Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando separação imunomagnética / Detection of Campylobacter jejuni in chicken products using immunomagnetic separation

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda, e a carne de frango tem se mostrado uma importante fonte de transmissão. Este microrganismo é de difícil isolamento e os métodos convencionais muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar a técnica de separação imunomagnética (IMS) na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Micropartículas magnéticas ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni foram utilizadas para concentrar C. jejuni antes da semeadura em ágar. O protocolo foi comparado com o método convencional. C. jejuni foi recuperado do alimento experimentalmente contaminado por ambos os métodos, entretanto, quando foi usada a IMS, a presença de microrganismos contaminantes nos meios de cultura foi menor. C. jejuni foi isolado de 7% das amostras de alimento naturalmente contaminadas, usando IMS, e de 3% pelo método convencional. C. coli foi isolado de uma amostra pelo método convencional, mas não foi detectado pelo protocolo com IMS. A técnica de IMS pode ser usada para isolamento de C. jejuni de alimentos, oferecendo a vantagem de detectar em amostras o microrganismo cujo isolamento não é obtido por meio do método convencional.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis and chicken meat has shown to be an important source of infection. This microorganism is difficult to isolate and the conventional methods are often inefficient and may lead to erroneous results. This study aimed at developing and testing the technique of immunomagnetic separation (IMS) in the detection of C. jejuni in chicken products. Microparticles magnetically connected anti-C. jejuni polyclonal antibodies were used to concentrate C. jejuni before agar seeding. The protocol was compared with the conventional method. C. jejuni was recovered from experimentally contaminated food for both methods, however, when the IMS was used, the presence of contaminating microorganisms in the means of culture was smaller. C. jejuni was isolated from 7% of samples of food naturally contaminated, using IMS, and 3% by conventional method. C. coli was isolated from a sample by conventional method, but it was not detected by protocol with IMS. The IMS technique can be used for isolation of C. jejuni in food, offering the advantage of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of the conventional method.(AU)

Ocorrência de Campylobacter e Enterobacteriaceae em aves silvestres e frangos de corte / Campylobacter and Enterobacteriaceae in wild birds and poultry

As aves silvestres podem ser reservatório de bactérias patogênicas e atuar como veiculadoras desses microrganismos para o ambiente, os animais domésticos e o homem. Portanto, o objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência de Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica e Salmonella enterica em aves silvestres capturadas nas áreas próximas de aviários e em frangos de corte alojados nesses estabelecimentos, além de verificar a presença dos genes cdtA, cdtB e cdtC nos isolados de Campylobacter e identificar os sorotipos de Salmonella encontrados. Amostras de fezes de 189 aves silvestres capturadas com redes de neblina nas áreas próximas de 10 aviários e de 200 frangos de corte foram processadas para pesquisa de Campylobacter spp., S. enterica e Y. enterocolitica. Duas espécies de aves silvestres, Sicalis flaveola (canário-da-terra) e Zonotrichia capensis (tico-tico), foram positivas para Salmonella e Campylobacter, respectivamente. Foram isolados Campylobacter spp., S. enterica e Y. enterocolitica de frangos. Todos os isolados de Campylobacter analisados apresentaram os genes cdt. Em dois aviários, Campylobacter foi isolado tanto de frangos como de aves silvestres, entretanto a contaminação mútua entre essas aves não foi comprovada. Este foi o primeiro relato de isolamento de Campylobacter de Z. capensis e de Salmonella do sorotipo Derby de S. flaveola.(AU)

