RESUMO
ABSTRACT: In worldwide there are reports of a significant decrease in colonies of the species Apis mellifera, caused by several factors, including viral infections. In order to study and diagnose illnesses caused by viruses, in vitro cell culture is used as a valuable tool. Yet, there are still no immortalized cell lines of honey bee Apis mellifera. Primary cell cultures are promising for this purpose and can supply the lack of continuous strains, but their establishment is difficult and laborious, which often makes them unfeasible for many research centers. Through the use of cell immortalization techniques, it is possible to develop continuous cell lines and thus benefit, in different ways, research related to different species of bees. The choice of technique is challenging, since in addition to the ability to remain viable for countless passages, cells must keep the genotype and phenotype similar or identical to the original tissue. This review intends to present methodologies that can be used to immortalize Apis mellifera cells, aiming to establish a cell line. The genotypic and phenotypic implications of each technique are evaluated, and the purpose of the cell line to be developed.
RESUMO: Ao redor do mundo há relatos da diminuição significativa de colônias da espécie Apis mellifera, causada por diversos fatores, incluindo infecções virais. Para estudo e diagnóstico de enfermidades causadas por vírus utiliza-se, como uma ferramenta valiosa, o cultivo celular in vitro. Contudo, ainda não existem linhagens celulares imortalizadas de abelhas Apis mellifera. Os cultivos celulares primários são promissores para este fim e podem suprir a falta de linhagens contínuas, porém seu estabelecimento é difícil e laborioso o que, muitas vezes, os torna inviáveis para muitos centros de pesquisa. Através do uso de técnicas de imortalização celular é possível desenvolver linhagens contínuas de células e assim beneficiar, de diversas formas, as pesquisas relacionadas às diferentes espécies de abelhas. A escolha da técnica é desafiadora, visto que, além da capacidade de permanecer viável por inúmeras passagens, as células devem manter o genótipo e fenótipo semelhante ou idêntico ao tecido original. O objetivo deste trabalho é apresentar metodologias que podem ser utilizadas para imortalização de células de Apis mellifera, visando o estabelecimento de uma linhagem celular. São avaliadas as implicações genotípicas e fenotípicas de cada técnica, e a finalidade da linhagem celular a ser desenvolvida.
RESUMO
Bees are fundamental in several aspects, especially in relation to plant biodiversity and pollination. Recently, immense losses are being faced in the number of Brazilian colonies, mainly in southern states of the country, which has a strong beekeeping activity. There are indications that, among the reasons for the losses, pathogens that affect the health of bees may be involved. Among them, the microsporidium Nosema and the black queen cell virus (BQCV) stand out for their prevalence. In this study, 92 colonies of 17 apiaries from southern Brazil were evaluated for infection by Nosema ceranae, Nosema apis and BQCV. Nucleic acid extractions and cDNA synthesis were performed from adult bee samples, followed by Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) and multiplex PCR. Eight BQCV positive samples were subjected to sequencing. The results showed that N. ceranae and BQCV are circulating in the Southern region of the country, which may be the reason for the loss of colonies. N. apis was not found. N. ceranae was found in 57.6% (53/92) of the colonies and BQCV in 32.6% (30/92). Co-infection was found in 25% (23/92) of the colonies studied, a factor that is suggested to be reducing the hosts' longevity due to the synergistic action of the pathogens. The samples submitted to sequencing indicated similarity of 96.8 to 100% between them, in addition to strong similarity with sequences from Asia, United States, Germany and Peru. This study reports the circulation of N. ceranae and BQCV in apiaries in southern Brazil, in addition to being the first phylogenetic analysis of the Brazilian BQCV sequence.(AU)
As abelhas mostram-se fundamentais em diversos aspectos, especialmente com relação à biodiversidade de plantas e polinização. Recentemente, estão sendo enfrentadas imensas perdas no número de colônias brasileiras, principalmente nos estados do sul do país, com forte atividade apícola. Há indicativos de que, dentre as razões para as perdas, possam estar envolvidos patógenos que afetam a saúde das abelhas. Dentre eles, o microsporídio Nosema e o vírus da realeira negra (BQCV) destacam-se pela prevalência. Neste estudo, foram avaliadas 92 colônias, de 17 apiários do sul do Brasil, a respeito da infecção por Nosema ceranae, Nosema apis e BQCV. Foram realizadas extrações de ácidos nucleicos e síntese de cDNA a partir de amostras de abelhas adultas, seguidos de Reação em Cadeia da Polimerase-Transcriptase Reversa (RT-PCR). Oito amostras positivas para BQCV foram submetidas a sequenciamento. Os resultados mostraram que N. ceranae e BQCV estão circulando na região sul do país, podendo ser a razão para as perdas de colônias. N. apis não foi encontrado. N. ceranae foi encontrado em 57.6% (53/92) das colônias e BQCV em 32.6% (30/92). Foi encontrada coinfecção por ambos em 25% (23/92) das colônias estudadas, fator que sugere a diminuição da longevidade do hospedeiro por ação sinérgica dos patógenos. As amostras submetidas ao sequenciamento indicaram similaridade de 96.8 a 100% entre elas, além de forte similaridade com sequências da Ásia, Estados Unidos, Alemanha e Peru. Este estudo relata a circulação de N. ceranae e BQCV nos apiários do sul do Brasil, além de ser a primeira análise filogenética da sequência do BQCV brasileiro.(AU)