Immunohistochemistry for detection of avian infectious bronchitis virus strain M41 in the proventriculus and nervous system of experimentally infected chicken embryos.

BACKGROUND: Infectious bronchitis virus primarily induces a disease of the respiratory system, different IBV strains may show variable tissue tropisms and also affect the oviduct and the kidneys. Proventriculitis was also associated with some new IBV strains. Aim of this study was to investigate by immunohistochemistry (IHC) the tissue tropism of avian infectious bronchitis virus (IBV) strain M41 in experimentally infected chicken embryos. RESULTS: To this end chicken embryos were inoculated in the allantoic sac with 10(3) EID(50) of IBV M41 at 10 days of age. At 48, 72, and 120 h postinoculation (PI), embryos and chorioallantoic membranes (CAM) were sampled, fixed, and paraffin-wax embedded. Allantoic fluid was also collected and titrated in chicken embryo kidney cells (CEK). The sensitivity of IHC in detecting IBV antigens in the CAM of inoculated eggs matched the virus reisolation and detection in CEK. Using IHC, antigens of IBV were detected in nasal epithelium, trachea, lung, spleen, myocardial vasculature, liver, gastrointestinal tract, kidney, skin, sclera of the eye, spinal cord, as well as in brain neurons of the inoculated embryos. These results were consistent with virus isolation and denote the wide tissue tropism of IBV M41 in the chicken embryo. Most importantly, we found infection of vasculature and smooth muscle of the proventriculus which has not seen before with IBV strain M41. CONCLUSION: IHC can be an additional useful tool for diagnosis of IBV infection in chickens and allows further studies to foster a deeper understanding of the pathogenesis of infections with IBV strains of different virulence. Moreover, these results underline that embryonic tissues in addition to CAM could be also used as possible source to generate IBV antigens for diagnostic purposes.

Diarrhea caused by rotavirus A, B, and C in suckling piglets from southern Brazil: molecular detection and histologic and immunohistochemical characterization.

Rotavirus (RV) is an important viral pathogen causing diarrhea in piglets and other mammals worldwide. We describe 34 cases from 4 diarrheal outbreaks caused by RV in unvaccinated farrowing units in southern Brazil from 2011 to 2013. We performed autopsy, histologic examinations, bacterial culture, RV immunohistochemistry (IHC), and enteric virus detection through molecular assays for rotavirus A, B, and C, transmissible gastroenteritis virus, porcine epidemic diarrhea virus, sapovirus, norovirus, and kobuvirus. Histologically, villus atrophy (29 of 34) and epithelial vacuolation (27 of 34) occurred in all 4 outbreaks. Cell debris in the lamina propria occurred in 20 cases, mostly from outbreaks A (8 of 11), C (4 of 6), and D (7 of 11). IHC was positive for RV in 21 of 34 samples. RT-PCR was positive for RV in 20 of 30 samples; RV-C was the most frequently detected RV ( n = 17). Kobuvirus was detected in 11 samples, and, in 3 of them, there was single detection of this enteric virus.

Brain lesions in pigs affected with postweaning multisystemic wasting syndrome.

Anti-porcine circovirus type 2 (anti-PCV2) immunostaining was associated with cerebellar lymphohistiocytic vasculitis combined with hemorrhages (50 pigs) or with lymphohistiocytic meningitis (23 pigs) in pigs naturally affected with postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). The animals originated from 12 farms in Rio Grande do Sul, Brazil. In total, 456 unthrifty 3- to 5-month-old postweaning pigs confirmed as PMWS cases were necropsied. Although most findings mimicked those extensively reported in PMWS-affected pigs, there were distinctive brain lesions that included multiple hemorrhages in the cerebellar leptomeninges associated with lymphohistiocytic vasculitis and fibrinoid degeneration in vessels of the cerebellum and periventricular areas (69 pigs). These vascular lesions were also seen in conjunction with lymphohistiocytic meningitis (38 additional pigs). PCV2 antigen was immunohistochemically demonstrated in the cytoplasm and nuclei from intralesional perivascular macrophages and endothelial-like cells in brain tissues. Together these findings suggest that these lesions were caused by PCV2.

Muco-cutaneous candidiasis in two pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome.

In two distinct commercial swine herds, poor weight gain and an increased number of animals showing wasting were observed among nursery and growing pigs. Cases of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and infection with Haemophilus parasuis had been previously diagnosed in these herds. One growing wasted pig from each herd was necropsied and showed enlarged lymph nodes. Pseudomembranous material adhered to the dorsum of the tongue, soft and hard palate in case 1, and in case 2, fibrinous material was seen as whitish plaques on the oesophageal surface with hyperkeratosis of the non-glandular stomach. The main histological lesions in both cases were found in lymphoid tissues with a multifocal accentuated lymphohistiocytic infiltrate, areas of lymphoid depletion and intracytoplasmic inclusions in histiocytic cells in lymph nodes and Payer's patches. Focally, extensive ulceration was found in the stratified pavement epithelium of the tongue with necrosis and necrosuppurative infiltrate in case 1; in case 2, there was ulceration in the stomach with lymphohistiocytic infiltrate in the submucosa and ulceration in the mucosa of the oesophagus associated with yeast cells and pseudo-hyphae. Candida albicans was isolated from the oral cavity lesions. Immunohistochemistry of the lymph nodes was positive for porcine circovirus 2 (PCV2). The association between PMWS and mucocutaneous candidiasis reported here supports the potential immunosuppressive state of PMWS infected pigs.

