Obtención de celulasas bacterianas usando residuos orgánicos generados en plazas de mercado / Bacterial cellulases obtention from organic wastes generated in marketplaces

RESUMEN Los residuos agrícolas son una fuente de celulosa que puede ser aprovechada para producir enzimas hidrolíticas, como las celulasas, mediante acción microbiana. Estas celulasas son utilizadas en procesos extractivos de biomoléculas, en la producción de biogás, en la industria textil, detergente, alimentaria y del papel. El propósito del estudio es la obtención de celulasas bacterianas utilizando residuos orgánicos, generados en plazas de mercado. Se realizaron dos medios de cultivo (A1 y A2), a partir de ameros de mazorca y cáscaras de leguminosas, ajustando el pH del medio A1 a 7,0 y el de A2 a 5,0. Los medios fueron fermentados por 75 horas, mediante la cepa bacteriana C6M2, aislada de residuos de plazas de mercado, monitoreando la actividad enzimática, la concentración de azúcares reductores y la celulosa residual. La máxima actividad celulolítica se logró a las 56 horas de fermentación en A1 y a las 32 horas, en A2. El extracto enzimático se precipitó, dializó y ultrafiltró, obteniendo una actividad final de 9,07 ± 0,48 U/mL. Los ameros y las cáscaras de leguminosa se pueden aprovechar como sustratos en la producción de celulasas, con posibles aplicaciones en procesos donde requieran bajos grados de pureza.

ABSTRACT Agricultural wastes are a source of cellulose that could be used to produce hydrolytic enzymes such as cellulases by microbial action. Cellulases are used in the extractive process of biomolecules, in biogas production, textile, detergent, food, and paper industry. The study purpose is the obtention of bacterial cellulases using organic wastes generated in marketplaces. Two culture media were done (A1 and A2) with corn cob leaves and legume seed pods adjusting the A1 medium pH at 7.0 and the A2 pH at 5.0. The media were fermented for 75 hours by the bacterial strain C6M2, isolated from marketplace wastes, and the enzyme activity, reducing sugar concentration, and residual cellulose were monitored. The maximum cellulolytic activity was obtained at 56 hours of fermentation in A1 and in A2 it was at 32 hours. The enzyme extract was precipitated, dialyzed and ultra-filtrated obtaining a final activity of 9.07 ± 0.48 U/mL. The corn cob leaves and legume seed pods can be used as substrates in the production of cellulases which might be applied in processes with low requirements of enzyme purity.

Actividades enzimáticas séricas de la ceruplasmina y la mieloperoxidasa en diabéticos tipo 2

Introducción: La diabetes mellitus tipo 2 se caracteriza por la hiperglucemia debido a la insuficiente producción de insulina de las células β. La mieloperoxidasa promueve el estrés oxidativo durante la inflamación y la ceruloplasmina se considera su inhibidor endógeno. Objetivo: Evaluar la relación entre la ceruloplasmina y la mieloperoxidasa, determinadas simultáneamente en el suero de pacientes diabéticos tipo 2. Métodos: Se estudiaron 362 pacientes diabéticos tipo 2 y 110 sujetos sanos. La actividad sérica de la ceruloplasmina se determinó por el método de Siotto; y el de la mieloperoxidasa, por el de Kraeisz. Resultados: El 72 % de los pacientes diabéticos tenían hiperglucemia y el 77 % presentaba obesidad abdominal. Las actividades de ambas enzimas se incrementaron significativamente en relación con el grupo control. El coeficiente de correlación de la actividad enzimática resultó bajo. El cociente RMPO/CP de los pacientes diabéticos superó el de los controles. La ceruloplasmina no inhibió la mieloperoxidasa. Conclusiones: Predominó la mieloperoxidasa, por tanto, no se manifestó el efecto inhibitorio de la ceruloplasmina. La elevada actividad de la mieloperoxidasa se asocia con un agravamiento del cuadro clínico del paciente diabético.

Introduction: Type 2 diabetes mellitus is characterized by hyperglycemia due to insufficient insulin production by β cells. Myeloperoxidase promotes oxidative stress during inflammation and ceruloplasmin is considered its endogenous inhibitor. Objective: To evaluate the relationship between ceruloplasmin and myeloperoxidase, determined simultaneously in the serum of type 2 diabetic patients. Methods: A total of 362 type 2 diabetic patients and 110 healthy subjects were studied. Serum ceruloplasmin activity was determined by the Siotto KM method and myeloperoxidase by the Kraeisz JE method. Results: 72% of diabetic patients had hyperglycemia and 77% had abdominal obesity. The activities of both enzymes were significantly increased relative to the control group. The correlation coefficient of enzyme activity was low. The ORMO/CP ratio of diabetic patients exceeded that of controls. Ceruloplasmin did not inhibit myeloperoxidase. Conclusions: Myeloperoxidase predominated, therefore, the inhibitory effect of ceruloplasmin was not manifested. The high activity of myeloperoxidase was associated with a worsening of the clinical picture of the diabetic patient.

