Expression of O(6)-methylguanine-DNA methyltransferase causes lomustine resistance in canine lymphoma cells.

ABSTRACT

The DNA repair protein O (6)-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) causes resistance to nitrosoureas in various human cancers. In this study, we analyzed the correlation between canine lymphomas and MGMT in vitro. Two of five canine lymphoma cell lines required higher concentrations of lomustine to inhibit cell growth by 50%, but their sensitivity to the drug increased when they were cultured with an MGMT inhibitor. Fluorometric oligonucleotide assay and real-time polymerase chain reaction of these cell lines revealed MGMT activity and high MGMT mRNA expression, respectively. We analyzed the methylation status of the CpG islands of the canine MGMT gene by the bisulfite-sequencing method. Unlike human cells, the canine lymphoma cell lines did not show significant correlation between methylation status and MGMT suppression levels. Our results suggest that in canine lymphoma MGMT activity may influence sensitivity to nitrosoureas; thus, inhibition of MGMT activity would benefit nitrosourea-resistant patients. Additional studies are necessary to elucidate the mechanism of regulation of MGMT expression.

La protéine de réparation O6-méthylguanine-DNA méthyltransferase (MGMT) cause de la résistance aux produits nitroso-urée dans divers cancers humains. Dans la présente étude nous avons analysé in vitro la corrélation entre les lymphomes canins et le MGMT. Deux des cinq lignées cellulaires de lymphome canin ont nécessité des concentrations plus élevées de lomustine pour inhiber de 50 % la croissance cellulaire, mais leur sensibilité au médicament augmenta lorsqu'elles furent mises en culture avec un inhibiteur de MGMT. Une épreuve fluorométrique des oligonucléotides et une épreuve d'amplification en chaîne par la polymérase en temps réel sur ces lignées cellulaires ont révélé, respectivement, une activité MGMT et une expression élevée d'ARNm de MGMT. Nous avons analysé le statut de méthylation des ilots CpG du gène MGMT canin par la méthode de séquençage au bisulfite. Contrairement aux cellules humaines, les lignées cellulaires canines de lymphome n'ont pas montré de corrélation significative entre le statut de méthylation et les niveaux de suppression de MGMT. Nos résultats suggèrent que lors de lymphome canin l'activité de MGMT peut influencer la sensibilité aux produits nitroso-urée; ainsi, l'inhibition de l'activité MGMT bénéficierait les patients résistants au nitroso-urée. Des études additionnelles sont nécessaires pour élucider le mécanisme de régulation de l'expression de MGMT.(Traduit par Docteur Serge Messier).