Low and high-dose intradermal infection with Leishmania major and Leishmania amazonensis in C57BL/6 mice.

A model of skin infection with Leishmania amazonensis with low doses of parasites is compared to infection with high doses of L. amazonensis and low and high doses of Leishmania major. C57BL/6 mice were infected with 10³ or 10(6) parasites in the ear and the outcome of infection was assessed. The appearance of lesions in mice infected with 10³ parasites was delayed compared to mice infected with 10(6) Leishmania and parasites were detectable at the infection site before lesions became apparent. Mice infected with L. amazonensis displayed persistent lesions, whereas infection with L. major spontaneously healed in all groups, although lymphocytes persisted at the site of infection after healing. Macrophages persisted only in L. amazonensis-infected mice. High-dose L. amazonensis-infected mice produced lower levels of IFN-γ and TNF than mice infected with L. major. No correlation between the persistence of parasites and IL-10 levels and the production of nitric oxide or urea by macrophages was found. We conclude that infection with low doses of L. amazonensis in the dermis changes the course of infection by delaying the appearance of lesions. However, low-dose infection does not change the outcomes of susceptibility and cytokine production described for subcutaneous infection with high numbers of parasites.

Performance of TcI/TcVI/TcII Chagas-Flow ATE-IgG2a for universal and genotype-specific serodiagnosis of Trypanosoma cruzi infection.

Distinct Trypanosoma cruzi genotypes have been considered relevant for patient management and therapeutic response of Chagas disease. However, typing strategies for genotype-specific serodiagnosis of Chagas disease are still unavailable and requires standardization for practical application. In this study, an innovative TcI/TcVI/TcII Chagas Flow ATE-IgG2a technique was developed with applicability for universal and genotype-specific diagnosis of T. cruzi infection. For this purpose, the reactivity of serum samples (percentage of positive fluorescent parasites-PPFP) obtained from mice chronically infected with TcI/Colombiana, TcVI/CL or TcII/Y strain as well as non-infected controls were determined using amastigote-AMA, trypomastigote-TRYPO and epimastigote-EPI in parallel batches of TcI, TcVI and TcII target antigens. Data demonstrated that "α-TcII-TRYPO/1:500, cut-off/PPFP = 20%" presented an excellent performance for universal diagnosis of T. cruzi infection (AUC = 1.0, Se and Sp = 100%). The combined set of attributes "α-TcI-TRYPO/1:4,000, cut-off/PPFP = 50%", "α-TcII-AMA/1:1,000, cut-off/PPFP = 40%" and "α-TcVI-EPI/1:1,000, cut-off/PPFP = 45%" showed good performance to segregate infections with TcI/Colombiana, TcVI/CL or TcII/Y strain. Overall, hosts infected with TcI/Colombiana and TcII/Y strains displayed opposite patterns of reactivity with "α-TcI TRYPO" and "α-TcII AMA". Hosts infected with TcVI/CL strain showed a typical interweaved distribution pattern. The method presented a good performance for genotype-specific diagnosis, with global accuracy of 69% when the population/prototype scenario include TcI, TcVI and TcII infections and 94% when comprise only TcI and TcII infections. This study also proposes a receiver operating reactivity panel, providing a feasible tool to classify serum samples from hosts infected with distinct T. cruzi genotypes, supporting the potential of this method for universal and genotype-specific diagnosis of T. cruzi infection.

Innovations in diagnosis and post-therapeutic monitoring of Chagas disease: Simultaneous flow cytometric detection of IgG1 antibodies anti-live amastigote, anti-live trypomastigote, and anti-fixed epimastigote forms of Trypanosoma cruzi.

