RESUMO
The pivotal role of human endometrial stromal cells (hESCs) in the development of endometriosis lies in their ability to adopt a pro-invasive and proinflammatory profile upon migration to areas outside the uterus. However, the molecular mechanisms involved in these events remain unclear. In this study, we investigated how angiotensin II (Ang II) affects the plasminogen-plasmin system in hESCs, and the mechanisms underlying cell proliferation, migration, matrix degradation, and inflammation. Precursors, receptors, and peptidases involved in angiotensin metabolism increased significantly in Ang II-treated hESCs. The expression and activity of tissue (tPA)- and urokinase (uPA)- type plasminogen activators and the receptor for uPA (uPAR) were induced in the presence of Ang II. The up-regulation of tPA-uPA/uPAR pathway significantly contributes to heightened plasmin production both on the surface of hESCs and in their conditioned media. As a result, the plasmin generation induced by Ang II enhances the degradation of fibrin and matrix proteins, while also boosting hESC viability, proliferation, and migration through the up-regulation of growth factor expression. Notably, Ang II-induced hESC migration was dependent on the generation of active plasmin on cell surface. Ang II regulates oxidative and inflammatory signalling in hESCs primarily via NADPH oxidase and through the up-regulation of proinflammatory cytokines and adhesion molecules. Interestingly, Ang II receptor (AT1R) blockage, decreased plasmin generation, tPA-uPA/uPAR expression and hESC migration. Our results suggest that Ang II/AT1R axis regulates hESC proliferation and migration through tPA-uPA/uPAR pathway activation and plasmin generation. We propose the Ang II/AT1R axis as a potential target for endometriosis treatment.
Assuntos
Angiotensina II , Movimento Celular , Endométrio , Matriz Extracelular , Fibrinolisina , Plasminogênio , Receptor Tipo 1 de Angiotensina , Transdução de Sinais , Células Estromais , Humanos , Feminino , Endométrio/metabolismo , Endométrio/citologia , Endométrio/efeitos dos fármacos , Movimento Celular/efeitos dos fármacos , Movimento Celular/fisiologia , Fibrinolisina/metabolismo , Células Estromais/metabolismo , Células Estromais/efeitos dos fármacos , Angiotensina II/farmacologia , Transdução de Sinais/fisiologia , Transdução de Sinais/efeitos dos fármacos , Matriz Extracelular/metabolismo , Matriz Extracelular/efeitos dos fármacos , Receptor Tipo 1 de Angiotensina/metabolismo , Plasminogênio/metabolismo , Células Cultivadas , Inflamação/metabolismoRESUMO
Tissue engineering replaces injured tissues by manipulating cells, making scaffolds, and using molecules that stimulate the tissue. Mesenchymal stem cells (MSCs) are good candidates for tissue engineering, as this is one of the cell types which are recruited to repair injured tissues. Scaffolds are structural devices that allow cell fixation and migration, with polypropylene meshes being an example. This study aims to evaluate the culture of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs), isolated from C57Bl/6 GFP + mice, in two types of polypropylene meshes (macroporous and microporous) in conventional culture plates and plates coated with methacrylate, over a period of fifteen days. The objective was to obtain the best interaction protocol between the mesh and the cells. The choice of the best method was based on adherence, maintenance of adherence and viability during culture. The amount of ADSCs adhering was checked daily by counting in a Neubauer Chamber and by using a growth curve performed with the MTT assay. The ADSCs adhering to the meshes were visualized with DAPI, panotic, hematoxylin and eosin, immunohistochemistry (integrin), and immunofluorescence (actin). ADSCs adhere to all forms of culture and to the two types of polypropylene mesh. ADSCs adhered more to the microporous mesh, within the seven day period of culture and in the plates without methacrylate. Thus, polypropylene meshes offer a good scaffold for ADSCs to adhere to.
