Antisense oligonucleotide as a new technology application for CsLOB1 gene silencing aiming citrus canker resistance.

Citrus canker disease, caused by Xanthomonas citri subsp. citri, poses a significant threat to global citrus production. The control of the disease in the field relies mainly on the use of conventional tools such as copper compounds, which are harmful to the environment and could lead to bacterial resistance. This scenario stresses the need for new and sustainable technologies to control phytopathogens, representing a key challenge in developing studies that translate basic into applied knowledge. During infection, X. citri subsp. citri secretes a transcriptional activator-like effector that enters the nucleus of plant cells, activating the expression of the canker susceptibility gene LATERAL ORGAN BOUNDARIES 1 (LOB1). In this study, we explored the use of antisense oligonucleotides (ASOs) with phosphorothioate modifications to transiently inhibit the gene expression of CsLOB1 in Citrus sinensis. We designed and validated three potential ASO sequences, which led to a significant reduction in disease symptoms compared to the control. The selected ASO3-CsLOB1 significantly decreased the expression level of CsLOB1 when delivered through two distinct delivery methods and the reduction of the symptoms ranged from approximately 15% to 83%. Notably, plants treated with ASO3 did not exhibit an increase in symptoms development over the evaluation period. This study highlights the efficacy of ASO technology, based on short oligonucleotide chemically modified sequences, as a promising tool for controlling phytopathogens without the need for genetic transformation or plant regeneration. Our results demonstrate the potential of ASOs as a biotechnological tool for the management of citrus canker disease.

Overexpression of CsSAMT in Citrus sinensis Induces Defense Response and Increases Resistance to Xanthomonas citri subsp. citri.

Citrus canker is a destructive disease caused by Xanthomonas citri subsp. citri, which affects all commercial sweet orange (Citrus sinensis [L.] Osbeck) cultivars. Salicylic acid (SA) and systemic-acquired resistance (SAR) have been demonstrated to have a crucial role in mediating plant defense responses against this phytopathogen. To induce SAR, SA is converted to methyl salicylate (MeSA) by an SA-dependent methyltransferase (SAMT) and translocated systemically to prime noninfected distal tissues. Here, we generated sweet orange transgenic plants (based on cvs. Hamlin and Valencia) overexpressing the SAMT gene from Citrus (CsSAMT) and evaluated their resistance to citrus canker. We obtained four independent transgenic lines and confirmed their significantly higher MeSA volatilization compared to wild-type controls. Plants overexpressing CsSAMT showed reduced symptoms of citrus canker and bacterial populations in all transgenic lines without compromising plant development. One representative transgenic line (V44SAMT) was used to evaluate resistance response in primary and secondary sites. Without inoculation, V44SAMT modulated CsSAMT, CsNPR1, CsNPR3, and CsWRKY22 expression, indicating that this plant is in a primed defense status. The results demonstrate that MeSA signaling prompts the plant to respond more efficiently to pathogen attacks and induces immune responses in transgenic plants at both primary and secondary infection sites.

One-step reverse transcriptase polymerase chain reaction for the diagnosis of respiratory syncytial virus in children.

Human respiratory syncytial virus (HRSV) is the main cause of acute lower respiratory tract infections in infants and children. Rapid diagnosis is required to permit appropriate care and treatment and to avoid unnecessary antibiotic use. Reverse transcriptase (RT-PCR) and indirect immunofluorescence assay (IFA) methods have been considered important tools for virus detection due to their high sensitivity and specificity. In order to maximize use-simplicity and minimize the risk of sample cross-contamination inherent in two-step techniques, a RT-PCR method using only a single tube to detect HRSV in clinical samples was developed. Nasopharyngeal aspirates from 226 patients with acute respiratory illness, ranging from infants to 5 years old, were collected at the University Hospital of the University of Sao Paulo (HU-USP), and tested using IFA, one-step RT-PCR, and semi-nested RT-PCR. One hundred and two (45.1%) samples were positive by at least one of the three methods, and 75 (33.2%) were positive by all methods: 92 (40.7%) were positive by one-step RT-PCR, 84 (37.2%) by IFA, and 96 (42.5%) by the semi-nested RT-PCR technique. One-step RT-PCR was shown to be fast, sensitive, and specific for RSV diagnosis, without the added inconvenience and risk of false positive results associated with semi-nested PCR. The combined use of these two methods enhances HRSV detection.

Evaluation of epicardial adipose tissue in familial partial lipodystrophy.