This study developed a remarkable methodological innovation (FC-ATE) which enables simultaneous detection of antibodies specific to the three evolutive forms of Trypanosoma cruzi: live amastigote (AMA), live trypomastigote (TRYPO), and fixed epimastigote (EPI) using a differential fluorescence staining as low (AMA), intermediate (TRYPO), and high (EPI). An outstanding performance (100%) was observed in the discrimination of the chagasic (CH) and non-chagasic (NCH) patients. In the applicability of FC-ATE in the diagnosis of Chagas disease, 100% of the CH samples presented positivity in the percentage of positive fluorescent parasites (PPFP) for all the three forms of T. cruzi. Moreover, 94% of the samples of NCH presented negative values of PPFP with AMA and TRYPO, and 88% with EPI. Samples from the NCH group with false-positive results were those belonging to the leishmaniasis patients. Considering the applicability of this technique in post-therapeutic monitoring of Chagas disease, 100% of non-treated (NT) and treated non-cured (TNC) samples were positive with the three T. cruzi evolutive forms, while a percentage of 100% from samples of the treated cured (TC) patients were negative with AMA, 93% with TRYPO and 96% with EPI. The comparison between FC-ATE and two other flow cytometric tests using the same samples of patients NT, TNC and TC showed that the three techniques presented different reactivities, although categorical correlation between the methodologies was observed. Taken together, the results obtained with the novel FC-ATE method have shown an outstanding performance in the diagnosis and post-therapeutic monitoring of Chagas disease.

Short-term protection conferred by Leishvacin® against experimental Leishmania amazonensis infection in C57BL/6 mice.

To date, there is no vaccine available against human leishmaniasis. Although some vaccination protocols can induce immunity in murine models, they fail to induce protection in humans. The reasons for that remain unclear. The aim of the present study was to characterize the changes in the pattern of the immune response during subcutaneous vaccination with Leishvacin® in mice. We also investigated whether IFN-γ and nitric oxide synthase are indispensable for the protection elicited by the vaccine. C57BL/6 WT vaccinated mice showed smaller lesions and fewer numbers of parasites in footpads until 8 weeks post-infection. Up to this time, they produced higher levels of IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-17A and IL-10 and higher specific antibody response than control non-vaccinated mice. Moreover, we showed that IFN-γ, most likely by induction of iNOS expression, is essential for immunity. However, after 12 weeks of infection, we observed loss of difference in lesion size and parasite burden between the groups. Loss of resistance was associated with the disappearance of differences in cytokine patterns between vaccinated and control mice, but not of antibody response, which remained different until a later time of infection. The reversal of resistance to L. amazonensis could not be explained by upregulation of regulatory cytokines. Our data point to a subversion of the host immune response by L. amazonensis even when a protective response was previously induced.

Low and high-dose intradermal infection with Leishmania majorand Leishmania amazonensis in C57BL/6 mice

A model of skin infection with Leishmania amazonensiswith low doses of parasites is compared to infection with high doses of L. amazonensis and low and high doses of Leishmania major. C57BL/6 mice were infected with 10³ or 10(6) parasites in the ear and the outcome of infection was assessed. The appearance of lesions in mice infected with 10³ parasites was delayed compared to mice infected with 10(6) Leishmania and parasites were detectable at the infection site before lesions became apparent. Mice infected with L. amazonensisdisplayed persistent lesions, whereas infection with L. major spontaneously healed in all groups, although lymphocytes persisted at the site of infection after healing. Macrophages persisted only in L. amazonensis-infected mice. High-dose L. amazonensis-infected mice produced lower levels of IFN-γ and TNF than mice infected with L. major. No correlation between the persistence of parasites and IL-10 levels and the production of nitric oxide or urea by macrophages was found. We conclude that infection with low doses of L. amazonensisin the dermis changes the course of infection by delaying the appearance of lesions. However, low-dose infection does not change the outcomes of susceptibility and cytokine production described for subcutaneous infection with high numbers of parasites.

