatadas, não sulfatadas e neutras por elas produzidas. Resultados: observou-se que ao número de células caliciformes que expressaram mucinas ácidas nos diferentes tempos do período pós-desmame, apresentaram uma diminuição da secreção de mucinas ácidas no quinto dia, com posterior recuperação dos parâmetros os dias 7 e 10 Independentemente da dose de LPS disso. Ao contrário, as mucinas neutras incrementaram o dia 5 com uma posterior diminuição os dias 7 e 10 pós-desmame. Ao comparar as dietas experimentais, observou-se uma diminuição do número de células caliciformes secretando os diferentes tipos de mucinas a doses maiores de LPS, principalmente com a dieta dois (D2: 0,5 mg LPS/mg comida). Conclusões: o desmame aos 21 dias e a adição de LPS de E. coli na dieta, gera mudanças na secreção de mucinas, afetam a integridade do epitélio e o balanço entre a secreção de mucinas ácidas e neutras pelas células caliciformes; isto modela algumas alterações que se produzem no síndrome de diarreia pós-desmame e contribui a explicar a sua fisiopatologia.

Critérios morfológicos no esôfago de Barrett / Morphological criteria in Barrett's esophagus

Define-se esôfago de Barrett (EB) quando há a substituição do epitélio escamoso estratificado na porção distal do esôfago por epitélio do tipo colunar metaplásico com predisposição ao desenvolvimento de câncer. O desenvolvimento de metaplasia no EB parece ser uma adaptação da mucosa à inflamação crônica do tecido causada pelo pH ácido no refluxo gastresofágico crônico, visto que o novo epitélio apresenta uma maior resistência ao refluxo. O esôfago de Barrett nos países ocidentais é identificado a partir de análise endoscópica e posterior confirmação histológica. Além disso, deve-se também avaliar a presença de células displásicas ou neoplásicas. Nesse trabalho realizou-se uma revisão e análise da literatura publicada entre os anos de 2003 a 2012 e alguns artigos denominados clássicos sobre o assunto. Este estudo teve como objetivo uma revisão atualizada sobre o tema com foco nos critérios morfológicos do esôfago de Barrett, metaplasia, displasia e adenocarcinoma esofágico (ACE), além de uma breve discussão sobre sua patogenia. Há controvérsia na literatura acerca da adoção das células caliciformes como tipo celular característico no EB e da relação entre metaplasia intestinal e desenvolvimento de ACE. Como não há um consenso sobre esse assunto, parece apropriado não estender o conceito de EB enquanto não se obtém dados que comprovem um risco aumentado de ACE nesses tipos celulares.

Avaliação do número de células caliciformes nas criptas da mucosa colônica com e sem trânsito intestinal / Evaluation of the number of goblet cells in crypts of the colonic mucosa with and without fecal transit

OBJETIVO: Medir a espessura das criptas e quantificar o número de células caliciformes comparando a mucosa cólica com e sem trânsito intestinal, relacionando-as ao tempo de exclusão. MÉTODOS: Sessenta ratos Wistar, foram distribuídos em três grupos com 20 animais segundo a operação final para a retirada dos cólons, realizadas em seis, 12 ou 18 semanas. Em cada grupo, 15 animais foram submetidos à derivação do trânsito por colostomia proximal no cólon esquerdo e fístula mucosa distal e cinco apenas à laparotomia (controle). Os cólons com e sem trânsito fecal foram removidos, processados, submetidos a cortes histológicos corados pela hematoxilina-eosina. A altura das criptas colônicas e o número de células caliciformes foram mensurados por morfometria computadorizada. Foram utilizados os testes t de Student e Kruskal-Wallis para comparação e análise de variância, estabelecendo-se nível de significância de 5% (p<0,05). RESULTADOS: A altura das criptas diminui nos segmentos sem trânsito fecal (p=0,0001), reduzindo entre seis e 12 semanas de exclusão (p=0,0003), estabilizando-se após este período. O número de células caliciformes nas criptas é menor nos segmentos sem trânsito após 12 e 18 semanas (p=0,0001), porém aumenta com o decorrer do tempo de exclusão (p=0,04) CONCLUSÃO: A exclusão do trânsito intestinal diminui a espessura das criptas colônicas e o número de células caliciformes nos segmentos sem trânsito. Existe aumento do número de células caliciformes com o decorrer do tempo de exclusão.