BACKGROUND: Dunnigan type Familial Partial Lipodystrophy (FPLD) is characterized by loss of subcutaneous fat from the limbs and excessive accumulation on the visceral adipose tissue (VAT). Affected individuals have insulin resistance (IR), diabetes, dyslipidemia and early cardiovascular (CV) events, due to their imbalanced distribution of total body fat (TBF). Epicardial adipose tissue (EAT) is correlated with VAT. Hence, EAT could be a new index of cardiac and visceral adiposity with great potential as a marker of CV risk in FPLD. OBJECTIVE: Compare EAT in FPLD patients versus healthy controls. Moreover, we aimed to verify if EFT is related to anthropometrical (ATPM) and Dual-Energy X-ray Absorptiometry (DEXA) measures, as well as laboratory blood findings. We postulated that FPLD patients have enlarged EAT. METHODS: This is an observational, cross-sectional study. Six patients with a confirmed mutation in the LMNA gene for FPLD were enrolled in the study. Six sex, age and BMI-matched healthy controls were also selected. EFT was measured by transthoracic echocardiography (ECHO). All participants had body fat distribution evaluated by ATPM and by DEXA measures. Fasting blood samples were obtained for biochemical profiles and also for leptin measurements. RESULTS: Median EFT was significantly higher in the FPLD group than in matched controls (6.0 ± 3.6 mm vs. 0.0 ± 2.04 mm; p = 0.0306). Additionally, FPLD patients had lower leptin values. There was no significant correlation between EAT and ATPM and DEXA measurements, nor laboratory findings. CONCLUSIONS: This study demonstrates, for the first time, that EAT measured by ECHO is increased in FPLD patients, compared to healthy controls. However, it failed to prove a significant relation neither between EAT and DEXA, ATPM or laboratory variables analyzed.

Left atrial and left ventricular diastolic function in chronic Chagas disease.

BACKGROUND: Left atrial (LA) and left ventricular (LV) diastolic function analysis can yield new strategies to recognize early cardiac involvement and prognostic indicators in Chagas disease. METHODS: Patients with Chagas disease with the indeterminate (n = 69) or with the cardiac form (32 with changes limited to electrocardiography [stage A], 25 with changes in LV systolic function but no heart failure [HF; stage B], and 26 with HF) underwent evaluation of LV diastolic function (mitral inflow, pulmonary vein flow, color M-mode echocardiography, and tissue Doppler analysis), and LA function by three-dimensional echocardiography and strain analysis and were prospectively followed for the occurrence of clinical events. Echocardiograms were also obtained from 32 controls. RESULTS: LV diastolic dysfunction was gradually more prevalent and severe across groups from patients with the indeterminate form of Chagas disease to patients with HF. Tissue Doppler was the best tool to demonstrate the worsening of LV diastolic function across the groups (E' velocity: controls, 12.6 ± 2.3 cm/sec; patients with the indeterminate form, 12.1 ± 3.1 cm/sec; stage A, 10.3 ± 2.9 cm/sec; stage B, 8.3 ± 2.8 cm/sec; patients with HF, 5.6 ± 1.9; P < .0001). Although maximum LA volume was increased only in patients with HF, minimum LA volume (controls, 8 ± 2 mL/m(2); patients with the indeterminate form, 8 ± 2 mL/m(2); stage A, 9 ± 3 mL/m(2); stage B, 11 ± 4 mL/m(2); patients with HF, 27 ± 17 mL/m(2); P < .0001) and precontraction LA volume (controls, 11 ± 3 mL/m(2); patients with the indeterminate form, 12 ± 3 mL/m(2); stage A, 13 ± 4 mL/m(2); stage B, 16 ± 5 mL/m(2); patients with HF, 32 ± 19 mL/m(2); P < .0001) were increased in all cardiac form groups. LA conductive function was depressed in all cardiac form groups, while LA contractile function was depressed only in patients with HF. Cox proportional-hazards regression analysis revealed that end-systolic LV diameter (hazard ratio, 1.6; 95% confidence interval, 0.9-2.8; P = .09), E' velocity (hazard ratio, 0.5; 95% confidence interval, 0.3-0.8; P = .001), and peak negative global LA strain (hazard ratio, 1.21; 95% confidence interval, 1.02-1.4; P = .03), were independent predictors of clinical events. CONCLUSIONS: LV diastolic dysfunction was found in all forms of chronic Chagas disease, including those without LV systolic dysfunction. LV diastolic dysfunction may contribute to changes in LA volume and conductive function found in early stages of the cardiac form. Both LV diastolic function and LA contractile function were independent predictors of clinical events.

