Peptide L13S Derived from the BRN2 POU Domain Reduces Metastasis In Vivo and Inhibits Cell Migration and Invasion In Vitro.

BACKGROUND/AIM: The Brain-Specific Homeobox/POU Domain Protein 2 (BRN2) transcription factor supports melanoma progression by regulating the expression of several genes involved in cell migration and invasion. We hypothesized that a peptide designed based on the POU domain of BRN2 could block the BRN2 transcription activity and, consequently, reduce metastasis. MATERIALS AND METHODS: Cell viability was accessed by Trypan Blue exclusion dye assay and xCelligence platform. Wound-healing scratch assay and transwell invasion with matrigel membrane assay were performed to analyze cell migration and invasion. The internalization mechanism of the L13S peptide was investigated using confocal microscopy and wound-healing scratch assay. The impact of L13S on cell protein expression was analyzed through western blotting. In vivo assays were conducted to evaluate the protective effect and toxicity of L13S in a metastatic model using murine melanoma cells. RESULTS: Here, we show that the peptide named L13S can inhibit the migration and invasion of murine melanoma cells (B16F10-Nex2) as well as the migration of human melanoma cells (SK-MEL-25 and A375) by regulating the expression of proteins involved in motility. Mechanistically, we found that L13S is internalized by murine melanoma cells via macropinocytosis and binds actin filaments and nuclei. More importantly, in vivo studies indicated that the peptide was able to significantly inhibit lung metastasis in syngeneic models without off-target effects and with virtually no cytotoxicity toward normal organs. CONCLUSION: L13S peptide is a strong candidate for further development as an anticancer agent for the treatment of melanoma metastasis.

Effects of dietary creatine supplementation on kidney and striated skeletal muscles of rats submitted to ischemia and reperfusion of hind limbs.

PURPOSE: To evaluate the effect of creatine supplementation in the diet of rats subjected to ischemia and reperfusion of hind limbs. METHODS: Eighteen male Wistar rats were randomized to receive dietary creatine supplementation (G1) or no supplementation (G2), before being subjected to 4 h of ischemia followed by 4 h of reperfusion. In addition, 10 rats (G3) underwent the same surgical procedure, without ischemia, but with supplementation. After reperfusion, kidney and musculature were evaluated for histological damage and serum levels of alanine aminotransferase, urea and creatinine were obtained. RESULTS: The urea dosage showed significant differences between the groups (averages G1 = 155.1; G2 = 211.27; G3 = 160.42). Histological analysis found significant differences between G1 and G2 (but not between G1 and G3) in renal myoglobin cylinders and vacuolar degeneration variables and in hypereosinophilia and karyopyknosis variables in muscle fibers. There were no significant differences in the other variables studied. CONCLUSIONS: Creatine supplementation was related to fewer histological lesions, as well as lower levels of plasma urea, which may suggest a protective effect against lesions caused by ischemia and reperfusion of posterior paws muscles in Wistar rats.

Biphosphinic palladacycle complex mediates lysosomal-membrane permeabilization and cell death in K562 leukaemia cells.

The cell death mechanism of cytotoxicity induced by the Biphosphinic Palladacycle Complex (BPC) was studied using a K562 leukaemia cell line. The IC50 values obtained for K562 cells post-72 h of BPC were less than 5.0 microM by using 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) and trypan blue assays. Using the Acridine Orange vital staining combining fluorescence microscopy it was observed that the complex triggers apoptosis in K562 cells, inducing DNA fragmentation, as analysed through electrophoresis. Lysosomal-membrane permeabilization was also observed in K562 cells post-5 h of BPC, which suggests intralysosomal accumulation by proton-trapping, since its pKa value ranged from 5.1 to 6.5. Caspase-3, and -6 activity induced by BPC in K562 cells was prevented by the cathepsin-B inhibitor [N-(L-3-trans-propylcarbamoyl-oxirane-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-proline] (CA074). These events occurred in the presence of endogenous bcl-2 and bax expression. Acute toxicological studies demonstrated that BPC produces no lesions for liver and kidney fourteen-days after drug administration (100 mg/kg--i.p.). White and red blood cells of BPC-treated mice presented normal morphological characteristics. Taken together, these data suggest a novel lysosomal pathway for BPC-induced apoptosis, in which lysosomes are the primary target and cathepsin B acts as death mediator.