OBJECTIVE: To measure the thickness of the crypts and quantify the number of goblet cells of the colonic mucosa with and without intestinal transit, relating them to exclusion time. METHODS: Sixty Wistar rats were divided into three groups of 20 animals each according to the time of the final operation for the removal of the colon, in six, 12 or 18 weeks. In each group 15 animals underwent colonic exclusion by left colon proximal colostomy and distal mucous fistula, and five underwent only laparotomy (control). The colons with and without fecal stream were removed, processed and submitted to histological sections stained with hematoxylin-eosin. The height of the colonic crypts and the number of goblet cells were measured by computerized morphometry. We used the Student t test and Kruskal-Wallis test for comparison and analysis of variance, using a significance level of 5% (p <0.05). RESULTS: The height of the crypts decreased in segments without fecal stream (p =0.0001), reducing from six to 12 weeks of exclusion (p = 0.0003), stabilizing thereafter. The number of goblet cells in the crypts was smaller in segments without transit after 12 and 18 weeks (p = 0.0001), but increased as the time of exclusion progressed (p = 0.04) CONCLUSION: The exclusion of intestinal transit decreases the thickness of the colonic crypts and the number of goblet cells in the segments without transit. There is an increased number of goblet cells in the course of time exclusion.

Avaliação microbiológica, histológica e imunológica de frangos de corte desafiados com Salmonella Enteritidis e Minnesota e tratados com ácidos orgânicos / Microbiology, histology and immunology evaluation of broiler chickens challenged against Salmonella Enteritidis and Minnesota and treated with organic acids

Dois experimentos foram desenvolvidos para avaliar a eficiência de ácidos orgânicos frente a Salmonella enterica enterica sorovar Enteritidis (SE) e Minnesota (SM) em frangos. No primeiro experimento foram avaliados 3 tratamentos: T1 - ração adicionada de ácido orgânico, T2 - ração adicionada de ácido orgânico e ácido orgânico na água de bebida, T3 - grupo controle. Todos os animais foram inoculados com SE, via oral. A utilização de ácidos orgânicos na ração (T1) e na ração e na água (T2) diminuíram a excreção de Salmonella no papo e no ceco 7 dias pós inoculação com SE e houve redução de células CD3+ no jejuno dos frangos. No segundo experimento foram avaliados 4 tratamentos sendo T1 - controle, T2 - controle inoculado via oral com Salmonella Minnesota (SM), T3 - animais inoculados via oral com SM e ácidos orgânicos na ração e T4 - animais inoculados via oral com SM e ácidos orgânicos na ração e na água de bebida. Ácidos orgânicos a ração (T3) e na ração e na água (T4) reduziram a excreção de SM em papo de frangos de corte desafiados, 7 dias após inoculação. O uso de ácidos orgânicos na ração e na ração e na água foram mais eficientes em reduzir SE do que SM.

Two experiments were carried out to evaluate effectiveness of organic acids against Salmonella enterica enterica serovars Enteritidis (SE) and Minnesota (SM) in broilers. In the first experiment three treatments were evaluated: T1 - feeding with organic acids, T2 - feeding with organic acids and organic acids in drink water, and T3 - control group. All animals were oral challenged with SE. Organic acids in diet (T1) and organic acids in diet and drink water (T2) reduced the shadding of Salmonella in crop and cecum 7 days post challenged with SE and reduced the CD3+ cells in jejunal mucosa of broilers. In the second experiment four treatments were evaluated, T1 - control group, T2 - control group oral challenged with Salmonella Minnesota (SM); T3 - oral challenged animals with SM and treated with organic acids in diet; T4 - oral challenged animals with SM and treated with organic acids in diet and in drink water. Organic acids in diet (T3) and organic acids in diet and in drink water (T4) reduced the shadding of SM in crop of challenged broilers, 7 days post inoculation The use of organic acids in diet and in water was more effective to control SE than SM.