O valor do Doppler tecidual no diagnóstico diferencial da hipertrofia do atleta e da cardiomiopatia hipertrófica / The value of tissue Doppler in the differential diagnosis of athlete's heart and hypertrophic cardiomyopathy

Introdução: A cardiomiopatia hipertrófica é a responsável pelo maior número de mortes súbitas ou inesperadas por problemas cardíacos, em atletas jovens, e, quando tentamos esclarecer o diagnóstico pela ecocardiografia tradicional, a simples presença de hipertrofia, muitas vezes, não permite distinguir a sua etiologia, como a hipertrofia dos atletas e a hipertrofia secundária à hipertensão arterial. O Doppler tecidual (DTI) pode auxiliar na diferenciação das referidas hipertrofias. Objetivo: Avaliar os valores do Doppler tecidual (TDI) no anel mitral, em pacientes com cardiomiopatia hipertrófica, hipertrofia hipertensiva e hipertrofia, induzida pelo exercício, em atletas saudáveis de alta performance. Métodos: Foram estudados 147 pacientes: 30 voluntários saudáveis (grupo controle); 49 atletas de alta performance, jogadores de futebol profissionais do fluminense Futebol Clube , da cidade do rio de Janeiro-RJ (grupo dos atletas), avaliados na classe 1 de weber pela ergoespirometria; 40 portadores de hipertensão arterial sistêmica moderada controlada, com hipertrofia ventricular esquerda e função ventricular preservada (grupo dos hipertensos)...

Alterações precoces da função diastólica do ventrículo esquerdo e da função do átrio esquerdo na doença de chagas detectadas ao doppler tecidual e por novos índices ecocardiográficos: Ecocardiografia tridimensional e deformação miocárdica / Early changes in diastolic function of the left ventricle and left atrium function in Chagas disease detected by tissue Doppler echocardiographic indices and new: Three-dimensional echocardiography and myocardial deformation

Fundamento: A doença de Chagas ainda é importante problema de saúde pública na América Latina onde 12 a 15 milhões de pessoas são infectadas pelo Trypanosoma cruzi. A forma crônica cardíaca apresenta alta morbimortalidade. A disfunção diastólica do ventrículo esquerdo (VE) está presente em diferentes estágios da doença de Chagas e o seu diagnóstico pode ser uma estratégia para o reconhecimento precoce do acometimento cardíaco na doença de Chagas. Objetivos: Analisar a função diastólica do VE e a função do AE em pacientes na fase crônica da doença de Chagas sem acometimento global ou segmentar da função sistólica do VE. Métodos: Pacientes com doença de Chagas entre 18 e 60 anos de idade foram consecutivamente analisados no período de março de 2010 a agosto de 2011. Ecocardiogramas de 52 pacientes sem lesão cardíaca aparente, 29 no estágio A da fase cardíaca (alterações apenas no eletrocardiograma) e 25 controles foram analisados. A função diastólica do VE foi analisada pelo fluxo mitral, fluxo de veia pulmonar, velocidade de propagação ao modo M colorido, untwist do VE e Doppler tecidual do anel mitral. A função do AE foi avaliada pela ecocardiografia tridimensional e pela análise de deformação bidimensional...

Resultados: Todos os grupos tinham idade e massa corpórea similar. Todos os grupos tinham diâmetros cavitários, massa do VE e função sistólica do VE similares. A disfunção diastólica foi mais prevalente em pacientes no estágio A que em pacientes sem envolvimento cardíaco aparente. Os parâmetros derivados do Doppler tecidual foram os melhores para discriminar o grau de disfunção diastólica entre os grupos. A razão EE foi progressivamente maior e a razão EA foi progressivamente menor de controles, para indeterminados e pacientes no estágio A. Os volumes do AE foram maiores em pacientes no estágio A, porém as frações de esvaziamento do AE foram similares entre os grupos. O pico positivo do do AE foi menor no estágio A enquanto que os outros parâmetros do do AE não diferiram entre os grupos. Conclusões: Pacientes com doença de Chagas e função sistólica do VE preservada apresentam disfunção diastólica, a qual é mais prevalente em pacientes no estágio A. O Doppler tecidual é o melhor índice para identificar a diferença na função diastólica entre os grupos estudados. Apenas a função condutiva do AE estava deprimida em pacientes no estágio A da fase cardíaca da doença de Chagas. Novos estudos são necessários para definir o valor prognóstico dos achados dessa Tese...

