RESUMO
Lactate dehydrogenase is an enzyme of glycolytic pathway which catalyzes the interconversion of pyruvate and lactate. The present study describes cDNA cloning, E. coli expression and characterization of lactate dehydrogenase B (LDH-B) from the heart ventricles of river buffalo (Bubalus bubalis). Total RNA was isolated from the heart tissue, a 1005bp cDNA encoding complete polypeptide chain of 334 amino acids was generated by reverse transcriptase reaction and analyzed for nucleotide sequence. The consensus sequence obtained from both strands has shown 84% to 98% homology with that of different mammalian species. The attributed gene was cloned, expressed in BL21 (DE3) RIPL Codon Plus strain of E. coli using pET21a (+) plasmid. The purified recombinant enzyme displayed a KM value of 50 µM for pyruvate, an optimum activity at 35°C and pH 7.0. The enzyme was found as a homotetramer of 140 kDa on FPLC based gel-filtration column. Molecular weight of a subunit of enzyme as determined by mass spectrometric analysis was 36530.21 Da. The present study describes the first ever report about the cDNA sequence and characteristics of recombinant LDH-B from River buffalo.
Assuntos
Búfalos/genética , Escherichia coli/genética , L-Lactato Desidrogenase/genética , Proteínas Recombinantes/genética , Sequência de Aminoácidos , Animais , Sequência de Bases , Clonagem Molecular , Estabilidade Enzimática , Ventrículos do Coração/química , Ventrículos do Coração/enzimologia , Isoenzimas/química , Isoenzimas/genética , Isoenzimas/metabolismo , L-Lactato Desidrogenase/química , L-Lactato Desidrogenase/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Peso Molecular , RNA Mensageiro/isolamento & purificação , Proteínas Recombinantes/química , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Homologia de Sequência de AminoácidosRESUMO
Introducción: es muy raro encontrar al antígeno Dia en caucásicos, negros, polinesios y esquimales, pero se encuentra presente en alta frecuencia en etnias autóctonas de Latinoamérica y población en Asia. El anticuerpo anti-Dia es clínicamente significativo porque se ha asociado con reacciones hemolíticas postransfusionales y la Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido. Objetivos: Establecer la importancia de investigar el antígeno Dia en donantes y anticuerpos anti-Dia en pacientes transfundidos en los bancos de sangre de hospitales públicos y hospitales del Instituto Guatemalteco de Seguridad Social. Metodología: La detección del antígeno Dia se realizó utilizando la prueba de antiglobulina indirecta. A los donantes se dividieron en dos grupos étnicos indígenas y mestizos. Las diferencias en las prevalencias se analizaron mediante la prueba X2 (chi cuadrado) y valor de p<0,05 para mostrar si hay diferencia significativa. Las muestras para la detección de anticuerpos se realizó en un equipo Wadiana-Grifols utilizando células pantalla Serascan 1, 2, 3 y Serascan Diego. Resultados: Se encontró que el antígeno Dia posee una frecuencia de 7.5%. Al ser estratificado la muestra por etnia, la población indígena posee una frecuencia de 12.99% y la población mestiza de 3.90%, encontrándose una diferencia significativa (p<0.005). La frecuencia de anticuerpos anti-Dia fue de 3.50%. Conclusiones: La frecuencia de antígeno Dia en la población bajo estudio fue de 7.32%. La frecuencia de Dia en la población indígena fue de 12.99% y en la población mestiza fue de 3.9%, con una diferencia significativa entre poblaciones (p= 0.03120). La frecuencia de anti-Dia en 227 pacientes politranfundidos fue de 3.5%.
Assuntos
Antígenos de Grupos Sanguíneos/análise , Antígenos de Grupos Sanguíneos/sangue , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr , Antropologia Física , Eritroblastose Fetal/etiologia , Eritroblastose Fetal/etnologia , Guatemala/etnologia , Povos Indígenas , Transfusão de Sangue/efeitos adversosRESUMO
Abstract. Upon mating, male mosquitoes transfer accessory gland proteins (Acps) that induce refractoriness to further mating in females. This can also occur because of cross-insemination by males of related species, a process known as mating interference (satyrization). This mechanism could explain the competitive displacement of resident Aedes aegypti by the invasive Aedes albopictus where they co-occur. We tested this hypothesis in mosquito populations in Florida. A new polymerase chain reaction species diagnostic applied to sperm dissected from 304 field-collected females revealed bidirectional cross-mating in five (1.6%) individuals. Cross-injections of females with Acps showed that Ae. albopictus males induced monogamy in heterospecific females but not Ae. aegypti males. Despite its low frequency in the areas under study, the first evidence of cross-mating in nature and the asymmetric effect of Acps on mating suggest that satyrization may have initially contributed to the observed competitive reduction of Ae. aegypti by invasive Ae. albopictus in many areas.