Cytological features of live limbal tissue donor eyes for autograft or allograft limbal stem cell transplantation / Características citológicas do tecido límbico de doador vivo para transplante autólogo ou alógeno de células-tronco epiteliais corneais

PURPOSE: To evaluate by impression cytology (IC) the corneal surface of live limbal tissue donor eyes for autograft or allograft limbal stem cell transplantation (LSCT). METHODS: Twenty limbal donors were enrolled (17 for autograft LSCT and 3 for allograft). Impression cytology was performed before transplantation of superior and inferior limbal grafts and after the third postoperative month. RESULTS: Impression cytology analysis showed sheets of corneal epithelial cells and goblet cell absence beyond the edge of the keratectomy sites in all patients, suggesting that conjunctival invasion towards the center did not occur in any eye. Partial conjunctivalization within 2 to 3 clock hours, confirmed by the presence of goblet cells, was limited to the keratectomy site in 10 percent of the cases. CONCLUSION: A clear central corneal surface was demonstrated in all eyes following surgery leading to the conclusion that limbal donation was a safe procedure in this group of patients. A small percentage of eyes can have donor sites re-epithelized with conjunctival cells at the periphery of the cornea.

OBJETIVO: Avaliar pela citologia de impressão a superfície da córnea de doador vivo para transplante autólogo ou alógeno de células-tronco epiteliais. MÉTODOS: Vinte pacientes doadores de tecido límbico foram avaliados (17 para transplante autólogo e 3 para alógeno). Os exames citológicos foram realizados em dois momentos: antes da ceratectomia, que removeu tecido límbico dos quadrantes superior e inferior, e após o terceiro mês pós-operatório. RESULTADOS: Invasão de células da conjuntiva em direção ao centro além da margem da ceratectomia não ocorreu em nenhum olho estudado. Uma pequena área de conjuntivalização parcial, confirmada pela presença de células caliciformes, foi detectada dentro do limite da ceratectomia em 10 por cento dos casos. CONCLUSÃO: A superfície central da córnea manteve-se transparente demonstrando que a manipulação de tecido límbico em doador vivo foi um procedimento seguro neste grupo de pacientes. Uma pequena porcentagem dos olhos pode ter o local do sítio da ceratectomia re-epitelizado com células da conjuntiva sobre a periferia da córnea.

Immunoreactivity of cytokeratins 7 and 20 in goblet cells and columnar blue cells in patients with endoscopic evidence of Barrett's esophagus / Imunoreatividade das citoqueratinas 7 e 20 nas células caliciformes e células colunares azuis em pacientes com evidência endoscópica de esôfago de Barrett

CONTEXT: Barrett's esophagus is characterized by the presence of goblet cells. However, when alcian-blue is utilized, another type of cells, called columnar blue cells, is frequently present in the distal esophagus of patients with endoscopic evidence of Barrett's esophagus. Cytokeratin 7 and 20 immunoreactivity has been previously studied in areas of intestinal metaplasia at the esophagogastric junction. However, the expression of these cytokeratins in columnar blue cells has not been characterized. OBJECTIVE: To compare the expression of cytokeratin 7 and 20 in goblet cells and columnar blue cells in patients with endoscopic evidence of Barrett's esophagus. METHODS: Biopsies from 86 patients with endoscopic evidence of Barrett's esophagus were evaluated. The biopsies were stained for cytokeratin 7 and 20. RESULTS: Goblet cells were present in 75 cases and columnar blue cells in 50 cases. Overall, cytokeratin 7 expression was similar in goblet cells and columnar blue cells (P = 0.25), while cytokeratin 20 was more common in goblet cells (P <0.001). In individuals with both cell types, however, cytokeratin 7 staining was the same in goblet and columnar blue cells in 95 percent of the cases, and cytokeratin 20 staining was the same in 77 percent. CONCLUSION: Goblet cells and columnar blue cells have similar immunohistochemical staining patterns for cytokeratins 7 and 20 in patients with endoscopic evidence of Barrett's esophagus.