A engenharia de tecidos substitui tecidos danificados com a manipulação de células, confecção de arcabouços e a utilização de moléculas que estimulem o tecido. As células-tronco mesenquimais (MSCs) são boas candidatas para engenharia de tecido, pois são um dos tipos celulares recrutadas para a reparação de tecidos lesionados. O arcabouço deve ser um dispositivo estrutural que forneça uma estrutura para o crescimento e a diferenciação celular no sítio, sendo a tela de polipropileno um exemplo. O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo de células-tronco mesenquimais de tecido de adiposo (ADSCs), isoladas de camundongos C57Bl/6 GFP+, em dois tipos de telas de polipropileno (macroporosa e microporosa) em placas de cultura convencionais e revestidas com metacrilato, durante quinze dias, para obter o melhor protocolo de interação entre a tela e as células. A escolha do melhor método foi baseada na adesão, manutenção da adesão e viabilidade durante cultivo. A quantidade de ADSCs aderidas foi verificada diariamente em contagem em Câmara de Neubauer e através de uma curva de crescimento realizada através de ensaio de MTT. As ADSCs aderidas nas telas foram visualizadas com a marcação de DAPI, panótico, hematoxilina e eosina, imumo-histoquímica (integrina) e imunofluorescência (actina). Nas duas formas de cultivo e nos dois tipos de telas de polipropileno houve aderência das ADSCs. Houve maior aderência na tela microporosa, no período de sete dias de cultivo e em placas sem metacrilato. Conclui-se que a tela de polipropileno oferece um bom arcabouço para as ADSCs se aderirem.
Assuntos
Animais , Camundongos , Polipropilenos/análise , Inclusão do Tecido/métodos , Engenharia Tecidual/métodos , Alicerces Teciduais , Células-Tronco Mesenquimais , CamundongosRESUMO
A engenharia de tecidos tem como objetivo substituir tecidos danificados, manipulando células, confecção de arcabouços e a utilização de moléculas que estimulem o tecido. A proposta deste estudo foi avaliar duas técnicas de cultivo de células-tronco mesenquimais (MSC) em diferentes placas de cultura, utilizando dois tipos de telas de polipropileno (macroporoso e microporoso), para obter as melhores condições de interação entre a tela e as células, e definir uma proposta de protético para engenharia de tecidos. As telas de polipropileno foram cultivadas com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (ADSCs) isoladas de camundongos C57B1/6 GFP+ durante quinze dias em placas revestidas com metacrilato ou não revestidas com metacrilato. A quantidade de ADSCs aderidas foram verificadas diariamente em Câmara de Neubauer e através de uma curva de crescimento realizada pelo ensaio MTT. As ADSCs aderidas às malhas foram visualizadas com marcação de DAPI, panóticas, hematoxilina e eosina imuno-histoquímica e imunofluorescência. O melhor protocolo foi na tela microporosa, no o período de sete dias de cultivo e em placas sem metacrilato. Conclui-se que a tela de polipropileno fornece um bom suporte para as ADSCs se aderirem podendo ser utilizada na engenharia de tecidos.
Tissue engineering replaces injured tissues by manipulating cells, making scaffolds, and using molecules that stimulate the tissue. Mesenchymal stem cells (MSCs) are good candidates for tissue engineering, as this is one of the cell types which are recruited to repair injured tissues. Scaffolds are structural devices that allow cell fixation and migration, with polypropylene meshes being an example. This study aims to evaluate the culture of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs), isolated from C57Bl/6 GFP + mice, in two types of polypropylene meshes (macroporous and microporous) in conventional culture plates and plates coated with methacrylate, over a period of fifteen days. The objective was to obtain the best interaction protocol between the mesh and the cells. The choice of the best method was based on adherence, maintenance of adherence and viability during culture. The amount of ADSCs adhering was checked daily by counting in a Neubauer Chamber and by using a growth curve performed with the MTT assay. The ADSCs adhering to the meshes were visualized with DAPI, panotic, hematoxylin and eosin, immunohistochemistry (integrin), and immunofluorescence (actin). ADSCs adhere to all forms of culture and to the two types of polypropylene mesh. ADSCs adhered more to the microporous mesh, within the seven day period of culture and in the plates without methacrylate. Thus, polypropylene meshes offer a good scaffold for ADSCs to adhere to.
