Inhibition of Melanization by Kojic Acid Promotes Cell Wall Disruption of the Human Pathogenic Fungus Fonsecaea sp.

Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic human subcutaneous mycosis caused by various aetiologic agents. CBM does not have an established treatment but may be managed using antifungal agents, surgical removal of the lesions, or cryotherapy. Kojic acid (KA), a known tyrosinase inhibitor with a variety of biological actions, including fungistatic action against the fungus Cryptococcus neoformans, mediated by inhibiting melanin production, seems to be an alternative to improve the treatment of CBM. The aim of the present study was to analyze the action of KA against the pathogenic fungus Fonsecaea sp., an aetiological agent of CBM. The fungal culture was incubated with KA, and the amount of melanin was assessed, followed by cytochemical detection. Subsequently, the samples were analyzed by light microscopy, transmission and scanning electron microscopy. Culture analysis revealed that 100 g/mL KA significantly decreased the melanization of the fungus and the exocytosis of melanin into the culture supernatant. Additionally, KA induced less growth of biofilm formation and intense disruption of the cell wall, and decreased the number of melanin-containing vesicles in the culture supernatant. Finally, KA inhibited fungal filamentation in culture and the subsequent phagocytosis process. Thus, KA may be a promising substance to help in the treatment of CBM.

Diversity of yeasts during fermentation of cocoa from two sites in the Brazilian Amazon

The purpose of this study was to identify the yeasts involved in spontaneous fermentation of cocoa from the Brazilian Amazon region. The fermentation process was carried out experimentally with cocoa seeds from two sites (Medicilândia and Tucumã), State of Pará, northern Brazil, during a six-day period. Totals of 44 yeasts were isolated from Medicilândia and 29 from Tucumã. Molecular identification was carried out by sequencing the D1/D2 region fragment of the rRNA 26S gene, expanded with universal primers for the NL1GC and LS2 eukaryotes. Pichia manshurica and Saccharomyces cerevisiae were identified in Medicilândia and five yeast species (Pichia fermentans, P. kudriavzevii, P. manshurica, S. cerevisiae and Zygosaccharomyces bailii) were identified in Tucumã. The results showed that P. manshurica and S. cerevisiae may have potential for use as starter cultures in future studies to improve the quality of cocoa seeds fermented in the Brazilian Amazon region. (AU)

A proposta deste estudo foi identificar as leveduras envolvidas na fermentação espontânea de cacau da Amazônia brasileira. A fermentação foi realizada em Medicilândia e Tucumã, Pará, Brasil, durante 6 dias. Em total foram obtidos 44 isolados de leveduras de Medicilândia e 29 de Tucumã. A identificação molecular foi realizada por sequenciamento do fragmento da região D1/D2 do gene rRNA 26S, amplificado com primers universais para eucariotos NL1GC e LS2. Em Medicilândia, foram identificadas Pichia manshurica e Saccharomyces cerevisiae. Em Tucumã foram identificadas cinco espécies (Pichia fermentans, P. kudriavzevii, P. manshurica, S. cerevisiae e Zygosaccharomyces bailii). Os resultados sugerem que P. manshurica e S. cerevisiae podem ter potencial para uso como culturas starter em estudos futuros, para melhorar a qualidade das sementes de cacau fermentadas na Amazônia brasileira.(AU)

Oral and systemic manifestations in HIV-1 patients.

INTRODUCTION: This study aimed to estimate the prevalence of the most frequent oral and systemic manifestations in human immunodeficiency virus-1 (HIV-1)-positive patients. METHODS: The study was conducted on 300 HIV-1 patients attending the Reference Unit Specialized in Special Infectious Parasitic Diseases in Belém, Pará, Brazil. RESULTS: The most prevalent oral conditions were caries (32.6%), candidiasis (32%), and periodontal disease (17%). Among the systemic manifestations, hepatitis (29.2%), gastritis (16%), arterial hypertension (14.7%), and tuberculosis (12%) were the most commonly observed. CONCLUSIONS: We here reported on the most prevalent oral and systemic conditions in HIV-1-positive patients. The healthcare professional's knowledge of the various manifestations among these patients is fundamental to ensure prompt and accurate diagnosis and treatment, and for improving the quality of life of these patients.

Relationship among local and functional factors in the development of denture stomatitis in denture wearers in northern Brazil / Relação entre fatores locais e funcionais no desenvolvimento de estomatite protética em usuários de dentadura no norte do Brasil

Objective: The aim of this study was to evaluate the relationship among functional and qualitative factors in the development of denture stomatitis (DS) (according to Newton's classification) in acrylic-based denture wearers residents from northern Brazil. Material and Method: A total of 99 patients who wore partial or total acrylic resin-based upper dentures were included in this study. The subjects completed an epidemiological data form that includes the patient's gender, age, local factors (hygiene habits, remove denture to sleep, use of mouthwash, present condition of the denture, age of the denture) and functional factors (vertical dimension at rest, vertical dimension of occlusion, occlusion, retention, and static and dynamic stability). To detect yeasts, samples were collected from the inner surface of the dentures and from the palatal mucosa in contact with it. Subsequently, the samples were cultured on Sabouraud dextrose agar, observing macro and microscopic characteristics. Result: In the present study, we did not find any significant relationship between the gender and disease onset. Based on the Newton classification, 36.3% of the patients presented with DS and 89.0% were colonized by yeasts; of these subjects, 50% had type I lesions, 33.3% had type II lesions, and 16.6% had type III lesions. All of the qualitative and local factors, except the use of mouthwash, were clinically relevant to the development of disease. Conclusion: Denture stomatitis in denture users in northern Brazil was multifactorial, involving local, functional and microbiological factors. .

Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre fatores funcionais e qualitativos no desenvolvimento da estomatite protética (EP) (de acordo com a classificação de Newton) em usuários de dentadura acrílica residentes no norte do Brasil. Material e Método: Um total de 99 pacientes, que usavam dentadura superior de resina acrílica parcial ou total, foi incluído neste estudo. Os participantes preencheram um formulário de dados epidemiológicos, que incluiu gênero, idade, fatores locais (hábitos de higiene, retirar a dentadura ao dormir, uso de colutório, condição atual da dentadura, idade da dentadura) e fatores funcionais (dimensão vertical de repouso, dimensão vertical de oclusão, oclusão, retenção, estabilidade estática e dinâmica). Para detectar leveduras, amostras foram coletadas da superfície interna da dentadura e da mucosa palatal em contato com esta. Posteriormente, as amostras foram cultivadas em ágar Sabouraud dextrose, observando-se características macro e microscópicas. Resultado: No presente estudo, não foi encontrada relação significante entre gênero e início da doença. Baseada na classificação de Newton, 36,3% dos pacientes apresentaram EP e 89,0% foram colonizados por leveduras; destes indivíduos, 50% tiveram lesões tipo I, 33,3% tiveram lesões tipo II e 16,6% tiveram lesões tipo III. Todos os fatores locais e qualitativos, exceto o uso de colutório, foram clinicamente relevantes para o desenvolvimento da doença. Conclusão: Estomatite protética em usuários de dentadura do norte do Brasil foi multifatorial, associando fatores locais, funcionais e microbiológicos. .

Quimiotipagem e caracterização fenotípica de Cryptococcus isolados em Belém, Estado do Pará, Brasil / Chemotype determination and phenotypic characterization of isolated Crypfococcus from Belém, Pará State, Brazil

A criptococose é uma infecção fúngica oportunista causada por leveduras do gênero Cryptococcus, principalmente Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Devido ao tropismo pelo sistema nervoso central, a principal manifestação clínica da doença é a meningite criptocócica, que acomete com maior gravidade indivíduos com síndrome da imunodeficiência adquirida. O interesse em aspectos fenotípicos, tais como diâmetro de cápsula, hidrólise de ureia, atividade fenoloxidase, vem aumentando por constituírem a virulência do fungo. O objetivo do presente estudo foi quimiotipar as espécies de Cryptococcus recuperados de 15 casos de meningite criptocócica, caracterizando-os quanto aos aspectos fenotípicos. Sendo assim, leveduras anteriormente identificadas como C. neoformans (n = 15) pelo sistema semiautomatizado API ID 32C, e armazenadas na micoteca do Laboratório de Micologia da Seção de Bacteriologia e Micologia do Instituto Evandro Chagas, foram quimiotipadas em meio canavanina-glicina-azul de bromotimol, e avaliadas quanto ao crescimento a 37o C, sensibilidade à cicloheximida, hidrólise da ureia e atividade da fenoloxidase. A partir da semeadura em meio canavanina-glicina-azul de bromotimol, observamos que 47 por cento (7/15) das leveduras eram Cryptococcus gattii e 53 por cento (8/15) eram Cryptococcus neoformans. Apenas um isolado (1/15; 6,7 por cento) foi capaz de crescer a 37o C, sendo que todos foram sensíveis à cicloheximida, bem como produziram hidrólise da ureia. A atividade da fenoloxidase foi observada em todos os isolados estudados, ocorrendo em até 72 h após a incubação. Neste estudo, o isolamento de Cryptococcus neoformans em casos de meningite criptocócica em Belém, Estado do Pará, Brasil, foi mais frequente. Tanto Cryptococcus neoformans como Cryptococcus gattii apresentaram características fenotípicas típicas, assumindo-se que em nossa região ocorrem isolados virulentos.