CONTEXTO: Esôfago de Barrett é caracterizado pela presença de células caliciformes. Entretanto, quando "alcian blue" é utilizado, outro tipo de células, chamadas células colunares azuis, estão frequentemente presentes no esôfago distal de pacientes com evidência endoscópica de esôfago de Barrett. A imunoreatividade das citoqueratinas 7 e 20 tem sido estudada previamente em áreas de metaplasia intestinal na junção esôfago-gástrica. Entretanto, a expressão destas citoqueratinas nas células colunares azuis não foi caracterizada. OBJETIVO: Comparar a expressão das citoqueratinas 7 e 20 nas células caliciformes e células colunares azuis em pacientes com evidência endoscópica de esôfago de Barrett. MÉTODOS: Biopsias de 86 pacientes com evidência endoscópica de esôfago de Barrett foram avaliadas. Estas foram coradas com citoqueratinas 7 e 20. RESULTADOS: Células caliciformes estavam presentes em 75 casos e células colunares azuis em 50 casos. Ao todo, a expressão da citoqueratina 7 foi similar nas células caliciformes e células colunares azuis (P = 0,25), enquanto que a da citoqueratina 20 foi mais comum nas células caliciformes (P<0,001). Por outro lado, em indivíduos apresentando ambos os tipos de células, a coloração da citoqueratina 7 foi a mesma nas células caliciformes e células colunares azuis em 95 por cento dos casos, e a coloração da citoqueratina 20 foi a mesma em 77 por cento. CONCLUSÃO: As células caliciformes e as células colunares azuis têm padrões similares de coloração imunoistoquímica para citoqueratina 7 e 20 em pacientes com evidência endoscópica de esôfago de Barrett.

Análise morfométrica da parede intestinal e dinâmica de mucinas secretadas no íleo de frangos infectados por Toxoplasma gondii / Morphometric analysis of the intestinal wall and the dynamic of mucins secreted in the chicken ileum infected with Toxoplasma gondii

Objetivou-se analisar os efeitos da toxoplasmose sobre a morfometria da parede intestinal e a dinâmica de mucinas secretadas no íleo de frangos. Foram utilizados 16 frangos de corte machos (Gallus gallus) da linhagem Cobb, com 26 dias de idade. As aves foram divididas aleatoriamente em três grupos (G1, G2 e G3). O G1 não recebeu nenhum inóculo caracterizando o grupo controle, o G2 foi inoculado com cistos teciduais da cepa ME49 de Toxoplasma gondii, e o G3 foi inoculado com oocistos da cepa M7741 de T. gondii. Após 60 dias da inoculação, os animais foram mortos, e coletou-se o íleo, o qual foi submetido à rotina de processamento histológico. Cortes transversais de 4mm foram corados com Hematoxilina-Eosina (HE), Periodic Acid Schiff (PAS), Alcian Blue pH 2,5 e Alcian Blue (AB) pH 1,0. Nos animais do G2, observou-se aumento da parede intestinal, sobretudo a túnica muscular, muscular da mucosa e túnica mucosa, além de aumento na secreção de mucinas neutras. Já nos animais do G3, houve uma atrofia da parede intestinal, sobretudo para a túnica mucosa, e aumento na secreção de mucinas neutras.