Chiral cyclopalladated complexes derived from N,N-dimethyl-1-phenethylamine with bridging bis(diphenylphosphine)ferrocene ligand as inhibitors of the cathepsin B activity and as antitumoral agents.

Chiral cyclopalladated complexes derived from N,N-dimethyl-1-phenethylamine and the coordinating ligand 1,1'-bis(diphenylphosphine)ferrocene were synthesized and studied as Cathepsin B inhibitors and antitumoral agents against solid tumors. Our results revealed that the palladium compound [Pd2(C2,N-S(-)dmpa)2(mu-dppf)Cl2] (2) was able to inhibit Cathepsin B activity in a reversible fashion. This palladacycle compound binds to free cathepsin B (E) as well as to the enzyme-substrate complex (ES) with dissociation constants of KH=12+/-1 microM and alphaKH=2.4+/-0.3 microM, respectively. The application of this complex, in Walker tumor-bearing rats, resulted in 90% inhibition of the tumor growth. Subcutaneous inoculations of 10(6) tumoral cells produced solid tumors with a mass of 4.0+/-1.0 g in 12 days Walker tumor-bearing rats. However, when these animals were treated with one dose of the palladacycle compound (2.0 mg/kg), the tumoral mass was reduced to 0.3+/-0.1 g. On the other hand, the same complex (2) did not afford any protection to mice bearing the non-metastatic Ehrlich Ascites tumor treated with doses of 0.5, 5.0, and 30 mg/kg for a period of four, three and one day, respectively, beginning 72 h after tumor inoculation. Toxicological studies using mice treated with one high dose of the complex (2) (100 mg/kg) did not show any alterations in red and white blood cell morphology 14 days after the drug administration. Similar results were obtained with hepatic, kidney, and spleen tissues. The results presented in this work introduce the title cyclopalladated complexes as promising antitumoral drugs with reduced toxicity in experimental studies.

Efeitos do oleato de etanolamina na parede venosa, de cäes / Ethanolamine oleate effects on venous dog wall

OBJETIVO: Avaliar a resposta biológica que o oleato de etanolamina possa desencadear na parede de veias superficiais normais de cäes. MÉTODOS: Utilizados 39 cäes, sem raça definida, adultos, machos, com peso variando entre 10 a 18 kg, distribuídos de modo aleatório em três grupos: grupo 1, avaliados após 7 dias, grupo 2, 14 dias e grupo 3, 21 dias. O procedimento foi realizado em duas fases. A primeira constou da injeçäo de 2 ml do oleato de monoetanolamina a 5 por cento, por punçäo única na veia cefálica do membro torácico do cäo. A segunda, realizada 7, 14 e 21 dias após, constou da retirada da peça operatória, tendo sido executada em três tempos diferentes, conforme o grupo a que pertencia o animal. As veias contralaterais foram extraídas como controle. Para estudo histológico utilizaram-se os métodos de hematoxilina-eosina e tricrômio de Masson. RESULTADOS: A trombose venosa e a organizaçäo do trombo ocorreram em todos animais estudados. A recanalizaçäo do trombo näo foi observada de modo estatisticamente significante, até 21 dias de exame. Encontrou-se lesäo de túnica média, que näo foi acompanhada de correspondente processo inflamatório. Na túnica adventícia este processo foi visto nos três períodos de tempo estudados. Depósitos de hemossiderina em fagócitos ocorreram aos 14 e 21 dias de experimento. Extravasamento de esclerosante foi observado somente na primeira semana de estudo. Material hialino fibrinóide foi encontrado aos 21 dias de experimento. CONCLUSÕES: O oleato de etanolamina em contato com a parede interna da veia superficial produziu trombose venosa, a qual se organizou em todos os casos, näo se observando sua recanalizaçäo durante o tempo deste ensaio. Houve lesäo da túnica média venosa em todos animais estudados, sem que houvesse processo inflamatório reativo nesse local. Na túnica adventícia venosa surgiu processo inflamatório, além de sinais de extravasamento do esclerosante, da presença de hemossiderina e de material hialino externos à veia.

