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Anal Sci ; 24(3): 333-7, 2008 Mar.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-18332539

RESUMO

An effective, rapid and economical CE/LIF (capillary electrophoresis/laser-induced fluorescence) method was developed and applied to the characterization of signal peptidase (SPase) enzyme, which is a target for the screening of new drug candidates. In this method, CE separates the product from the substrate and LIF selectively detects the fluorescence-labeled product and substrate. By measuring the increase of the product as a function of time, one can monitor the progression of the enzyme reaction. The progression curves were also used for screening inhibitors for this enzyme. The effects of various reaction conditions were also studied and discussed. In addition, this CE/LIF method was applied to the determination of the enzyme activity, the quality control of the substrate and/or enzymes, and the cross-reactivity of inhibitors to the enzyme. It can be concluded that this method is suitable for high throughput screening (HTS) assays because it can deliver fast, sensitive, quantitative, and reliable results.


Assuntos
Eletroforese Capilar/instrumentação , Inibidores Enzimáticos/química , Lasers , Proteínas de Membrana/análise , Serina Endopeptidases/análise , Dimetil Sulfóxido/farmacologia , Avaliação Pré-Clínica de Medicamentos , Eletroforese Capilar/métodos , Ativação Enzimática/efeitos dos fármacos , Inibidores Enzimáticos/farmacologia , Fluorescência , Concentração de Íons de Hidrogênio , Luz , Proteínas de Membrana/antagonistas & inibidores , Proteínas de Membrana/efeitos da radiação , Fragmentos de Peptídeos/química , Sensibilidade e Especificidade , Serina Endopeptidases/efeitos da radiação , Espectrometria de Fluorescência/instrumentação , Espectrometria de Fluorescência/métodos , Relação Estrutura-Atividade , Fatores de Tempo , Ureia/farmacologia
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