The effects of toxoplasmosis on the intestinal wall morphometry and the dynamic of mucins secreted in the chicken ileum were analyzed. Sixteen 26-day-old, male, Cobb broiler chicks (Gallus gallus) were used and randomly divided into three groups (G1, G2 and G3). G1 received no inoculum characterizing the control group, G2 was inoculated with tissue cysts of ME49 strain of Toxoplasma gondii, and G3 was inoculated with oocytes of M7741 strain of T. gondii. After 60 days of inoculation, the animals were killed and had their ileum collected and submitted to histological processing. Tranversal cuts (4mm) were stained with Hematoxilin-Eosine (HE), Periodic Acid Schiff (PAS), Alcian Blue pH 2.5 and Alcian Blue (AB) pH 1.0. Intestinal wall increase was noticed for the animals from G2 - mostly the muscle tunic, the muscularis mucosae, and the mucous tunic, including the increase of secretion of neutral mucins. The animals from G3 presented atrophy of the intestinal wall - mostly the mucous tunic, and increase of the secretion of neutral mucins.

Descripción de la metaplasia escamosa por citología de impresión en pacientes con ojo seco / Description of squamous metaplasia by cytology of impression in patients with dry eye

El ojo seco se caracteriza por una deficiencia en la cantidad o calidad de la película lagrimal, que conlleva a cambios histológicos en la superficie ocular como la metaplasia escamosa. Objetivo: Determinar el grado de metaplasia escamosa de la superficie conjuntival en pacientes con ojo seco con diferentes grados de severidad clínica. Metopdología: A 63 ojos de pacientes con diagnóstico clínico de ojo seco, clasificados como leve, moderado y severo, se les tomó citología de impresión en la conjuntiva bulbar temporal y nasal, con membranas de biopore (Millipore PICM012550 poro 0.4m). Las membranas se fijaron con etanol al 96 por ciento y colorearon con ácido periódico de Shiff- hematoxilina, y se montaron entre lámina y laminilla con Entellan. El grado de metaplasia escamosa se determinó de acuerdo al número de las células caliciformes (contadas con rejilla calibrada a 40X) y a los cambios morfológicos de las células epiteliales, utilizando la graduación de Murube y Rivas (2002). Resultados: Aproximadamente la mitad de los pacientes con ojo seco leve (49 por ciento ) presento grado 1 de metaplasia escamosa, el 53,8 por ciento de los pacientes con ojo seco moderado presentó grado 2 y el 57.1 por ciento de los pacientes con ojo seco severo presentó grado 3. Conclusiones: El grado de metaplasia escamosa por citología de impresión es fácilmente evidenciado en pacientes con ojo seco moderado y severo contribuyendo a la confirmación del diagnóstico clínico y seguimiento de la enfermedad.

Dry eye is characterized by a deficiency in thequantity or quality of the lachrymal film, whichimplies histological changes in the surface of the eyesuch as squamous metaplasia. The purpose was todetermine the degree of the squamous metaplasiain the conjunctiva surface in patients with dry eyewith different degrees of clinical severity. Methods:63 eyes diagnosed with light, moderate and severedry eye and 20 eyes like controls subject were madeimpression cytology in the temporal and nasal bulbarconjunctiva with membranes of biopore (MilliporePICM012550). Membranes were fixed with ethanolat 96 percent and colored with periodic acid of Shiffhematoxylin,and they were mounted betweenslide and small slide with Entellan. The degree ofsquamous metaplasia was determined regarding thenumber of goblet cells and the morphologic changes ofepithelial cells, using the Murube and Rivas grading.Results: approximately half of the patients with lightdry eye (49 percent) presented a degree 1 of squamousmetaplasia, 53.8 percent of the patients with moderatedry eye presented a degree 2 and the 57.1 percent of thepatients with severe dry eye presented a degree 3.Conclusions: the degree of squamous metaplasia bycytology of impression is easily evidenced in patientswith moderate and severe dry eye, which contributesto the configuration of the clinical diagnosis and thefollow up of the disease.