Pericardite em suínos ao abate no Rio Grande Sul: avaliação de agentes bacterianos e lesões associadas / Bacterial agents and lesions associated with pericarditis in slaughter pigs in Rio Grande do Sul, Brazil

O objetivo do presente estudo foi identificar a frequência de lesões macroscópicas e microscópicas e dos agentes bacterianos envolvidos em pericardites em suínos no abate no Estado do Rio Grande do Sul. As amostras foram coletadas em frigoríficos de suínos com Serviço de Inspeção Federal (SIF) entre fevereiro a outubro de 2010 e a condenação por pericardite dos animais acompanhados foi de 3,9 por cento(299/7.571). No total foram investigados 91 casos de pericardites, 89% deles foram classificados como crônicos por histopatologia e pleurite crônica foi observada em 47 porcento dos pulmões correspondentes, todavia não houve associação significativa entre as duas lesões. Os agentes bacterianos isolados a partir dos corações foram Streptococcus spp., Pasteurella multocida, Haemophilus parasuis e Streptococcus suis. DNA bacterianos mais detectados pela PCR foram de Mycoplasma hyopneumoniae e Actinobacillus pleuropneumoniae. Houve associação significativa entre isolamento de P. multocida e Streptococcus sp. nos corações e pulmões correspondentes. Esses resultados sugerem que a infecção no pulmão possa ter servido de porta de entrada para a colonização do pericárdio adjacente. Apesar de M. hyopneumoniae ter sido o agente detectado com maior frequência pela PCR em corações e pulmões correspondentes, não houve associação significativa da detecção dos agentes nos órgãos. Isto sugere que as infecções foram eventos independentes. Os demais agentes investigados não apresentaram associação significativa entre isolamento ou detecção de DNA em coração e pulmão correspondente. Outro achado importante foi a presença de coinfecções bacterianas em 2 por cento dos corações e por PCR foi detectado DNA bacteriano de dois ou mais agentes em 16,5 por cento dos corações. Esses resultados sugerem que as coinfecções em pericardites precisam ser melhor estudadas.

The objective of the study was to identify the frequency of macroscopic and microscopic lesions and bacterial agents involved with pericarditis in slaughter pigs in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. The samples were collected in slaughterhouses with Federal Inspection Service (SIF) between February and October, 2010. Condemnation due to pericarditis in the examined animals was 3.9 percent (299/7,571). Ninety one cases of pericarditis were examined and by histopathology 89% were chronic and 47 percent of the corresponding lungs showed chronic pleuritis, but there was no significant association between both lesions. The bacterial agents isolated from the hearts were Streptococcus spp., Pasteurella multocida, Haemophilus parasuis and Streptococcus suis. Bacterial DNA from Mycoplasma hyopneumoniae and Actinobacillus pleuropneumoniae were the most frequently detected by PCR. There was significant association between isolation of P. multocida and Streptococcus spp. in the hearts and corresponding lungs. The results suggest that lung infection could act as a port of entry to the colonization of the adjacent pericardium. In spite of the fact that M. hyopneumoniae was the agent more frequently identified by PCR in the heart and corresponding lung, there was no significant association of the agent in the organs. This suggests that the infections were independent events. The other agents investigated did not show significant association between isolation or DNA detection in heart and corresponding lungs. Another important finding was the presence of coinfection between bacterial agents in 2 percent of the hearts and by PCR were identified bacterial DNA of two or more agents in 16.5 percent of the hearts. These results suggest that coinfections in cases of pericarditis need further investigation.

Histopathological and immunohistochemical findings of swine with spontaneous influenza A infection in Brazil, 2009-2010 / Achados histopatológicos e imuno-histoquímicos de suínos com infecção espontânea de influenza A no Brasil, 2009-2010

Swine influenza (SI) is caused by the type A swine influenza virus (SIV). It is a highly contagious disease with a rapid course and recovery. The major clinical signs and symptoms are cough, fever, anorexia and poor performance. The disease has been associated with other co-infections in many countries, but not in Brazil, where, however, the first outbreak has been reported in 2011. The main aim of this study was to characterize the histological features in association with the immunohistochemical (IHC) results for influenza A (IA), porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) in lung samples from 60 pigs submitted to Setor de Patologia Veterinária at the Universidade Federal do Rio Grande do Sul (SPV-UFRGS), Brazil, during 2009-2010. All of these lung samples had changes characterized by interstitial pneumonia with necrotizing bronchiolitis, never observed previously in the evaluation of swine lungs in our laboratory routine. Pigs in this study had showed clinical signs of a respiratory infection. Swine samples originated from Rio Grande do Sul 31 (52%), Santa Catarina 14 (23%), Paraná 11 (18%), and Mato Grosso do Sul 4 (7%). Positive anti-IA IHC labelling was observed in 45% of the cases, which were associated with necrotizing bronchiolitis, atelectasis, purulent bronchopneumonia and hyperemia. Moreover, type II pneumocyte hyperplasia, alveolar and bronchiolar polyp-like structures, bronchus-associated lymphoid tissue (BALT) hyperplasia and pleuritis were the significant features in negative anti-IA IHC, which were also associated with chronic lesions. There were only two cases with positive anti-PCV2 IHC and none to PRRSV. Therefore, SIV was the predominant infectious agent in the lung samples studied. The viral antigen is often absent due to the rapid progress of SI, which may explain the negative IHC results for IA (55%); therefore, IHC should be performed at the beginning of the disease. This study has shown how important a careful histological evaluation is for the diagnosis. Since 2009, a new histological feature of swine pneumonia in animals with respiratory clinical signs has been observed in samples from pigs with clinical respiratory disease submitted to SPV-UFRGS. In addition, the results proved the importance of histological evaluation for swine herd health management.

