Isolation of saprophytic Leptospira spp. from a selected environmental water source of Argentina / Aislamiento de Leptospira spp. saprofitas desde fuentes de agua en un ambiente seleccionado de Argentina

Ten Leptospira spp. strains were isolated from water samples from Nievas stream, Olavarría, Buenos Aires province (Argentina). The isolates showed the typical motility and morphology of the genus Leptospira under dark field microscopy, developing in liquid EMJH medium after eight days of incubation at 13 °C and 30 °C. All isolates were negative by the Multiple Locus Variable Number Tandem Repeat Analysis (MLVA). Molecular identification by 16S rRNA gene sequencing identified all isolates as nonpathogenic leptospires. Four isolates showed a genetic profile identical to that of the reference strain Leptospira biflexa serovar Patoc, and six isolates revealed sequence similarities within the 97-98% range, closely related to Leptospira yanagawae and Leptospira meyeri, respectively. Strains ScialfaASA42, ScialfaASA45, ScialfaASA44, ScialfaASA47, ScialfaASA49, ScialfaASA50 and ScialfaASA51 possibly represent a novel species of the genus Leptospira.

Se aislaron 10 cepas de Leptospira spp. a partir de muestras de agua del arroyo Nievas, partido de Olavarría (provincia de Buenos Aires, Argentina). Los aislamientos mostraron motilidad y morfología típica del género Leptospira bajo microscopía de campo oscuro y se desarrollaron en medio líquido EMJH después de 8 días de incubación a 13 y 30°C. Todos los aislamientos fueron negativos por MLVA, y mediante la secuenciación del gen 16S del ARNr se identificaron como leptospiras no patógenas. Cuatro de estos aislamientos mostraron un perfil genético idéntico a la cepa Leptospira biflexa serovar Patoc de referencia, en tanto que 6 de ellos presentaron similitudes de secuencias estrechamente relacionadas con las especies Leptospira yanagawae y Leptospira meyeri dentro del intervalo del 97 y 98%, respectivamente. Las cepas ScialfaASA42, ScialfaASA45, ScialfaASA44, ScialfaASA47, ScialfaASA49, ScialfaASA50 y ScialfaASA51 posiblemente representen una nueva especie del género Leptospira.

Diferenciación de serovares de leptospiras patógenas mediante PCR del gen ligB y secuenciación / Differentiation of pathogenic leptospires spp by PCR of ligB gene and sequencing

La leptospirosis es la zoonosis de mayor distribución mundial. El objetivo del preReacción en cadena sente trabajo fue desarrollar una técnica molecular que diferencie leptospiras patógenas. Se amplificó mediante PCR y se secuenció una región de la adhesina ligB, presente solo en las especies patógenas. Se utilizaron los iniciadores ligBFpet y ligBRpet. Dichos iniciadores lograron amplificar el ADN blanco de 6 cepas patógenas referenciales de Leptospira interrogans (serovar Pomona cepa Pomona, serovar Canicola cepa Hond Utrecht IV, serovar Copenhageni cepa M 20, serovar Wolffi cepa 3705, serovar Pyrogenes cepa Salinem y serovar Hardjo cepa Hardjoprajitmo) y el de Leptospira borgpetersenii serovar Castellonis cepa Castellon 3; también el de 4 cepas patógenas aisladas de bovino, porcino, rata y comadreja. En las 2 cepas referenciales no patógenas utilizadas, Leptospira biflexa serovar Patoc cepa Patoc i y L. biflexa serovar Andamana cepa Andamana, no hubo amplificación. La secuenciación de los productos amplificados expuso una suficiente variación entre los serovares estudiados, que permite diferenciarlos.

Leptospirosis is a zoonosis having worldwide distribution. The objective of this work was to develop a molecular technique to differentiate pathogenic Leptospira spp. A region of adhesin ligB, present only in the pathogenic species was amplified by PCR and sequenced. ligBRpet and ligBFpet primers were used, which amplified the target DNA from pathogenic L. interrogans reference strains serovars Pomona strain Pomona, Canicola strain Hond Utrecht IV, Copenhageni strain M 20, Wolffi strain 3705, Pyrogenes strain Salinem, Hardjo strain Hardjoprajitmo, L. borgpetersenii serovar Castellonis strain Castellon 3 and 4 pathogenic strains isolated from bovines, pigs, rats and opossums. L. biflexa serovars Patoc strain Patoc i and Andamana strain Andamana were not amplified. Sequencing of the amplified products exhibited sufficient variation among serovars, which differentiates them.