Variabilidade genética da proteína G do HRSV de amostras com o genótipo BA / Genetic variability of the G protein of HRSV samples with BA genotype

Para estudar a epidemiologia e evolução do novo genótipo HRSVB denominado BA, caracterizado pela duplicação de 60 nt na proteína G, analisamos 4274 amostras clínicas coletadas de crianças hospitalizadas no Hospital Universitário/USP e Hospital da Santa Casa de Misericórdia, cidade de São Paulo entre os anos de 2001 e 2009. As amostras foram submetidas a RT-PCR seguido do sequenciamento da região G2 do gene G. A duplicação de 60 nt foi detectada em 104 (28.3%) das 367 amostras analisadas. De 2001 a 2004 a circulação do genótipo BA foi baixa, seguido de 85.4% (2005), 57.6% (2006), sem circulação (2007), 10% (2008) e 75% (2009) do total de amostras sequenciadas. As sequências foram comparadas com outras BA de diversos países do mundo. A análise filogenética preliminar dividiu as amostras brasileiras em 5 grupos (BA-I, BAII, BAIII, BAIV e BAVI), sendo que a maioria das amostras de 2005 a 2009 agruparam juntas na linhagem BA-IV, estabelecendo um grupo temporal e geográfico.

In order to study the epidemiology and evolution of the new genotype of HRSVB named BA characterized with a 60-nt duplication in the G protein we analyzed 4274 clinical samples collected from children hospitalized in University Hospital/USP and Santa Casa de Misericórdia Hospital, in São Paulo city, during 2001 to 2009. The samples were subject to RT-PCR followed by sequencing of the G2 region of the G gene. The 60 nt-duplication were detected in 104 (28.3%) of 367 sequencing samples. From 2001 to 2004 the circulation of the BA genotype was low, followed by 85.4% (2005), 57.6% (2006), no circulation (2007), 10% (2008) and 75% (2009) of total sequencing samples. Sequences were compared with G sequences with the 60 nt-duplication globally sampled. Preliminary phylogenetic analysis divided Brazilian samples into five clusters (BA-I, BAII, BAIII and BAVI and BAIV), and almost all samples from 2005 to 2009 were clustered together in BA-IV lineage, establishing temporal and geographical cluster.

Estimativa do valor do diâmetro da gordura epicárdica medida ao ecocardiograma em uma população normal / Reference values for epicardial fat diameter measured by echocardiography in a normal population

Objetivos: A gordura epicárdica é um depósito de gordura visceral, marcador de risco cardiovascular. O valor normal de seu diâmetro ainda precisa ser definido e, portanto, objetivamos avalia-lo em uma população normal. Método: Foram avaliados 60 indivíduos assintomáticos, não doentes, que apresentavam ecocardiograma e Doppler de carótidas normais. A espessura da gordura epicárdica foi medida ao ecocardiograma bidimensional à frente da parede livre do ventrículo direito, perpendicularmente, ao ânulo aórtico, no corte paraesternal, eixo longo, ao final da sístole. Resultados: Os indivíduos (30 homens - 50%) tinham idade média de 34 +- 11 anos. A espessura média da gordura epicárdica foi de 2,8 +- 1,2mm, sem diferença significativa entre homens e mulheres. No grupo de indivíduos com idade < - 30 anos, a espessura da gordura epicárdica foi de 2,3 +- 0,8mm (n=28), nos indivíduos com idade entre 31 e 44. Esse valor foi de 3,0 +- 1,1mm (n=19), e, naqueles com idade >- 45 anos, o valor foi de 3,5 +-1,6mm (n=13), com diferença significativa (p=0,006) entre os grupos pelo teste de ANOVA. Houve correlação positiva significativa...

Gordura epicárdica medida ao ecocardiograma correlaciona-se com ateromatose carotídea / Epicardial fat measured by echocardiography correlates to carotid atheromatosis

Fundamento: A presença de placas carotídeas é um marcador de doença cardiovascular já estabelecido. A medida da gordura epicárdica é um novo método de avaliação da gordura visceral. A relação entre o diâmetro da gordura epicárdica com o risco cardiovascular está sendo investigada, Objetivo: Avaliar a correlação entre a espessura da gordura epicárdica, medida pelo ecocardiograma, e ateromatose das artérias carótidas, Métodos: Foram avaliados 311 pacientes consecutivos, encaminhados para a realização de ecocardiograma ou ultrassonografia carotídea, com indicações clínicas comuns. A espessura da gordura epicárdica, na parede livre do ventrículo direito, foi avaliada com o ecocardiograma e o seu diâmetro, correlacionado com a presença ou não de ateromatose das artérias carótidas. Resultados: Os pacientes (45 por cento homens) tinham idade média de 56 +- 17 anos. A espessura média de gordura epicárdica foi de 5,4 +- 2,6mm. A espessura da gordura epicárdica foi, significativamente, maior nos pacientes com ateromatose das artérias carótidas (7,0 +- 2,2, n=141 vs. 4,7 +-2,5,n=166,p<0,001). A espessura da gordura epicárdica foi maior nos pacientes com hipertensão, diabetes mellitus, doença coronariana ou dislipidemia. Após regressão múltipla...