Influenza suína (IS) é uma doença altamente contagiosa, de curso rápido e pronta recuperação, causada pelo vírus influenza tipo A (SIV). Os principais sinais clínicos são tosse, febre, anorexia e baixo desenvolvimento. A doença está presente em outros países e, geralmente, está associada com outros agentes infecciosos. No Brasil, a primeira descrição ocorreu em 2011 e foi associada ao vírus H1N1 pandêmico (pH1N1). O principal objetivo deste estudo foi caracterizar as alterações histológicas em casos de doença respiratória suína sugestiva de IS e estudar a associação dessas alterações com os resultados de imuno-histoquímica (IHQ) anti-vírus da influenza A (SIV), anti-circovírus suíno tipo 2 (PCV2) e anti-vírus da síndrome reprodutiva e respiratória (PRRSV). Para tanto, foram estudadas amostras de pulmões de 60 suínos selecionadas dos materiais do arquivo do Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (SPV-UFRGS), de casos de doença respiratória remetidos no período de 2009 a 2010 e que apresentavam alterações histopatológicas compatíveis com pneumonia viral causada pelo SIV. Todas as amostras apresentavam pneumonia intersticial e bronquiolite necrótica muito peculiar que não eram vistas antes na rotina do nosso laboratório. Trinta e uma amostras (52%) tiveram origem no estado do Rio Grande do Sul, 14 (23%) do Paraná, 11 (18%) de Santa Catarina e quatro (7%) do Mato Grosso do Sul. A IHQ para IA confirmou a presença do agente viral em 45% das amostras analisadas. Os achados histológicos mais significativos associados à IHQ positiva para IA foram bronquiolite necrótica, atelectasia, broncopneumonia purulenta e hiperemia. Por outro lado, as alterações histológicas dos pulmões estudados, mais significativamente associadas às IHQ negativa para IA foram hiperplasia dos pneumócitos tipo II, estruturas similares a pólipos em alvéolo e bronquíolo, hiperplasia de tecido linfoide associado a brônquios (BALT) e pleurite, que são alterações associadas a processos crônicos. Somente dois casos apresentaram marcação positiva na IHQ para PCV2 e nenhum pulmão foi positivo para PRRSV. Esses resultados sugerem que as lesões histológicas encontradas no presente estudo foram, predominantemente, causadas pelo SIV. Os casos negativos de IHQ para IA (55%) podem ser explicados pela ausência do antígeno viral nos tecidos estudados. Como o curso da doença é muito rápido, o teste de IHQ é mais indicado para diagnóstico no início da doença. Este estudo possibilitou demonstrar um conjunto de novas alterações histológicas pulmonares de suínos com problemas respiratórios, observadas em amostras pulmonares enviadas ao SPV-UFRGS a partir de 2009. O presente trabalho também reforça a importância de estudos histopatológicos dos casos de campo para auxiliar na monitoria da sanidade dos rebanhos suínos.

Surto de intoxicação por sal em suínos em Santa Catarina / Outbreak of salt poisoning in pigs in Santa Catarina

Descreve-se a ocorrência de surto de intoxicação por sal em suínos de duas propriedades, onde 70 porcos morreram. Soro de leite proveniente da salga de queijo era servido no cocho como única fonte hídrica aos animais. Não havia bebedouros nas instalações. Um dia após o fornecimento do soro, os porcos começaram a adoecer e apresentaram salivação excessiva, movimentos de pedalagem, opistótono e tremores cíclicos. Na necropsia, dois suínos apresentaram achatamento das circunvoluções do córtex telencefálico e um outro, edema no córtex telencefálico. Na histopatologia, observou-se necrose neuronal laminar difusa acentuada no córtex telencefálico, astrócitos de Alzheimer tipo II (AIIA), infiltrado multifocal perivascular de eosinófilos e linfócitos e edema perivascular. Outros achados incluíram marcação imuno-histoquímica fraca ou ausente para proteína glial fibrilar ácida (GFAP), mas intensa marcação positiva no citoplasma dos AIIA para S-100. As concentrações de sódio sérico e do líquor mensuradas nos porcos estudados foram de 140 e 156mmol/L, respectivamente.

A total of 70 pigs were affected and died due to salt poisoning in two farms in southern Brazil. The only source of drinking water available to the pigs was whey from cheese salting process. One day after receiving the whey, animals started getting sick and showed excessive salivation, opisthotonus, paddling, and cyclic tremors. At necropsy of three pigs, two of them presented flattening of gyri and the other one presented cortical telencephalon edema. Microscopically, severe diffuse neuronal necrosis in telencephalic laminar cortex, Alzheimer type II astrocytes (AIIA), eosinophilic and lymphocytic perivascular cuffing apart of perivascular edema were observed. Weak or absent anti-glial fibrillary acidic protein (GFAP) immunolabeling was associated with positive immunostaining for S-100 in AIIA cytoplasm. Concentration of sodium in serum and liquor samples from dead pigs resulted 140 and 156mmol/L, respectively.