Resina acrílica gelada utilizada como material de moldagem. Alteração dimensional de modelos e moldes na técnica do casquete / Cold cured acrylic resin used as impression material. Dimensional changes of dies and molds in the acrylic coping impression technique

Este trabalho buscou avaliar uma resina acrílica gelada quando utilizada como material de moldagem na técnica do casquete. Foi mensurada a alteração dimensional de troquéis em resinas epóxica (Resimpox) e em gesso tipo IV (Vel-Mix), obtidos pelo vazamento de moldes de casquetes acrílicos preenchidos com resina acrílica de ativação química (DuraLay) gelada, e de troquéis, no mesmo gesso, obtidos de moldes casquetes preenchidos com mercaptana (Permlastic Regular). Durante as moldagens, utilizou-se um dispositivo padronizador e um troquel de aço mestre tronco-cônico. Um anel de aço era adaptado e nivelado por oclusal ao troquel mestre, sendo a alteração dimensional aferida por leituras, em microscópio, da desadaptação oclusal anel/troquel reproduzido. Foi encontrada uma diferença estatisticamente significante entre os dois tipos de molde, independentemente do material do troquel, com a mercaptana apresentando as menores desadaptações (28 µm). Nos moldes de resina acrílica, não foi verificada diferença significante entre troquéis obtidos em resina epóxica (528 µm) ou gesso (592 µm). Novas pesquisas são necessárias para que variações na própria técnica de moldagem com resina acrílica gelada e outras características, além da alteração dimensional, sejam avaliadas

Amálgama com desoxidante: alteração dimensional e resistência à compressão / Amalgam treated with deoxidina solution: dimensional alteration and compression resistance

Avaliou-se a alteração dimensional e resistência à compressão de amálgama lavado com solução desoxidante recentemente introduzida no mercado nacional. Ligas convencional tipo limalha (Velvalloy) e de alto teor de cobre fase dispersa (Dispersalloy) contendo zinco foram utilizadas na confecção de 5 corpos de prova cilíndricos (4 x 6 mm), em média, para cada condição experimental. Metade dos corpos era homogeneizada com 2 gotas da solução de brometo de cetiltrimetilamônio e a outra metade não (grupo controle). Todos foram armazenados a 37º em estufa úmida. Realizou-se leituras em 1, 7 e 30 dias. Expansão tardia e diminuição de resistência à compressão estatisticamente significantes foram encontradas em 30 dias. O uso do agente desoxidante apresenta inúmeros inconvenientes e não deve ser utilizado com o Dispersalloy, Velvalloy e, por extensão, com outras ligas para amálgama dental

Avaliaçäo da alteraçäo dimensional de troquéis em resina epóxica e gesso tipo IV / Evaluation of the dimensional alteration of the resin dies in epoxy resin and type IV dental stone

Os autores avaliaram a alteraçäo dimensional de troquéis confeccionados em resina epóxica (duas marcas comerciais brasileiras e uma americana) e um gesso tipo IV. As alteraçöes dimensionais foram mensuradas através do desajuste entre as superfícies oclusais dos troquéis reproduzidos e de um anel de aço que se ajusta perfeitamente ao troquel de aço padräo. As médias das alteraçöes dimensionais encontradas e respectivos desvios-padräo, em micrometros, foram +26,08µm (ñ9,12) para o gesso Vel-Mix, - 166,24µm (ñ21,96) para a resina Trok-Dente, - 114,37µm (ñ27,51) para Sikadur 32, e - 126,30µm (ñ14,01) para Die Epoxy. O gesso apresentou expansäo e as resinas epóxicas, contraçäo

Assessing in vivo bitewing radiogrph, FOTI and clinical examination for occlusal caries diagnosis / Comparaçäo in vivo dos métodos radiográficos interproximal, FOTI e exame clínico para o diagnóstico de cáries oclusais