Assuntos
Animais , Camundongos , Camundongos/fisiologia , Células-Tronco Mesenquimais/química , Polipropilenos/análise , Polipropilenos/químicaRESUMO
Introduction: Chlamydia trachomatis (CT) is the most prevalent sexually transmitted bacterial infection, affecting mainly young, sexually active women. Untreated infection may lead to reproductive complications due to tubal damage. Infections during pregnancy may cause preterm labor, low birth weight, perinatal death, and neonatal conjunctivitis and pneumonia. There are few data on CT infection in Brazil. The aim of this study was to determine CT prevalence in infertile and pregnant women. Methods: A cross-sectional study included 77 infertile and 60 asymptomatic pregnant women. First-void urine was tested for CT using PCR (Polymerase Chain Reaction). Blood samples were collected for CT IgG antibodies testing using indirect immunofluorescence. A questionnaire about medical, gynecological, and sexual history was completed by all participants. Results: We found statistically similar prevalence of PCR and IgG antibodies between the groups. There was a 61% prevalence of CT IgG antibodies in infertile women and 56.7% in pregnant women. PCR was positive in only one (1.3%) infertile woman and in none pregnant women. Conclusion: There is a high prevalence of CT IgG antibody in Brazilian pregnant and infertile women, but we found a low prevalence of positive PCR in the urine samples. CT antibodies were associated with sexual behavior and smoking (AU)
Assuntos
Humanos , Feminino , Adulto , Infecções por Chlamydia/epidemiologia , Prevalência , Infecções por Chlamydia/diagnóstico , Estudos Transversais , Fertilidade , Infertilidade , Gravidez , Complicações Infecciosas na Gravidez/epidemiologiaRESUMO
Embryonic stem cells are pluripotent cell lines with the capacity of self-renewal and a broad differentiation plasticity. They are isolated from preimplantation embryos and can be cultured in vitro for long time without losing their pluripotency. Embryonic stem cells can also differentiate in vitro with the proper combination of growth and differentiation factors, cells will differentiate into more advanced stages of embryogenesis generating different adult cell type. In the present study, we induced the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells (line R1) into cardiomyocytes and neuronal cells. These differentiations were evaluated by reverse transcription-polymerase chain reaction to verify presence of tissue-specific markers.
Células-tronco embrionárias são linhagens celulares pluripotentes capazes de se multiplicar indefinidamente e com grande capacidade de diferenciação celular. São isoladas de embriões em estágio pré-implantacional e podem ser cultivadas por longo tempo em laboratório sem perder sua pluripotencialidade. Células-tronco embrionárias podem, ainda, se diferenciar in vitro através da adição de fatores de crescimento e diferenciação ao meio de cultivo. As células se diferenciarão em estágios mais avançados de embriogênese, gerando tipos diferentes de células adultas. No presente estudo, induzimos a diferenciação in vitro de células-tronco embrionárias de camundongos (linhagem R1) em células de tecido cardíaco e nervoso. A diferenciação foi avaliada pela reação em cadeia da polimerase precedida de transcrição reversa para verificar a presença de marcadores tecido-específicos.
Assuntos
Animais , Cobaias , Camundongos , Células-Tronco Embrionárias/citologia , Diferenciação Celular/genética , Técnicas In Vitro , Miocárdio/citologia , Tecido Nervoso/citologia , Técnicas de Cultura de Células/métodosRESUMO
Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos da utilização combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais (FR-5® e Botu-Crio®) sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados de dois garanhões. As amostras foram avaliadas por microscopia de contraste de fase e microscopia de epifluorescência, observando-se a motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e a integridade e a funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu-Crio® apresentou as maiores médias nas análises de motilidade total e progressiva, após o descongelamento. O diluente Botu-Crio®, isoladamente, preservou também as membranas destes, quando foram realizadas as análises de integridade utilizando teste com diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico.
During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to several deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates from two stallions were analyzed. The total and progressive motility of fresh and post-thawing semen samples were evaluated by patterns assays. Function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. Integrity of plasmatic membrane was evaluated using carboxifluorescein diacatate and iodidium propide fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combination of Botu-Crio® and automated curves showed better results on total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed to better preserve the membrane integrity and function.
Assuntos
Animais , Masculino , Crioprotetores , Criopreservação/veterinária , Cavalos , Sêmen , EspermatozoidesRESUMO
O Angiostrongylus costaricensis é um nematódeo intra-arterial de roedores. O homem acidentalmente pode se infectar ao ingerir alimentos ou água contaminados. Nosso objetivo foi o de descrever as estruturas do parasita que säo reconhecidas por soros humanos das fases aguda e convalescente da angiostrongilíase abdominal. O método de imunofluorescência indireta foi empregado para estudar a reatividade sobre ovos íntegros e cortes de vermes fêmeas e de larvas de primeiro estágio (L1). L1 também foram estudadas íntegras e depois de tratamento por sonicaçäo. Fluorescência sempre mais intensa com soros de fase aguda foi detectada na superfície dos ovos inteiros e nos fragmentos de L1 e näo estava presente nem nas L1 inteiras, nem em seus cortes. Uma reatividade inespecífica foi detectada na borda cuticular da cavidade geral e sobre os órgäos reprodutores. Os dados indicam que estes órgäos säo fonte importante de antigenicidade