Nested-PCR for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae in bronchial alveolar swabs, frozen tissues and formalin-fixed paraffin-embedded swine lung samples: comparative evaluation with immunohistochemical findings and histological features / Detecção de Mycoplasma hyopneumoniae por PCR em amostras de pulmão suíno fixadas em formalina e associação com achados histológicos e imuno-histoquímicos

The diagnosis of Mycoplasma hyopneumoniae infection is often performed through histopathology, immunohistochemistry (IHC) and polymerase chain reaction (PCR) or a combination of these techniques. PCR can be performed on samples using several conservation methods, including swabs, frozen tissue or formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue. However, the formalin fixation process often inhibits DNA amplification. To evaluate whether M. hyopneumoniae DNA could be recovered from FFPE tissues, 15 lungs with cranioventral consolidation lesions were collected in a slaughterhouse from swine bred in herds with respiratory disease. Bronchial swabs and fresh lung tissue were collected, and a fragment of the corresponding lung section was placed in neutral buffered formalin for 48 hours. A PCR assay was performed to compare FFPE tissue samples with samples that were only refrigerated (bronchial swabs) or frozen (tissue pieces). M. hyopneumoniae was detected by PCR in all 15 samples of the swab and frozen tissue, while it was detected in only 11 of the 15 FFPE samples. Histological features of M. hyopneumoniae infection were presented in 11 cases and 7 of these samples stained positive in IHC. Concordance between the histological features and detection results was observed in 13 of the FFPE tissue samples. PCR was the most sensitive technique. Comparison of different sample conservation methods indicated that it is possible to detect M. hyopneumoniae from FFPE tissue. It is important to conduct further research using archived material because the efficiency of PCR could be compromised under these conditions.

O diagnóstico de infecção por Mycoplasma hyopneumoniae é frequentemente realizado através de histopatologia, imuno-histoquímica (IHQ) e reação em cadeia da polimerase (PCR), ou uma combinação dessas técnicas. PCR pode ser realizada a partir de amostras submetidas a vários métodos de conservação, incluindo swabs, tecido refrigerado ou congelado, ou ainda tecido fixado em formalina e embebido em parafina (FFEP). Entretanto, o processo de fixação em formalina pode inibir a amplificação de DNA. Para avaliar se DNA de M. hyopneumoniae poderia ser recuperado de tecido FFEP, 15 pulmões com lesões de consolidação crânio-ventral de suínos oriundos de rebanhos com problemas respiratórios foram selecionados no abatedouro. Swabs bronquiais e pulmão fresco foram colhidos, e um fragmento da mesma porção de pulmão foi colocado por 48 horas em solução de formalina tamponada e posteriormente processado e embebido em parafina. PCR foi realizada comparando amostras de tecido fixado em formalina com amostras que passaram somente por refrigeração (swab bronquial) ou foram congeladas (fragmentos de tecido). A detecção de M. hyopneumoniae ocorreu em todas as 15 amostras de swabs e tecido congelado enquanto em amostras de tecido FFEP, o agente foi detectado somente em 11 das 15 amostras. Características histológicas de infecção por M. hyopneumoniae ocorreram em 11 casos e 7 destas amostras obtiveram marcação imuno-histoquímica positiva. Concordância entre histologia e detecção a partir de tecido FFEP foi observada em 13 casos. Dentre as técnicas analisadas, a PCR foi a mais sensível. A comparação de diferentes métodos de conservação de amostras indica que é possível detectar M. hyopneumoniae a partir de tecido FFEP, fato importante para pesquisa utilizando material arquivado, porém a eficácia do teste de PCR pode ficar comprometida sob essas condições.

Infecção natural por Listeria monocytogenes em cobaios Cavia porcellus / Natural infection by Listeria monocytogenes in guinea pigs (Cavia porcellus)

Listeriose foi identificada em quatro porcos-da-índia (Cavia porcellus) enviados para diagnóstico postmortem. Dois cobaios (1 e 2), apresentaram especialmente nódulos esbranquiçados multifocais no fígado e ceco, alterações que corresponderam microscopicamente a múltiplos focos necróticos associados com estruturas bacterianas basofílicas, degeneração gordurosa difusa e infiltrado linfocitário periportal. Lesões similares estavam presentes no intestino delgado, ceco e baço desses dois cobaios. Os outros cobaios (3 e 4) apresentavam exclusivamente alterações pulmonares caracterizadas por coloração avermelhada difusa e áreas esbranquiçadas multifocais na superfície pleural associadas histologicamente com infiltrado neutrofílico multifocal acentuado nos lúmens alveolar e bronquiolar, além de edema interseptal e alveolar, trombos vasculares e numerosos macrófagos alveolares (pneumonia supurativa). Em seções histológicas coradas pelo Brown-Hopps, foram identificadas estruturas bacilares Gram-positivas. A avaliação imuno-histoquímica para anticorpos antiListeria monocytogenes revelou marcação fortemente positiva nos focos necróticos do fígado, ceco, baço, útero, estômago e linfonodos mesentéricos dos dois cobaios com listeriose sistêmica. Nos cobaios com pneumonia supurativa, observou-se intensa marcação nos lúmens alveolares. L. monocytogenes foi isolada de amostras de fígado e de casca de arroz utilizada como cama dos cobaios. Sugere-se que as lesões pulmonares foram consequentes à aspiração de partículas da cama de casca de arroz contaminada com L. monocytogenes.