Efeitos do etil-cianoacrilato na parede venosa de cäes / Etil-cyanoacrylate effects on venous dog wall

Substâncias químicas têm sido empregadas no tratamento de varizes esofagogástricas na prevençäo de hemorragia digestiva e no seu tratamento pela esclerose ou obliteraçäo venosa, como uma alternativa ao tratamento cirúrgico. O adesivo sintético, etil-cianoacrilato, mostrando rápida polimerizaçäo, baixo custo, disponibilidade comercial e boa fluidez para a injeçäo intravenosa, é útil neste propósito. OBJETIVO: Estudar os efeitos do etil-cianoacrilato na parede venosa de cäes. MÉTODOS: Foram utilizados 42 cäes, sem raça definida, adultos, machos, com peso variando entre 10 a 13 kg, distribuídos de modo aleatório, em três grupos: grupo 1, avaliados após 7 dias, grupo 2 , 14 dias e grupo 3 , 21 dias. O procedimento foi realizado em duas fases. A primeira constou da injeçäo de 1 ml de etil-cianoacrilato, por punçäo única, na veia cefálica do membro torácico do cäo. A segunda, realizada 7, 14 e 21 dias após, constou da retirada da peça operatória, contendo o polímero no seu interior e da veia contralateral, sem o mesmo, como controle. Para estudo histológico utilizou-se o método da hematoxilina-eosina. Variáveis estudadas: obliteraçäo, reaçöes inflamatórias: aguda e crônica, tecido de granulaç o e lesäo de parede das veias. RESULTADOS: A obliteraçäo ocorreu em todos cäes estudados, nos períodos de 7, 14 e 21 dias. A reaçäo inflamatória surgiu no período de 7 dias e foi encontrada em todos animais aos 14 e 21 dias. O tecido de granulaçäo após 21 dias. A lesäo de parede venosa ocorreu em todas veias estudadas. CONCLUSAO: O etil-cianoacrilato em contato com a parede interna de veia superficial provoca obliteraçäo da veia e lesäo da parede venosa de cäes.

Uso do cianoacrilato na síntese da pele de ratos: trabalho de pesquisa experimental / Use of cyanoacrylate in rats skin synthesis: experimental research work

O objetivo deste estudo foi investigar o uso dos adesivos etil-cianoacrilato e butil-cianoacrilato com o náilon monofilamentar, comparativamente , na síntese da pele de ratos. Trinta e dois ratos foram distribuídos em três grupos: A, B e C. Estes grupos foram divididos em dois subgrupos, para estudo no sétimo e no décimo-quarto dia pós-operatório. Foram efetuadas no abdome do rato, duas incisões longitudinais e paralelas distando cada uma delas um centímetro da linha mediana, sendo uma do lado direito e a outra do lado esquerdo. Em todos os grupos a síntese da incisão do lado direito, foi realizada com pontos separados de náilon 5-zeros, sendo este considerado o grupo controle (C). Nos animais do grupo A, a síntese do lado esquerdo foi realizada com etil-cianoacrilato (Super Bonder) e nos animais do grupo B, a síntese foi realizada com butil-cianoacrilato (Histoacryl). No sétimo e no décimo-quarto dia pós-operatório, o aspecto macroscópico da cicatriz não mostrou diferença significante. No aspecto microscópico os grupos B e C foram melhores do que o A. Os resultados demonstraram que a síntese com o adesivo sintético é eficaz, mais rápida, indolor e com bons resultados estéticos.