RESUMO
Protein C inhibitor (PCI) maintains hemostasis by inhibiting both procoagulant and anticoagulant serine proteases, and plays important roles in coagulation, fibrinolysis, reproduction, and anti-angiogenesis. The reactive site loop of PCI traps and irreversibly inhibits the proteases like APC (activating protein C), thrombin (FIIa) and factor Xa (FXa). Previous studies on antithrombin (ATIII) had identified Tyr253 and Glu255 as functional exosites that interact and aid in the inhibition of factor IXa and FXa. Presence of exosite in PCI is not known, however a sequence comparison with the PCI from different vertebrate species and ATIII identified Glu239 to be absolutely conserved. PCI residues analogous to ATIII exosite residues were mutated to R238A and E239A. Purified variant PCI in the presence of heparin (10⯵g/ml) showed a 2-4 fold decrease in the rate of inhibition of the proteases. However, the stoichiometry of inhibition of FIIa, APC, and FXa by native PCI, R238A and E239A variants were found to be close to 1.0, which also indicated the formation of stable complexes based on SDS-PAGE and western blot analysis with thrombin and APC. Our findings revealed the possible presence of an exosite in PCI that influences the protease inhibition rates.
Assuntos
Heparina , Inibidor da Proteína C , Serina Proteases , Inibidor da Proteína C/química , Inibidor da Proteína C/metabolismo , Heparina/química , Heparina/farmacologia , Humanos , Serina Proteases/metabolismo , Serina Proteases/química , Trombina/metabolismo , Proteína C/metabolismo , Proteína C/química , Fator Xa/metabolismo , Fator Xa/química , Sequência de Aminoácidos , Ativação Enzimática/efeitos dos fármacosRESUMO
BACKGROUND: Activated protein C (APC) has anticoagulant and cytoprotective cell-signaling activities, which often require protease-activated receptor (PAR) 1 and PAR3 and PAR cleavages at noncanonical sites (R46-N47 and R41-G42, respectively). Some PAR1-derived (P1) peptides and PAR3-derived (P3) peptides, eg, P1-47-66 and P3-42-65, mimic APC's cell signaling. In anti-inflammatory assays, these 2 peptides at low concentrations synergistically attenuate cellular inflammation. OBJECTIVES: To determine whether a P1 peptide covalently linked to a P3 peptide mimics APC's anti-inflammatory and endothelial barrier stabilization activities. METHODS: Anti-inflammatory assays employed stimulated THP-1 cells and caspase-1 measurements. Cultured human EA.hy926 or murine aortic endothelial cells (ECs) exposed to thrombin were monitored for transendothelial electrical resistance. Bivalent covalently linked P1:P3 peptides were studied for APC-like activities. RESULTS: In anti-inflammatory assays, P1-47-55 was as active as P1-47-66 and some P3 peptides (eg, P3-44-54 and P3-51-65) were as active as P3-42-65. The bivalent P1:P3 peptide comprising P1-47-55-(Gly[10 residues])-P3-51-65 (designated "G10 peptide") was more potently anti-inflammatory than the P1 or P3 peptide alone. In transendothelial electrical resistance studies of thrombin-challenged ECs, P1-47-55 and the G10 peptide mimicked APC's protective actions. In dose-response studies, the G10 peptide was more potent than the P1-47-55 peptide. In murine EC studies, the murine PAR-sequence-derived G10 peptide mimicked murine APC's activity. Anti-PAR1 and anti-PAR3 antibodies, but not anti-endothelial protein C receptor antibodies, abated G10's cytoprotection, showing that G10's actions involve PAR1:PAR3. G10 significantly increased survival in murine endotoxemia. CONCLUSION: The PAR-sequence-derived G10 peptide is a bivalent agonist that mimics APC's cytoprotective, anti-inflammatory, and endothelial barrier-stabilizing actions and APC's protection against endotoxemic mortality.