Listeriosis was identified in four guinea pigs (Cavia porcellus) received for post mortem evaluation. Two animals showed multifocal white nodules in the liver and cecum. These changes corresponded microscopically to multiple necrotic foci associated with basophilic bacterial structures, diffuse lipid vacuolation, and periportal lymphocytic infiltrates. Similar lesions were seen in the small intestine, cecum, and spleen of these two guinea pigs. The other two guinea pigs showed almost exclusively pulmonary changes that were characterized by diffuse red coloration and multifocal whitish areas in the pleural surface, which were microscopically associated with multifocal marked neutrophilic infiltrate within the alveolar and bronchiolar lumens, besides of interseptal and alveolar edema, vascular thrombi, and increased numbers of alveolar macrophages (suppurative pneumonia). The basophilic bacterial structures were Gram-positive for the Brown-Hopps special stain. The immunostaining antiListeria monocytogenes showed strong positive reactions in the necrotic foci of the liver, cecum, spleen, uterus, stomach, and mesenteric lymph node in the two guinea pigs with systemic listeriosis. The two guinea pigs with suppurative bronchopneumonia showed positive intense antiListeria monocytogenes immunostaining within the alveolar lumens. L. monocytogenes was isolated from samples of liver and rice hulls used as bedding material in the cages of the guinea pigs. It is suggested that the pulmonary changes observed here were caused by aspiration of particles of the rice hulls bedding contaminated with L. monocytogenes.

Rectal stenosis in pigs associated with Salmonella Typhimurium and porcine circovirus type 2 (PCV2) infection / Estenose retal em suínos associada à enterite causada por Salmonella Typhimurium em animais infectados pelo circovírus suíno tipo 2 (PCV2)

Rectal stricture is an acquired annular fibrous constriction of the rectum that results from a variety of chronic necrotizing enteric diseases. In pigs, it is in most cases a sequel of Salmonella infection. Porcine circovirus type 2 (PCV2) is a known pathogen causing immunosuppression in pigs worldwide. PCV2 infected pigs may be predisposed to salmonellosis. In this report, rectal stenosis was observed in 160 pigs from a herd that experienced an outbreak of enteric salmonellosis over a 4-month period. Distension of the abdominal wall and diarrhea were the main clinical signs observed. Five animals were analyzed showing annular cicatrization of the rectal wall 5.0-7.0 cm anterior to the anorectal junction and Salmonella-positive immunostaining in the large intestine. Salmonella Typhimurium was isolated from fragments of the large intestine. Porcine circovirus type 2 antigen was observed in the mesenteric lymph-node in 4 pigs and in the large intestine in 3 pigs.

Estenose retal é uma constrição anular fibrosa do reto que pode ser decorrente de qualquer doença entérica crônica necrotizante. Em suínos, é em muitos casos uma seqüela de infecção por Salmonella. Circovírus suíno tipo 2 é um patógeno bem conhecido que causa imunodepressão em suínos e apresenta distribuição mundial. No presente trabalho, estenose retal foi observada em 160 suínos em um rebanho que teve um surto de salmonelose entérica durante 4 meses. Distensão da parede abdominal e diarreia foram os principais sinais clínicos observados. Foram analisados cinco suínos que demonstraram cicatrização anular da parede do reto 5,0 a 7,0 cm anterior a junção anoretal e imuno-histoquímica positiva para Salmonella spp. no intestino grosso. Antígeno de Circovírus suíno tipo 2 foi observado no linfonodo mesentérico de quatro suínos e no intestino grosso de três.

Identification of swainsonine as a glycoside inhibitor responsible for Sida carpinifolia poisoning.

The indolizidine alkaloid swainsonine has been identified as the toxic constituent of Sida carpinifolia, a native perennial shrub-like plant, reported to produce neurological disorders in goats and ponies in southern Brazil. Swainsonine was detected in dry ground plant material after extraction and analysis by both liquid and gas chromatography mass spectrometry. The swainsonine concentration was 0.006% on a dry weight basis. The clinical and pathological features of this lysosomal storage disease were similar to those observed in Swainsona, Oxytropis, Astragalus, and Ipomoea poisonings with multiple cytoplasm vacuoles in neurons, acinar pancreatic cells, hepatocytes, and renal tubular cells.

Necrotic enterocolitis in pigs naturally infected by porcine circovirus type 2 / Enterocolite necrótica em suínos naturalmente infectados por circovírus suíno tipo 2

Samples of intestine with necrotic enteritis from 63 pigs naturally infected with porcine circovirus type 2 (PCV2) were studied. Colon was the main target of PCV2 associated necrotic enteritis in 60 cases. Immunohistological investigations were carried out to detect the presence of PCV2 in necrotic lesions and to identify the type of cells infected by the virus. Crypt epithelial cells had positive labelling for PCV2 in 17 cases. Depletion of goblet cells occurred in 10 cases. In 24 necrotic enteritis cases, co-infection of PCV2 and Salmonella was identified. An increased rate of apoptosis in the crypt epithelial cells of the large intestine from PCV2 of naturally infected pigs was observed. Immunohistochemical findings confirmed the presence of PCV2 within cells from necrotic intestinal tissue, suggesting that PCV2 may play a role in the development of those lesions. Diagnosis of necrotic enteritis associated with PCV2 should be based on the detection of PCV2 antigen or DNA in the necrotizing lesions. However, bacteriological examination should be performed to rule out the presence of bacterial agents, since co-infections are likely to occur in PCV2 affected pigs.