Cryptococcosis is an opportunistic fungal infection that is caused by yeasts of the genus Cryptococcus, mainly Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. Due to their tropism for the central nervous system, the main clinical manifestation of the disease is cryptococcal meningitis, which most severely affects individuals with acquired immunodeficiency syndrome. There is increasing interest in some of the phenotypic aspects of these yeasts, such as capsule diameter, urea hydrolysis, and phenoloxidase activity, because they determine the virulence of the fungus. The objective of this study was to determine the chemotype of the Cryptococcus species that were recovered from 15 cases of cryptococcal meningitis and to characterize their phenotypic features. A group of yeasts that were previously identified as C. neoformans (n = 15) by the semi-automated system API ID 32C and stored in the fungal collection of the Laboratory of Mycology of the Bacteriology and Micology Section on the Instituto Evandro Chagas were chemotyped in canavanine glycine bromothymol blue medium and assessed for their growth at 37o C, cycloheximide sensitivity, urea hydrolysis ability, and phenoloxidase activity. Based on culture in canavanine glycine bromothymol blue medium, we observed that 47 per cent (7/15) of the yeasts were C. gattii and that 53 per cent (8/15) were C. neoformans. Only one isolate (1/15) was able to grow at 37o C; all isolates were sensitive to cycloheximide and could hydrolyze urea. Phenoloxidase activity was observed in all groups, occurring up to 72 h after incubation. In this study, cryptococcal meningitis cases in Belém, Pará State, Brazil, were more commonly caused by C. neoformans. Both C. neoformans and C. gattii exhibited typical phenotypic traits, and it was assumed that, virulent isolates occur in our region.

Avaliação de diferentes procedimentos para extração de DNA a partir de esfregaços corados pelo método de Ziehl-Neelsen / Evaluation of different methods of DNA extraction from baciloscopic tests of Ziehl-Neelsen stainig

O Pará é o estado com maior taxa de incidência de tuberculose (TB) na região Norte, com 36,3 casos por 100 mil habitantes em 2004. A obtenção de DNA de qualidade a partir de material fixado em lâminas coradas pelo método de Ziehl-Neelsen (ZN) supriria a falta de amostras representativas para estudos de genotipagem, contribuindo para melhor entendimento da dinâmica de transmissão da TB. O presente estudo avaliou quatro diferentes procedimentos para obtenção de DNA de M. tuberculosis a partir de 196 esfregaços corados pelo método de ZN, que utilizaram xilol e N-acetil-L-cisteína (NALC) em conjunto, de forma isolada ou nenhuma destas substâncias, e ainda dois protocolos de amplificação distintos, um com o adjuvante de PCR glicerol e outro com betaína. O percentual de amplificação foi superior para as amostras que foram submetidas ao procedimento que utilizou somente o xilol e ao que não utilizou nenhuma substância, sendo 77 por cento e 67 por cento, respectivamente, para o protocolo com glicerol, e de 98 por cento e de 96 por cento para o protocolo com betaína. A partir dos resultados obtidos, não é recomendado o uso de xilol ou NALC nos procedimentos de remoção das amostras e sugere-se a inclusão do adjuvante betaína nas reações, assim como o uso do DNA extraído de lâminas coradas pelo método de ZN em análises baseadas em PCR.

Detecção de antígenos circulantes (gp43 e gp70) em líquidos biológicos e pacientes com paracoccidioidomicose com finalidade diagnóstica e monitoramento / Detection circulating antigem (gp43 and gp70) in biologic fluid in patient with paraoccidioidomycosis with purpose diagnosis and follow-up

A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma importante micose sistémica, particularmente entre indivíduos que vivem e trabalham em áreas rurais de endemicidade na América Latina, que sem terapia antifúngica, podem desenvolver a infecção crônica ou aguda fatal. Em algumas doenças fúngicas invasivas, a detecção de antígenos circulantes tem se mostrado útil para o diagnóstico. A detecção de antígenos circulantes de Paracoccidioides brasiliensis em fluídos corpóreos pode facilitar o diagnóstico da micose e confirmar um diagnóstico preliminar quando a detecção de anticorpos não for conclusiva. O teste de ELISA de inibição foi usado para detectar os antígenos gp43 e gp70, moléculas tidas como marcadoras da PCM. Anticorpos monoclonais produzidos contra estas duas moléculas foram usadas em análises independentes, na tentativa de se detectar antígenos em diferentes amostras biológicas, tais como soro, líquor, lavado bronquice-alveolar e urina de pacientes com PCM, bem como no estudo de seguimento em pacientes tratados com Itraconazol (ITZ) ou Sulfametoxazol+Trimetoprim (SMZ+TMP). Das 81 amostras de soro analisadas, antígenos gp43 e gp70 foram detectados em todos os pacientes no momento do diagnóstico ( 96,29 por cento e 98,76 por cento, respectivamente) com um concentração média de 9,87pg/ml e 8,19gg/ml, respectivamente. Nos pacientes com a forma aguda e crônicos unifocal, antígenos foram detectados em 100 por cento dos pacientes. O título de anticorpos destes pacientes foi verificado pela ID, e 73 pacientes (90,12 por cento) foram positivos. Foi verificado também que entre a concentração de antígeno e o título de anticorpos verificadas nestes pacientes no momento do diagnóstico existe uma relação positiva entre as duas técnicas aplicadas. Antígenos circulantes foram detectados em outras amostras biológicas. (au)