RESUMO
Lytic infection by the Epstein-Barr virus (EBV) poses numerous health risks, such as infectious mononucleosis and lymphoproliferative disorder. Proteins in the bromodomain and extraterminal (BET) family regulate multiple stages of viral life cycles and provide promising intervention targets. Synthetic small molecules can bind to the bromodomains and disrupt function by preventing recognition of acetylated lysine substrates. We demonstrate that JQ1 and other BET inhibitors block two different steps in the sequential cascade of the EBV lytic cycle. BET inhibitors prevent expression of the viral immediate-early protein BZLF1. JQ1 alters transcription of genes controlled by the host protein BACH1, and BACH1 knockdown reduces BZLF1 expression. BET proteins also localize to the lytic origin of replication (OriLyt) genetic elements, and BET inhibitors prevent viral late gene expression. There JQ1 reduces BRD4 recruitment during reactivation to preclude replication initiation. This represents a rarely observed dual mode of action for drugs.
Assuntos
Antivirais/farmacologia , Fatores de Transcrição de Zíper de Leucina Básica/antagonistas & inibidores , Proteínas de Grupos de Complementação da Anemia de Fanconi/antagonistas & inibidores , Regulação Viral da Expressão Gênica/efeitos dos fármacos , Herpesvirus Humano 4/efeitos dos fármacos , Proteínas Nucleares/antagonistas & inibidores , Transativadores/antagonistas & inibidores , Fatores de Transcrição/antagonistas & inibidores , Proteínas Virais/antagonistas & inibidores , Acetilação , Azepinas/farmacologia , Fatores de Transcrição de Zíper de Leucina Básica/química , Fatores de Transcrição de Zíper de Leucina Básica/genética , Fatores de Transcrição de Zíper de Leucina Básica/metabolismo , Proteínas de Ciclo Celular , Linhagem Celular , Proteínas de Grupos de Complementação da Anemia de Fanconi/química , Proteínas de Grupos de Complementação da Anemia de Fanconi/genética , Proteínas de Grupos de Complementação da Anemia de Fanconi/metabolismo , Herpesvirus Humano 4/fisiologia , Interações Hospedeiro-Patógeno/efeitos dos fármacos , Humanos , Lisina/metabolismo , Proteínas Nucleares/química , Proteínas Nucleares/genética , Proteínas Nucleares/metabolismo , Domínios e Motivos de Interação entre Proteínas , Processamento de Proteína Pós-Traducional , Transporte Proteico/efeitos dos fármacos , Interferência de RNA , Origem de Replicação/efeitos dos fármacos , Transativadores/química , Transativadores/genética , Transativadores/metabolismo , Fatores de Transcrição/química , Fatores de Transcrição/genética , Fatores de Transcrição/metabolismo , Triazóis/farmacologia , Proteínas Virais/química , Proteínas Virais/genética , Proteínas Virais/metabolismo , Ativação Viral/efeitos dos fármacos , Fenômenos Fisiológicos Virais/efeitos dos fármacosRESUMO
The stepwise and sequential expression of viral genes underlies progression of the infectious life cycle. The Epstein-Barr virus (EBV) is both a tractable model for elucidating principles of transcription as well as a global health threat. We describe an experimental protocol and bioinformatics pipeline for functional identification of EBV true late genes, the last step of transcription prior to virion packaging and egress. All data have been uploaded to the Gene Expression Omnibus under accession code GSE96689. The key improvement over previous approaches is leveraging the sensitivity of RNA-seq to detect gene expression changes during spontaneous reactivation.