Foram selecionadas amostras intestinais com enterite necrótica de 63 suínos naturalmente infectados pelo circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Enterite necrótica associada com PCV2 ocorreu principalmente no cólon, em 60 casos. Análise imuno-histoquímica foi realizada para identificar a presença de PCV2 em lesões necróticas e o tipo de células infectadas pelo vírus. Células epiteliais das criptas apresentaram marcação positiva para PCV2 em 17 casos. Depleção de células caliciformes ocorreu em 10 casos. Em 24 casos de enterite necrótica, observou-se co-infecção por PCV2 e Salmonella. Foi observado um aumento no índice de apoptose nas células das criptas do intestino grosso de suínos naturalmente infectados com PCV2. Os achados imuno-histoquímicos e histopatológicos sugerem que a infecção por PCV2 das células do tecido intestinal pode ocasionar enterite necrótica. O diagnóstico de enterite necrótica associada com PCV2 deve ser baseado na detecção do antígeno ou do DNA viral nas lesões necróticas. Contudo, análise bacteriológica deve ser realizada para descartar a presença de agente bacteriano, já que co-infecções são comuns.

Enteritis associated with Lawsonia intracellularis and porcine circovirus type 2 infection in wild boars in Southern Brazil / Enterite associada com infecção por Lawsonia intracellularis e circovírus suíno tipo 2 em um rebanho de javalis no Sul do Brasil

In a commercial herd of 1250 wild boars, 56 animals were affected by anorexia, diarrhea, and wasting. Enlargement of mesenteric lymph nodes, thickening of ileal wall, and a white-yellowish ileal content were observed in two of the four animals necropsied. Microscopically, ileal crypts showed epithelial hyperplasia, moderate decrease in goblet cell density, lymphohistiocytic infiltrate in the lamina propria, and moderate depletion with histiocytic infiltrate in Peyer's patches. Curved rod-shaped organisms within the apical cytoplasm of enterocytes were observed in both Warthin-Starry and Lawsonia intracellularis-immunostained sections. PCV2 antigen was observed in ileal Peyer's patches of 3 wild pigs. Trichuris suis nematodes were found in the cecum of the four wild pigs. This report describes clinicopathological findings in cases of enteritis associated with Lawsonia intracellularis and PCV2 infection in a commercial herd of wild boars.

Neste trabalho, são relatados os achados clínico-patológicos de casos de enterite associados com infecção por Lawsonia intracellularis e PCV2 em um rebanho comercial com 1250 javalis, sendo que 56 foram afetados por anorexia, diarréia e emagrecimento progressivo. Em dois dos quatro animais necropsiados, foi observado aumento de linfonodos mesentéricos, espessamento da parede do íleo e conteúdo branco-amarelado no íleo. Microscopicamente, as criptas do íleo apresentavam hiperplasia epitelial, decréscimo moderado na densidade de células caliciformes, infiltrado linfo-histiocitário na lâmina própria e depleção moderada das placas de Peyer com infiltrado histiocitário. Bastonetes curvos no ápice citoplasmático dos enterócitos foram observados em preparações coradas com Warthin-Starry e pela imunoistoquímica contra Lawsonia intracellularis. Antígeno de PCV2 foi observado nas placas de Peyer do íleo de três animais e nematódeos Trichuris suis estavam presentes no ceco dos quatro javalis necropsiados.

Senecio brasiliensis (Asteraceae) poisoning in Murrah buffaloes in Rio Grande do Sul / Intoxicação natural por Senecio brasiliensis (Asteraceae) em bubalinos no Rio Grande do Sul

Thirteen (14.4 percent) out of 90 Murrah buffaloes (Bubalus bubalis) became ill after con-sumption of Senecio brasiliensis, and 11 (12.2 percent) of them died. The buffaloes were kept in a highly Senecio brasiliensis infested area. The poisoning occurred in June-August 2006 on a farm in the county of Nova Prata, Rio Grande do Sul, southern Brazil. Clinical signs included weakness, apathy, progressive weight loss, permanent decubitus, and diarrhea. Necropsy was performed in 2 of the 11 buffaloes that died. The pathological findings were typical of poisoning by pyrrolizidine alkaloids. High infestation of pastures with S. brasiliensis, severe drought, and consequent starvation were the main epidemiological factors associated with the poisoning here described.

Descreve-se a ocorrência de um surto de intoxicação espontânea por Senecio brasiliensis em búfalos Murrah (Bubalus bubalis) em uma propriedade localizada no município de Nova Prata, Estado do Rio Grande do Sul, no período de junho a agosto de 2006. De um total de 90 búfalos, 13 adoeceram e 11 morreram. Os animais eram mantidos em áreas de pastoreio altamente infestadas por S. brasiliensis. Os principais sinais clínicos relatados foram letargia, apatia, emagrecimento progressivo, diarréia e decúbito permanente. Necropsia foi feita em dois dos 11 animais mortos. As lesões foram características de intoxicações por alcalóides pirrolizidínicos. A grande quantidade da planta, forte estiagem e desnutrição conseqüente foram os principais achados epidemiológicos associados com a mortalidade.

