Avaliação de diferentes procedimentos para extração de DNA a partir de esfregaços corados pelo método de Ziehl-Neelsen / Evaluation of different methods of DNA extraction from baciloscopic tests of Ziehl-Neelsen stainig
O Pará é o estado com maior taxa de incidência de tuberculose (TB) na região Norte, com 36,3 casos por 100 mil habitantes em 2004. A obtenção de DNA de qualidade a partir de material fixado em lâminas coradas pelo método de Ziehl-Neelsen (ZN) supriria a falta de amostras representativas para estudos de genotipagem, contribuindo para melhor entendimento da dinâmica de transmissão da TB. O presente estudo avaliou quatro diferentes procedimentos para obtenção de DNA de M. tuberculosis a partir de 196 esfregaços corados pelo método de ZN, que utilizaram xilol e N-acetil-L-cisteína (NALC) em conjunto, de forma isolada ou nenhuma destas substâncias, e ainda dois protocolos de amplificação distintos, um com o adjuvante de PCRglicerol e outro com betaína. O percentual de amplificação foi superior para as amostras que foram submetidas ao procedimento que utilizou somente o xilol e ao que não utilizou nenhuma substância, sendo 77 por cento e 67 por cento, respectivamente, para o protocolo com glicerol, e de 98 por cento e de 96 por cento para o protocolo com betaína. A partir dos resultados obtidos, não é recomendado o uso de xilol ou NALC nos procedimentos de remoção das amostras e sugere-se a inclusão do adjuvante betaína nas reações, assim como o uso do DNA extraído de lâminas coradas pelo método de ZN em análises baseadas em PCR.