Wild birds can be reservoirs of pathogenic bacteria and act as carriers of these microorganisms to the environment, domestic animals, and humans. Therefore, this study had as objective to verify the occurrence of Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica and Salmonella enterica in wild birds captured in the surroundings of the aviaries and in the broilers housed in these establishments. The presence of the cdtA, cdtB and cdtC genes in Campylobacter isolates was also investigated and Salmonella serotypes were identified. Stool samples from 189 wild birds captured with mist nets in around 10 aviaries and from 200 broilers were processed for Campylobacter spp., S. enterica and Y. enterocolitica research. Two species of wild birds, Sicalis flaveola (Saffron Finch) and Zonotrichia capensis (Rufous-collared Sparrow) were positive for Salmonella and Campylobacter, respectively. Campylobacter spp., S. enterica and Y. enterocolitica were isolated from broilers. The cdt genes were found in all Campylobacter isolates. In two aviaries, Campylobacter was isolated from both broilers and wild birds, however the mutual contamination among these birds has not been shown. This was the first report of Campylobacter isolation from Z. capensis and of Derby Salmonella serotype isolation from S. flaveola.(AU)

Fontes de contaminação de Yersinia enterocolitica durante a produção de leite / Contamination sources of Yersinia enterocolitica during milk production

Objetivou-se determinar as possíveis fontes de contaminação de Yersinia enterocolitica em diferentes pontos do processo de ordenha de vacas leiteiras em oito propriedades da região de Pelotas, RS, ao longo de um ano. Foram analisadas amostras de leite cru de conjunto logo após a ordenha, água de estábulo leiteiro, mão de ordenhador, balde de recolhimento do leite e insuflador de teteiras. As amostras de leite cru e água foram coletadas em frascos estéreis, e as amostras de mão, balde e teteiras com zaragatoas estéreis. As amostras de leite cru foram submetidas a um pré-enriquecimento em água peptonada, sendo posteriormente incubadas em caldo PSTA, adicionado de ampicilina. As amostras de água foram filtradas em membrana de éster de celulose e incubadas em caldo TSB. As amostras de leite após incubação em PSTA, as membranas utilizadas na filtragem da água incubadas em TSB, bem como o material de mãos, balde e teteiras coletadas nas zaragatoas, foram semeados em ágar MacConkey e incubados para a obtenção de colônias. Colônias características foram analisadas por meio de duplex PCR para confirmação da espécie. Os perfis moleculares dos isolados de Y. enterocolitica foram comparados utilizando-se a técnica de rep-PCR. Y. enterocolitica foi isolada de 9,37% das amostras de leite, 6,25% das amostras de água e 12,5% das amostras de mão. Não houve similaridade no perfil de bandas dos isolados encontrados, entretanto foi identificada a presença de cepas diferentes na mesma amostra, demonstrando uma variedade grande de cepas distribuídas no ambiente. A presença de Y. enterocolitica em leite cru no Brasil é preocupante, já que uma quantidade considerável do produto ainda é comercializada de forma clandestina, expondo o consumidor ao risco de infecção pela bactéria, ao consumi-lo sem tratamento térmico adequado.(AU)

This work was performed in order to determine the possible Yersinia enterocolitica contamination sources at different points of the dairy cows milking process in eight properties of Pelotas, RS, in a year. Raw milk samples were analyzed immediately after milking, as well as water from milking parlor, milkers' hands, milk collection bucket, and inflator liners. The samples of raw milk and water were collected in sterile bottles and hand samples, and sterile swabs were used for the buckets and liners. The raw milk samples were subjected to a pre-enrichment peptone water buffered and subsequently incubated in PSTA broth with added ampicillin. Water samples were filtered through cellulose ester membrane and incubated in TSB medium. The milk samples after incubation in PSTA, the membranes used in water filtration were incubated in TSB and the material of the hands material, bucket and liners collected in the swabs were plated on MacConkey agar to obtain colonies. Characteristics of colonies were analyzed by duplex PCR to confirm the species. The molecular profiles of Y. enterocolitica isolates were compared using rep-PCR. Y. enterocolitica was isolated from 9,37% of milk samples, 6,25% of water samples and 12,5% of hand samples. There weren't similarities in the band profile of the isolates found; however, the presence of different strains was found in the same sample, demonstrating a variety of strains distributed in the environment. The presence of Y. enterocolitica in raw milk in Brazil is dangerous, considering that the product is sold clandestinely, exposing consumers to the risk of infection by the bacterium, when consuming it without proper heat treatment.(AU)