Associação entre otites bacterianas e infecção pelo circovírus suíno tipo 2 (PCV2) em suínos / Association between bacterial otitis and porcine circovirus 2 (PCV2) infection in pigs

Neste trabalho, foi estudada a ocorrência e a bacteriologia das otites purulentas em suínos apresentando três condições clínico-patológicas distintas: síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS), crescimento retardado (porém sem apresentação de sinais clínicos da SMDS) e crescimento normal. No total, foram examinados 385 animais com idade de 60-130 dias, sendo a confirmação do diagnóstico da SMDS obtida pelos sinais clínicos e achados patológicos e pela detecção de antígenos virais por imunoistoquímica. De 242 animais com a SMDS, 57 (23,5 por cento) apresentaram lesões purulentas no ouvido médio. Entre os 119 animais de baixo desenvolvimento, apenas 1 (0,7 por cento) apresentou a lesão. Não foram detectadas lesões macroscópicas no ouvido médio dos 24 animais com crescimento normal. Os agentes isolados com maior freqüência foram Arcanobacterium pyogenes (43 por cento), Streptococcus α-hemolíticos (37,2 por cento) e Pasteurella multocida (27,9 por cento) dos 86 ouvidos submetidos à bacteriologia. A alta ocorrência de lesões purulentas no ouvido médio de animais com a SMDS sugere que a infecção pelo PCV2 pode tornar o suíno mais suscetível às otites bacterianas. A ocorrência reduzida dessas lesões em suínos de baixo desenvolvimento, sem a manifestação clínica da SMDS, sugere que a otite média não representa uma causa importante de mau desempenho em leitões nas fases de crescimento e terminação. O envolvimento de A. pyogenes, Streptococcus α-hemolíticos e P. multocida na maioria das lesões apontam a importância desses organismos como agentes causais de otite média em suínos.(AU)

The occurrence and bacteriology of purulent otitis in groups of pigs affected by three different clinical conditions are described: postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), depressed growth (attrition) and normal growth (control). A total of 385 animals, 60-130 days of age, were examined. Diagnosis of PMWS was confirmed by the presence of clinical signs and pathological findings compatible with the disease, and through detection of viral antigens in tissues by immunohistochemistry. From 242 pigs with PMWS, 57 (23.5 percent) showed purulent lesions in the middle ear. Among 119 pigs with attrition, only 1 (0.7 percent) presented the lesion. In 24 control pigs, middle ear lesions were not detected. The most frequently isolated agents from the lesions were Arcanobacterium pyogenes (43 percent), á-hemolytic Streptococci (37.2 percent) and Pasteurella multocida (27.9 percent) out of 86 materials. The frequent occurrence of purulent lesions in the middle ear of PMWS affected pigs suggests that PCV2 infection may increase the susceptibility to bacterial otitis. The low occurrence of this disease in piglets with attrition suggests that otitis does not represent a significant cause for depressed growth in pigs from growing and finishing age. The isolation of A. pyogenes, á-hemolytic Streptococci and P. multocida from most of the lesions emphasizes the importance of these organisms as causal agents of otitis media in swine.(AU)

Intestinal lesions in pigs affected with postweaning multisystemic wasting syndrome / Lesões entéricas em suínos afetados por síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos

Samples of mesenteric lymph nodes and intestines from 79 unthrifty 3- to 5-month-old postweaning pigs, confirmed as naturally affected with postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), were studied. Pigs originated from 12 farms in southern Brazil and were selected on the basis of clinical signs and/or gross lesions suggestive of enteric disorder. Lymphohistiocytic infiltrates of varying intensity were associated with anti-porcine circovirus type 2 (anti-PCV2) immunostaining (IS) in samples of intestines and mesenteric lymph nodes from all pigs. Although most findings were similar to those described in PCV2-associated enteritis, anti-PCV2 IS in association with depletion of the goblet cell mucin stores (24 pigs), diffuse ileal villous atrophy and fusion (18 pigs), and dilatation of the lymphatic vessels (11 pigs) combined or not with lymphangitis were also observed. PCV2 antigen was immunohistochemically demonstrated in the cytoplasm and nuclei from intralesional epithelial cells, histiocytes, and endothelial-like cells in intestinal tissues. Together these findings imply an association with PCV2. The presence of co-infections by Lawsonia intracellularis, Brachyspira spp., Mycobacterium spp., Salmonella spp., rotavirus, parvovirus, coronavirus and enteric calicivirus with PCV2 in the intestinal lesions was investigated.

Amostras de linfonodos mesentéricos e intestinos de 79 leitões desmamados refugos, entre 3 e 5 meses de idade e confirmados como naturalmente afetados pela síndrome multissistêmica do definhamento foram estudadas. Os suínos eram oriundos de 12 criações no sul do país e foram selecionados em função dos sinais clínicos e/ou lesões macroscópicas sugestivos de doença entérica. Infiltrados linfoistiocíticos de intensidades variáveis foram associados com marcação positiva anti-circovirus suíno tipo 2 (anti-PCV2) em amostras de intestinos e linfonodos mesentéricos de todos os 79 animais. Embora a maioria dos achados fossem semelhantes aos descritos em enterite associada com PCV2, marcação imuno-histoquímica anti-PCV2 foi associada com depleção de células caliciformes (24 suínos), atrofia e fusão de vilosidades do íleo (18 suínos) e dilatação de vasos linfáticos (11 suínos) combinada ou não com linfangite. Antígenos de PCV2 foram demonstrados por imuno-histoquímica no citoplasma e núcleo de células epiteliais intralesionais, histiócitos e células tipo endotelial em tecidos intestinais. Em conjunto, esses resultados sugerem que as lesões estavam associadas com PCV2. A presença de co-infecções por Lawsonia intracellularis, Brachyspira spp., Mycobacterium spp., Salmonella spp., rotavírus, parvovírus, coronavírus e calicivírus entérico com PCV2 nas lesões intestinais foi investigada.