Três métopdos de diagnóstico foram utilizados para detectar cárie oclusal: fibra óptica de transiluminaçäo (FOTI), radiografia interproximal (rX) e exame clínico (EC). Os pré-molares e molares de 58 pacientes, com idades entre 12 e 37 anos, foram examinados por três examinadores calibrados. Radioluscência em esmalte e/ou dentina para o RX, sombra em esmalte e/ou dentina para o FOTI foram considerados como cavidade. As superfícies restauradas ou radiograficamente ilegíveis foram excluídas do estudo. Os resultados observados foram: rX sem imagem (s.i.) e EC saudável (s) = 88,39; c/ cavidade (c.c.) = 6,13; rX c/imagem (c.i.) e ECs. = 0 e c.c. = 5,48; rXs.i., FOTI s.= 91,20 e c.c. = 0; rXc.i. e FOTIs. = 1,17 e c.c. = 7,63. FOTIs. e ECs = 87,61 e c.c. = 5,60. FOTIc.c. e ECs. = 0,86 e c.c. = 5,90. Os dados foram analisados e permitiram as seguintes conclusöes: um alto grau de concordância foi observado entre todos os testes; a radiografia interproximal e o FOTI säo importantes meios complementares no diagnóstico de cáries oclusais

Validaçäo in vivo do diagnóstico de cárie oclusal e proximal em dentes posteriores por meio de exame clínico visual, transiluminaçäo por fibra ótica (FOTI) e radiografias interproximais / In vivo validation of occlusion and approximal caries in posterior teeth across visual inspection, fibre-optic transillumination (FOTI) and interproximal radiographies

O desempenho do exame clínico visual, transiluminaçäo por fibra ótica (FOTI) e exame radiográfico interproximal para diagnóstico de cárie oclusal dentinária e de cavidades e lesöes pré-cavitadas proximais foi avaliado in vivo. As superfícies oclusais e proximais em pré-molares e molares permanentes de 36 pacientes (idade entre 11 e 21 anos) foram examinadas independentemente por dois examinadores calibrados por método. As superfícies julgadas cariadas por pelo menos 1 dos examinadores dentre os métodos de diagnóstico foram agendadas para validaçäo. A validaçäo da presença de cárie foi a invasäo oclusal por meio da inspeçäo visual-tátil e de corante fucsina básica em propilenoglicol a 0,5 por cento e após separaçäo dentária pelo exame visual direto e moldagem em silicona de adiçäo das proximais afastadas com separador de Elliot. Para as superfícies oclusais de molares foi encontrado na validaçäo visual-tátil: sensibilidade e especificidade de 0,36 e 1,00 para exame clínico visual, 0,44 e 0,99 para o exame com FOTI e 0,42 e 0,87 para exame radiográfico; áreas sob as curvas ROC de 0,77, 0,86 e 0,63 respectivamente; área ROC do FOTI estatisticamente superior à da radiografia interproximal (p<0,05); os valores de prediçäo positivos do exame clínico e FOTI foram superiores ao do exame radiográfico. Na detecçäo de cavidades em superfícies proximais de pré-molares e molares foi verificado para validaçäo visual e por moldes, respectivamente: sensibilidade de 0,23 e 0,16 para exame clínico visual, 0,40 e 0,25 para exame com o FOTI e 0,48 e 0,35 para o exame radiográfico; especificidade de 0,99 e 0,99 para exame clínico visual, 0,96 e 0,94 para o exame com o FOTI e 0,93 e 0,90 para o exame radiográfico; os valores de prediçäo positivos do exame clínico foram superiores aos dos outros métodos. Os valores de prediçäo negativos quase poderiam ser esperados por mero acaso em ambas as superfícies. Os valores de sensibilidade indicam que os métodos näo detectaram um número considerável de superfícies oclusais, o exame clínico visual e FOTI apresentaram um desempenho moderado e similar para o diagnóstico de cárie dentinária; o exame radiográfico interproximal detectou quase tantas lesöes de cárie dentinárias oclusais quanto o FOTI, porém a expensas de uma proporçäo considerável de resultados falso positivos, o que na prática induziria a sobretratamento restaurador; o exame clínico visual e FOTI apresentaram-se superiores no diagnóstico de oclusais saudáveis...