Caracterização de mutações por meio de sequenciamento dos genes hMLH1 e hMSH2 em pacientes com suspeita de Síndrome de Lynch / Characterization of mutations by sequencing of hMLH1 and hMSH2 in suspected Lynch syndrome patients

RESUMO

Introdução - A Síndrome de Lynch (SL) tem padrão de herança autossômico dominante com alta penetrância (aproximadamente 70%- 80%). Predispõe ao desenvolvimento precoce de câncer colorretal (CCR), endométrio, ovário, intestino delgado, estômago e trato urinário. Os antecedentes familiares de câncer podem identificar indivíduos e famílias sob risco. Os principais critérios clínicos utilizados para a suspeita diagnóstica são os de Amsterdam e de Bethesda. Os genes de reparo de DNA, MSH2 e MLH1 são responsáveis por mais de 85% das mutações germinativas conhecidas em pacientes portadores de SL. Objetivos - O objetivo geral deste trabalho foi a pesquisa de mutações germinativas nos genes MLH1 e MSH2 em indivíduos com suspeita clinica de SL. Casuística e Métodos – Foram estudados 99 pacientes não relacionados, portadores de CCR com os principais critérios clínicos para suspeita de SL. Os DNAs dos pacientes foram obtidos a partir de sangue periférico e submetidos a PCR para análise de todos os exons e regiões intron-exons dos genes. Foram então submetidos a sequenciamento direto em ambos os sentidos. Resultados – Foram encontradas 32 (30%) mutações patogênicas nos genes MLH1 ou MSH2, sendo 21/41 (51,2%) dos pacientes com critérios de Amsterdam e 9/58 (15,5%) dos pacientes com critérios de Bethesda. Foram descritas pela primeira vez 13 mutações patogênicas nos genes MLH1 ou MSH2. Conclusão – Nossos resultados foram concordantes com os encontrados na literatura tanto na porcentagem de mutações encontradas, como na proporção em cada um dos genes de reparo estudados. Além disso, observamos maior especificidade dos critérios de Amsterdam na detecção de indivíduos portadores da mutação germinativa. O sequenciamento automático é uma metodologia eficaz na detecção de alterações pontuais e de pequenas deleções, inserções e duplicações.

ABSTRACT

Introduction ­ Lynch syndrome (LS) presents an autosomal dominant inheritance pattern with a high penetrance (approximately 70% - 80%). LS predisposes to early development of colorectal cancer (CRC), endometrium, ovary, small intestine, stomach and urinary tract. Family history of cancer could identify individuals and families at risk. The main clinical criteria for diagnosis are Amsterdam and Bethesda Criteria. The mismatch repair genes, MSH2 and MLH1 are responsible for more than 85% of known germline mutations in patients with SL. Objectives ­ To study germline mutations in MLH1 and MSH2 genes in patients with clinically suspected SL. Material and Methods ­ Here, described 99 unrelated patients suffering of CRC with the major clinical criteria for suspicion of SL. The DNAs of the patients were obtained from peripheral blood and subjected to PCR for analysis of all exons and intron-exon regions of genes. Then, they were directed sequenced in both directions. Results - We found 32 (30.4%) pathogenic mutations in MLH1 or MSH2 genes, and among them, 21/41 (51.27%) of patients with Amsterdam criteria and 9/58 (15.5%) of patients with Bethesda criteria. We described, for the first time, 13 pathogenic mutations in MLH1 or MSH2 genes. Conclusions - Our results were consistent with literature in the percentage of mutations found, as well as in the proportion of each mismatch repair genes studied. Moreover, we observed a higher specificity of the Amsterdam criteria for the detection of individuals carrying the germline mutation. The automated sequencing is an effective methodology for detection of substitutions, small deletions, insertions and duplications.