Efeitos das emissões geradas pela queima dos canaviais sobre a superfície ocular / Effects of sugar cane burning emissions on the ocular surface

Efeitos adversos das emissões geradas pela queima da cana-de-açúcar representa um problema que afeta principalmente os países em desenvolvimento. Estudos prévios têm demonstrado que, durante o período de queima, há um aumento das admissões hospitalares e atendimentos de emergência nas cidades do Brasil próximas às plantações de cana. Entretanto, até o momento, não há estudos que avaliaram os efeitos sobre a superfície ocular. O presente trabalho avalia o impacto causado pela queima da cana sobre a superfície ocular em cortadores de cana e na população da região de Tatuí-SP. Vinte e dois cortadores de cana e dezenove voluntários do perímetro urbano de Tatuí-SP, localizada no Estado de São Paulo, foram recrutados para o estudo. Medidas ambientais das concentrações de material particulado de 2,5 Vm (MP2,5), temperatura e umidade foram mensuradas durante os períodos de queima e entre safra. Ao mesmo tempo, avaliações histológicas e clínicas da superfície ocular, tais como, citologia de impressão da região tarsal, tempo de rotura do filme lacrimal (TRFL), teste de Schirmer I, colorações vitais por rosa bengala e fluoresceína, biomicroscopia e sintomas oculares foram realizadas durante os dois períodos. Níveis de MP2,5 durante a atividade de corte da cana queimada foi 3,5 vezes mais elevados do que o limite de 25Vg/m3 sugerido pelo órgão de regulamentação. Nas avaliações oculares, observamos que os valores médios das áreas coradas por ácido periódico de Schiff (PAS) das amostras dos cortadores foram menores durante o período de queima (57±6,8%) do que na entre safra (64,3±12%; p=0,014) e quando comparadas com as amostras dos voluntários da cidade (63,9±6.8%; p=0,009). Modelo de regressão não-linear revela uma forte associação entre os valores médios das áreas PAS positivas e os anos de trabalho no corte da cana queimada. Detectamos um aumento nas áreas PAS positivas conforme os anos de trabalho acumulados no corte da cana queimada durante o período...

The adverse effects of particle emissions produced by sugar cane burning represent a problem that affects mostly developing countries. Previous studies have shown that, during the burning period, there is an increase in respiratory hospital admissions and emergency room visits in communities surrounded by sugar cane plantations in rural cities of Brazil. However, until this date, no previous studies have evaluated the effects on the ocular surface. The aim of the present work is to study the impact of the sugar cane burning on the ocular surface of cane workers and the people at the city of Tatuí, near the burning crops. Twenty-two healthy sugar cane workers and nineteen volunteers from Tatuí region located at the State of Sao Paulo, Brazil, were recruited to the study. Measurements of the average concentrations of particulate matter 2.5 Vm, temperature and humidity were done during the burning and non-burning periods. Concurrently, histological and clinical assessments of the ocular surface such as, inferior tarsal impression cytology, tear film break-up time, Schirmer´s I test, fluoresce in and rose bengal staining, biomicroscopy and eye irritation symptoms were evaluated during the two periods. PM2.5 exposure levels in the crops during the activity of burnt cane cutting were 3.5-fold higher than the suggest limit of 25Vg/m3 proposed by governmental regulation. On ocular assessments, we observed that the average of periodic acid-Schiff (PAS) positive areas of sugar cane workers samples were lower during the burning (mean 57%, SD 6.8) than the non-burning period (mean 64.3%, SD 12; p=0.014) and the downtown volunteers samples (mean 63.9%, SD 6.8; p=0.009). A non-linear regression model reveals a strong relationship between average PAS positive areas and years working in sugar cane harvesting. We noticed an increase in PAS positive areas as long as the years accumulated in sugar cane harvesting...