Sanitizer resistance of biofilm-forming Salmonellaisolated from meat products / Resistência de Salmonella formadora de biofilme isolada de produtos cárneos a sanitizantes

Este estudo avaliou a capacidade de Salmonella enterica subsp. enterica isolada de produtos cárneos formar biofilme e testou sua resistência a diferentes sanitizantes. Vinte cepas foram avaliadas quanto à capacidade de formar biofilme em placas de microtitulação. As cepas formadoras de biofilme foram testadas em superfícies de polietileno de alta densidade, aço inoxidável e vidro e tiveram a sensibilidade ao hipoclorito de sódio e ao iodo avaliada. Duas cepas de Salmonella Enteritidis isoladas de produtos de frango apresentaram capacidade de formar biofilme nas superfícies testadas. Essas cepas alcançaram maiores populações nas superfícies do que aquelas não formadoras de biofilme, e foram mais difíceis de remover ou reduzir. Devido à ação sanitizante ser menos eficiente sobre bactérias formadoras de biofilme, esses micro-organismos podem persistir no biofilme formado sobre as superfícies de equipamentos e utensílios e ocasionalmente contaminar os alimentos antes da sua expedição, aumentando dessa forma o risco de ocorrência de doenças transmitidas por alimentos.(AU)

Ocorrência de Campylobacter em carne de frango, fezes de frango e humanas e pesquisa dos genes cdt / Occurrence of Campylobacter in poultry, meat chicken and human feces, and cdt GENES research

Foram coletadas 100 amostras de conteúdo fecal de aves de corte, 100 de produtos de frango (coxa, sobrecoxa, asa, dorso, carne moída e fígado) e 100 de fezes de humanos, e analisadas para pesquisa de Campylobacter. Realizou-se a determinação da espécie e da presença dos genes cdt, responsáveis pela codificação da toxina citoletal distensiva (CDT), através da técnica da PCR. A bactéria foi isolada de 61% das amostras de fezes de frango, 20% de produtos de frango e 3% de fezes de humanos. A maioria dos isolados foi determinada como C. jejuni . Destes, 93,5% apresentaram os genes para a toxina CDT. Apesar de a ocorrência de Campylobacter em fezes de humanos ter sido baixa, a prevalência em frangos de corte e produtos de frango foi elevada, fato que, aliado à presença dos genes cdt na maioria dos isolados, representa risco potencial para os consumidores. Esses resultados são indicativos da necessidade de medidas preventivas no sistema de produção e de boas práticas de fabricação na indústria, de forma a minimizar a contaminação dos produtos e diminuir o risco para os consumidores.

A hundred chicken fecal samples, a hundred samples of retail poultry products and a hundred samples of human feces were collected and tested for the presence of Campylobacter. The species identification and the analysis for the presence of cdt genes, responsible for encoding the cytolethal distending toxin, were performed by PCR. Campylobacter was found in 61% of the chicken fecal samples, in 20% of the poultry products and in 3% of the human feces. Most isolates were identified as C. jejuni. In 93.5% of these isolates, the cdt genes have been detected. Despite the occurrence of Campylobacter in feces of humans has been low, the prevalence in broilers and poultry products was high, which, combined with the presence of cdt genes in most isolates, represents a potential risk to consumers. These results suggest there is a need for preventive measures in the production system and good manufacturing practices in the industry so as to minimize contamination of products and reduce the risk to consumers.

Virulence markers and serotypes of Shiga toxin-producing Escherichia coli, isolated from cattle in Rio Grande do Sul, Brazil.