Assuntos
Células Endoteliais , Proteína C , Receptor PAR-1 , Proteína C/metabolismo , Proteína C/química , Humanos , Animais , Receptor PAR-1/agonistas , Receptor PAR-1/metabolismo , Células Endoteliais/metabolismo , Células Endoteliais/efeitos dos fármacos , Camundongos , Anti-Inflamatórios/farmacologia , Anti-Inflamatórios/química , Camundongos Endogâmicos C57BL , Células THP-1 , Trombina/metabolismo , Receptor de Proteína C Endotelial/metabolismo , Receptores de Trombina/agonistas , Receptores de Trombina/metabolismo , Transdução de Sinais , Receptores Ativados por Proteinase/agonistas , Receptores Ativados por Proteinase/metabolismo , Peptídeos/farmacologia , Peptídeos/química , Endotoxemia/tratamento farmacológico , Endotoxemia/metabolismo , Fragmentos de Peptídeos/farmacologia , Masculino , Modelos Animais de DoençasRESUMO
Periodontitis is a chronic inflammatory disease that is related with some systemic alterations. The severity of the inflammation in the periodontal tissues has been associated with a low-grade measurable systemic inflammation, and some studies have suggested an increase in the C-reactive protein levels and in number of white blood cells in patients with periodontal diseases. The red blood cells also could be affected by periodontitis with trends toward anemia. There are still controversies in relation to the direct influence of periodontal diseases in the occurrence of systemic inflammations. Thus, the aim of this study was to accomplish a literature review in order to verify the possible influence of the periodontal disease on blood cells and C-reactive protein levels
La Periodontitis es una enfermedad inflamatoria crónica que está relacionada con algunas alteraciones sistémicas. La gravedad de la inflamación de los tejidos periodontales ha sido asociada a una inflamación sistémica considerada de bajo grado y, algunos estudios han sugerido que hay un aumento en los niveles de proteína C-reactiva y en el número de leucocitos de la sangre en pacientes periodontalmente comprometidos. Las células de la serie roja de la sangre también podrían verse afectadas por la presencia de periodontitis, influyendo asi en la aparición de anemias. A pesar de eso, aún hay controversias en hasta qué punto las enfermedades periodontales podrían influenciar de forma directa en la aparición de las inflamaciones sistémicas. De esa forma, el objetivo de este trabajo fue realizar una revisión de literatura para verificar la posible influencia de la enfermedad periodontal sobre las células sanguíneas y los niveles de proteína C-reactiva
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Células Sanguíneas , Periodontite/diagnóstico , Periodontite/etiologia , Proteína C/química , Doenças PeriodontaisRESUMO
A hanseniase e doença infecciosa, causada pelo Mycobacterium leprae, um parasita intracelular obrigatorio nao cultivavel em meios artificiais. Esta doença pode se manifestar sob amplo espectro clinico, correspondendo a distintos padroes da resposta imunologica do hospedeiro ao M. leprae. Em um polo deste espectro, esta a forma de resistencia ao bacilo, a hanseniase tuberculoide (HT), na qual se desenvolve acentuada resposta imune celular especifica com efetivo controle da mutilaçao bacilar. O outro polo do espectro esta representado pela hanseniase virchoviana (HV), forma de baixa resistencia, em que a resposta imune celular seletivamente falha em eliminar o bacilo do organismo, resultando na disseminaçao da doença. O grupo dimorfo (HD) apresenta manifestaçoes intermediarias variaveis entre HT e HV, de acordo com o grau de resposta imune ao M. leprae. Considerando que na hanseniase existem poucos estudos avaliando os niveis sericos de anticorpos anti-PGL-I, neopterina e proteina C reativa (CRP) no momento do diagnostico e durante o tratamento poliquimioterapico, realizamos este estudo com os sguintes objetivos: A. Avaliar a resposta imune e inflamatoria de pacientes com hanseniase no momento do diagnostico e aos 2, 4, 6 e 12 meses de tratamento com poliquimioterapia (PQT) e nos estados reacionais, mediante a determinaçao dos niveis sericos de anti-PGL-I, de neopterina e de CRP....
Assuntos
Masculino , Feminino , Humanos , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Hanseníase/imunologia , Hanseníase/microbiologia , Hanseníase/terapia , Neopterina , Neopterina/análise , Neopterina/síntese química , Proteína C , Proteína C/análise , Proteína C/química , Quimioterapia Combinada , Micobactérias não Tuberculosas/crescimento & desenvolvimento , Micobactérias não Tuberculosas/fisiologia , Micobactérias não Tuberculosas/imunologiaRESUMO
La concentración sérica de proteína fué medida por aglutinación en 71 recién nacidos sanos a las 24 horas de edad, atendidos en el Hospital Regional Simón Bolívar, durante los meses de Mayo a Julio de 1992. Se utilizó una muestra que confiere un 95 por ciento de confiabilidad estadística; encontrando en 67 pacientes niveles de proteína C reactiva menores de 6 miligramos por litro, en un paciente entre 6 y 12 miligramos por litro, en dos pacientes entre 13 y 18 y en un paciente entre 42 y 48 miligramos por litro. Ninguno de los pacientes tenía riesgo de infección y tampoco la adquirió durante el período nenonatal temprano, Con los resultados obtenidos concluímos que el 98 por ciento de los pacientes recién nacidos sanos de dicho hospital presentan niveles entre 0 y 18 miligramos por litro; concentraciones que se pueden tomar como referencia para estudios de sensibilidad y especificidad frente al diagnóstico y exclusión de sepsis neonatal temprana y para el seguimiento de pacientes infectados durante el tratamiento