Postweaning multisystemic wasting syndrome in farmed wild boars (Sus scrofa) in Rio Grande do Sul

This report concerns an outbreak of postweaning multisystemic wasting syndrome in wild boars from commercial herds in Rio Grande do Sul, Brazil. The main clinical signs were progressive wasting, respiratory distress, diarrhea, and ocular discharges. Enhanced lymph nodes and spleens, ascites, hydrothorax, and non collapsed lungs were the principal gross lesions. Varying degrees of lymphohistiocytic infiltrates in lymph nodes, spleen, and intestines were the most significant microscopic changes. Although a total of 26 animals had showed clinical and pathological findings consistent with the disease, only in 11 of them it was possible to confirm a PMWS diagnosis through the association of specific lesions in lymphoid tissues with the presence of the viral antigen detected by immunohistochemistry. These findings were similar to those reported in the swine disease.

Descreve-se a ocorrência da síndrome multissistêmica do definhamento suíno em javalis de dois rebanhos comerciais no estado do Rio Grande do Sul. Os principais sinais observados foram definhamento progressivo, tosse, espirros, diarréia e descarga ocular. Linfonodos e baços aumentados, ascite, hidrotórax e pulmões não colapsados foram os principais achados macroscópicos. Infiltrados linfo-histiocitários de graus variáveis em linfonodos, baços e intestinos foram as lesões microscópicas mais relevantes. Embora 26 animais tenham apresentado achados clínicos e patológicos compatíveis com a enfermidade, apenas em 11 desses foi possível confirmar o diagnóstico através da associação de lesões histológicas específicas nos tecidos linfóides com a presença do antígeno viral, detectado pela técnica de imunoistoquímica. Tanto os achados clínicos como patológicos foram semelhantes aos descritos na doença suína.

Surto de aflatoxicose em suínos no Estado do Rio Grande do Sul / Swine aflatoxicosis outbreak in the state of Rio Grande do Sul, Brazil

Descreve-se um surto de aflatoxicose ocorrido no outono de 2004, em uma granja de suínos, no município de Sentinela do Sul, RS. O milho utilizado no arraçoamento dos animais e que causou a intoxicação, foi produzido e processado na propriedade. Morreram 7 porcas e 8 leitões, e foram relatados dois casos de aborto. Os sinais clínicos foram apatia, anorexia, icterícia, urina amarelada com sangue e fotossensibilização. A gama-glutamil transferase (GGT) e a bilirrubina total mostraram-se elevadas nos animais necropsiados. Os principais achados de necropsia incluíam icterícia generalizada, fígado amarelo-alaranjado, edema de parede da vesícula biliar e presença de líquido amarelado nas cavidades abdominal e pericárdica. As lesões microscópicas mais importantes foram encontradas no fígado e consistiam em tumefação, degeneração e necrose individual de hepatócitos, proliferação de ductos biliares e colestase. O diagnóstico foi baseado nos sinais clínicos, nos achados de necropsia e de histopatologia e nos níveis altos de aflatoxina B1 (milho 3140ppb, ração 4670ppb) encontrados no milho e na ração.

Aspectos clínicos e patológicos da intoxicaçäo por Sida carpinifolia (Malvaceae) em caprinos no Rio Grande do Sul / Clinical and pathological aspects of Sida carpinifolia poisoning in goats in Rio Grande do Sul

Este trabalho inclui os estudos clínicos e patológicos da doença de armazenamento lisossomal induzida pelo consumo espontâneo de Sida carpinifolia. A enfermidade foi observada em três rebanhos, que juntos eram compostos por 51 caprinos, dos quais, 25 foram afetados e 11 necropsiados. Nos três surtos, S. carpinifolia era a vegetaçäo predominante nos piquetes ocupados pelos animais. Clinicamente, a doença caracterizou-se por distúrbios neurológicos que consistiam de ataxia, hipermetria, posturas anormais, tremores musculares afetando principalmente as regiöes da cabeça e pescoço, dificuldade para ingestäo de alimentos e quedas freqüentes. Estes sinais clínicos eram exacerbados pela movimentaçäo. Em alguns animais, embora com um quadro clínico estabilizado, as alteraçöes neurológicas persistiram durante 24 meses após sua retirada dos piquetes infestados por S. carpinifolia. A doença foi reproduzida administrando-se S. carpinifolia, in natura ou seca à sombra, para 3 caprinos. Um caprino recebeu Sida rhombifolia, ad libidum, por 40 dias e näo desenvolveu alteraçöes clínicas ou patológicas. Na necropsia näo havia alteraçöes. Microscopicamente, as principais alteraçöes foram distensäo e vacuolizaçäo citoplasmáticas em neurônios e, em menor intensidade, em células da glia do sistema nervoso central. Alteraçöes similares foram observadas em células acinares pancreáticas, hepatócitos, células tubulares renais, células foliculares epiteliais da tireóide e macrófagos de órgäos linfóides. Nos animais que näo mais ingeriam S. carpinifolia por períodos de um mês ou mais, observou-se uma diminuiçäo da vacuolizaçäo citoplasmática de neurônios, que apresentavam citoplasma eosinofílico e aspecto enrugado. Nestes casos, notou-se também desaparecimento neuronal especialmente em células de Purkinje e gliose local. Em cortes cerebelares, esta doença de armazenamento foi caracterizada como ?-manosidose pelo estudo histoquímico por lectinas. Os vacúolos nas células de Purkinje reagiram fortemente com as lectinas Concanavalia ensiformis, Triticum vulgaris e Triticum vulgaris succinilado. O padräo obtido neste estudo é similar ao encontrado em intoxicaçäo por plantas que apresentam swainsoniana como princípio tóxico