AIMS: To determine the prevalence of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and serotypes and virulence markers of the STEC isolates from beef and dairy cattle in Rio Grande do Sul, Brazil. METHODS AND RESULTS: Faecal samples from beef cattle were collected at slaughterhouses. The isolates were submitted to colony hybridization assay with specific DNA probes for stx1, stx2 and eae genes, and serotyped for the identification of O and H antigens. Thirty-nine per cent of beef cattle surveyed harboured at least one STEC strain. Among the distinct serotypes identified, 10 were shared by both beef and dairy cattle. Most of the strains isolated harboured stx2. Genotypic and phenotypic profiles allowed the identification of 34 and 31 STEC strains, isolated from beef and dairy cattle, respectively. Serotypes O10:H14, O15:H21, O96:H21, O119:H4, O124:H11, O128:H21, O137:H-, O141:H19, O159:H42, O160:H2 and O177:H11, identified in this study, have not been previously reported as STEC isolated from cattle. CONCLUSIONS: Cattle are an important reservoir of STEC strains associated with human diseases in South America. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Determining the prevalence, genotypic profile and serotypes of STEC strains isolated from cattle enables the prediction of possible risk for public health.

Avaliação microbiológica de queijo colonial produzido na cidade de Três Passos, RS / Microbiological evaluation of produced cheese in the city of Três Passos, RS

Vinte e cinco amostras de queijo colonial, oriundas de cinco estabelecimentos da cidade de Três Passos, RS, foram submetidas às seguintes análises microbiológicas: contagens de bactérias mesófilas, bactérias psicrotróficas, coliformes totais, coliformes fecais e pesquisa de Salmonella. As médias das contagens de microorganismos mesófilos e psicrotróficos foram, na propriedade A, 4,3 x 10 UFC/g e 1,4 x 10 UFC/g; na B, 3,7 x 10 UFC/g e 4,4 x 10 UFC/g; na C, 2,5 x 10 UFC/g e 2,8 x 10 UFC/g; na D, 1,4 x 10 UFC/ g e 4,0 x 10 UFC/g e, na E, 1,5 x 10 UFC/g e 6,7 x 10 UFC/g, respectivamente. As contagens de coliformes totais nas propriedades A, B, C e D foram > 110 NMP/g e na propriedade E 88,9 NMP. Os resultados das contagens coliformes fecais foram 47,5 NMP/g na propriedade A, >110 NMP/g na B,2,1 NMP/g na C, <0,3 NMP/g na D e 10,0 NMP/g na E. A pesquisa de Salmonella apresentou ausência / 25g em todas as amostras. Os resultados revelaram altos índices de microorganismos nos produtos, sugerindo qualidade de matéria prima insatisfatória e/ou condições de produção e armazenamento inadequadas.

Symmetric focal degeneration in the cerebellar and vestibular nuclei in swine caused by ingestion of Aeschynomene indica seeds.

A vestibulocerebellar disorder was observed in 2- to 4-month-old swine after consumption of broken rice contaminated with 13% Aeschynomene indica seeds. Affected animals recovered in 2-14 days after removal of the contaminated food. To reproduce the syndrome, 10 pigs were fed 13% A. indica seeds in commercial pig ration or rice. They showed clinical signs similar to those observed in the spontaneous cases, 1 hour to 6 days after ingestion. Three pigs recovered after the withdrawal of the contaminated food. The others were killed. Two pigs that were fed for 25 days with food containing 3% and 6% seeds and two control pigs did not show clinical signs. Histologic lesions were characterized by symmetric focal degeneration in the cerebellar and vestibular nuclei. The initial lesion, observed 24 hours after the first ingestion, was characterized by vacuolation of the neuropil. Subsequently, there was progressive loss of parenchyma, vascular reaction, a few small spheroids, astrocytosis, and accumulation of gitter cells. The brains from four pigs were perfused with a buffered solution of glutaraldehyde-paraformaldehyde 12-48 hours after they started to ingest the seeds. No ultrastructural lesions were observed in the cerebellar nuclei after 12 hours of seed consumption. At 24 hours, endothelial cells and pericytes were separated by empty spaces from astrocyte foot processes, suggesting perivascular edema. The astrocytes were enlarged, consistent with intracellular fluid accumulation. These results suggest that A. indica seeds are toxic, causing functional derangement of the vestibulocerebellar system, followed by alterations in the microvasculature in the cerebellar and vestibular nuclei.