Diferentes significados da disfunção diastólica tipo I, conforme o grupo estudado - nova proposta de classificação da disfunção diastólica tipo I com Doppler ecocardiograma aliado ao Doppler tecidual / Diastolic dysfunction grade I associated with different implications according to the studied group - new proposal for diastolic dysfunction grade I classification using Doppler echocardiography and tissue Doppler imaging

Atualmente dispõe-se do Doppler pulsado e do Doppler tecidual paraclassificar a disfunção diastólica em quatro graus.Ainda assim, considera-se não ser adequado atribuir um mesmo grau dedisfunção diastólica a indivíduos tão distintos como normaise pacientes hipertensos, isquêmicos e outros. Neste trabalho, o objetivo édemonstrar que pacientes com patologias distintas e ummesmo grau de disfunção diastólica podem ter característicasecocardiográficas bastante distintas.Foram estudados 86 indivíduos, sendo 25 atletas profissionais, 27adultos normais, 17 hipertensos e 17 coronariopatas, pelo ecocardiograma Doppler e Doppler tecidual. Foram determinadas as funçõessistólica, diastólica, diâmetros cavitários e massa do VE.Os atletas não apresentavam disfunção diastólica. Entre indivíduos com disfunção diastólica grau I, hipertensos ecoronariopatas, apresentavam espessuras parietais, massa do VE e diâmetro do AE maiores (P

A gravidade da lesão do fundo de olho e o padrão de hipertrofia ventricular esquerda na hipertensão arterial sistêmica refratária ao tratamento / Severity of retinopathy and left ventricular hypertrophy pattern in treatment-resistant systemic arterial hypertension

Fundamentos:A avaliação dos órgãos-alvo na hipertensão arterial refratária ao tratamento(HRT) permite uma estratificação prognóstica. Objetivo:Relacionar a lesão no fundo de olho (FO) com o padrão de hipertrofia ventricular esquerda(HVE) e os níveis médios de pressão sistólica nas 24h, na HRT. Métodos:Estudo transversal com 194 sujeitos do ambulatório de hipertensão arterial(INC-MS), sendo 42(21,6 por cento) com HRT. A retinopatia foi classificada de acordo com keith-wagener-backer(KWB); as variáveis analisadas ecocardiograficamente foram: índice de massa do VE(IMVE), para o diagnóstico de HVE; e a espessura relativa de parede do VE(ERP), para avaliar o padrão, se concêntrica(C) ou excêntrica(E). Foi estudada a pressão sistólica média de 24 hs(PSM24H) obtida pela MAPA. A análise dos dados foi testada por t de student, oneway ANOVA e quiquadrado ou exato de fisher para tabelas de contingência(a<0,05). Resultados: Todos os pacientes com HRT apresentavam lesão no FO e HVE. Foram estratificados em quatro grupos, segundo o FO(KWBII e KWBIII) e o ecocardiograma(HVEC e HVE E). Não houve diferença nos parâmetros antropométricos entre os grupos (p=NS) e na distribuição de HVE C e E entre os sujeitos com KWB II e KWB III (x=1,84; p=0,17). Nos indivíduos com HVE E(p<0,001) o que não foi observado nos KWB II e KWB III(p=NS). Conclusão: Nos sujeitos com HRT, lesões de FO e HVE foram dominantes. Os níveis de PSM24H elevados estão associados ao HVE C, mas não ao FO.

Doppler tecidual em indivíduos normotensos e hipertensos e sua correlação com o peptídio natriurético B plasmático / Tissue doppler in normotensive and hypertensive individuals and its correlation with natriureic peptide (plasmatic B)

Objetivo:Verificar a correlação existente entre o peptídio natriurético B (BNP), marcador fidedigno da disfunção miocárdica e a velocidade Ea ao Doppler Tissular, associada à disfunção diastólica, em pacientes normotensos e hipertensos com a função sistólica preservada.Métodos:Foram estudaods 101 pacientes, 68 do sexo masculino e 33 do sexo feminino, assim distribuídos:Grupo I 40 pacientes normotensos; Grupo II 61 pacientes portadores de hipertensão arterial sitêmica;Grupo IIa 52 pacientes hipertensos, com BNP maior 100pg/ml;Grupo IIb 9 pacientes hipertensos, com BNP menor 100pg/ml.Resultados:Grupo I Pacientes normotensos: Idade média:38 anos;Média do AE:35mm.Fração de ejeção:65 por cento;Massa do VE:162;EPW 79cm/s: DT(Ea) 18,8cm/s