Inhibición de enzimas fosfolipasas A2 de venenos totales de serpientes como estrategia en la búsqueda de nuevos fármacos / Enzyme phospholipase A2 inhibition from snake venoms as strategy to search for new drug

Introducción: Los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) son ampliamente utilizados para la terapia del dolor, a pesar de sus efectos secundarios que ocurren a nivel renal, estomacal y coagulatorio. Las fosfolipasas A2 (PLA2) presentes en los venenos de serpientes, abejas e incluso en el organismo humano, son responsables de varios procesos fisiológicos y patológicos. Las enzimas hidrolizan fosfolípidos de membrana liberando ácido araquidónico, un precursor de los eicosanoides pro-inflamatorios, los cuales originan mediadores de la inflamación. Objetivo: El propósito de este trabajo es revisar nuevas moléculas capaces de bloquear la escisión de los fosfolípidos de membrana por acción de las PLA2, evitando la formación de mediadores de inflamación. Metodología: Se realizó una revisión bibliográfica de estudios publicados desde 2011 a 2021, que reportan compuestos con actividad inhibitoria frente a PLA2. El potencial de los estudios de relación estructura actividad se discute como estrategia para encontrar compuestos activos ante PLA2. Resultados: Se revisaron 26 estudios que incluyen compuestos naturales y sintéticos y se recopilaron 93 moléculas con actividad inhibitoria, destacando su potencial como inhibidores de PLA2. Conclusiones: La actividad inhibitoria de los compuestos revisados podría estar asociada a los patrones de sustitución en el anillo bencénico de las moléculas. La evaluación de características moleculares relevantes en la inhibición de PLA2 puede guiar a la identificación de candidatos para síntesis de nuevos inhibidores enzimáticos.

Introduction: Nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are widely used for pain therapy, despite its side effects in renal, stomach and coagulant systems. Phospholipases A2 (PLA2) enzymes, present in snakes and bees' venoms, and even in the human organism, are responsible for several physiological and pathological processes. These enzymes hydrolyze membrane phospholipids, releasing arachidonic acid, a precursor of pro-inflammatory eicosanoids, which give rise to inflammatory mediators. Objective: The aim of the present work is to review new molecules able to block the cleavage of membrane phospholipids by the action of phospholipases A2, preventing the formation of inflammatory mediators. Methodology: A bibliographic revision from literature published from 2011 to 2021 focused on PLA2 inhibitors was carried out. The potential of structure-activity relationship studies is discussed as a strategy to find active compounds against PLA2. Results: 26 studies including natural and synthetic compounds were reviewed and data from 93 molecules with inhibitory activity were collected, highlighting its potential as PLA2 inhibitors. Conclusion: The inhibitory activity of the reviewed compounds could be associated with the substitution patterns in the benzene ring of the molecules. The evaluation of molecular moieties with relevant capacity to inhibit PLA2 will lead to the identification of candidates for synthesis of new enzymes inhibitors.

RESPUESTAS TEMPRANAS EN SIMPLASTO DE TALLO ASOCIADAS A LA RUTA DEL ÁCIDO SALICÍLICO EN LA INTERACCIÓN CLAVEL (Dianthus caryophyllus, caryophyllaceae)- Fod (Fusarium oxysporum f. sp. dianthi) / Early responses at symplastic stem level associated with the salicylic acid pathway in the interaction carnation (Dianthus caryophyllus, caryophyllaceae)- Fod (Fusarium oxysporum f. Sp. dianthi)

RESUMEN El marchitamiento vascular causado por Fusarium oxysporum f. sp. dianthi (Fod) es la enfermedad que más afecta el cultivo de clavel. Comprender la naturaleza de la interacción entre la planta y el patógeno permitirá el futuro desarrollo de nuevas alternativas de control de la enfermedad. Es por ello que se busca tener evidencia experimental que permita entender el papel de la ruta de señalización del ácido salicílico (SA) y enzimas asociadas con la resistencia de la planta como son fenilalanina amonio liasa (PAL), polifenoloxidasa (PFO), guayacol peroxidasa (GPX) y fosfolipasa D (PLD), a nivel del simplasto del tallo durante la interacción con él patógeno. Se estableció un ensayo in vivo utilizando dos variedades de clavel con diferentes niveles de resistencia a la enfermedad y se determinaron en simplasto de tallo los niveles de SA, MeSA (salicilato de metilo) y las enzimas objeto de estudio. Se presentó inducción de las enzimas estudiadas, evidenciando en el caso de la enzima GPX un aumento a nivel transcripcional. Así mismo, se presentó un incremento de MeSA en los 1 y 14 dpi, mientras que SA se acumuló en tiempos tardíos. La correlación de Pearson determinó que a este nivel existe una acumulación de la hormona MeSA al 1 dpi con los niveles de las enzimas GPX y PLD. Se propone que la respuesta en este órgano de clavel puede estar activada por la ruta de señalización que involucra SA, afectando el metabolismo secundario y la regulación de especies reactivas de oxígeno.

ABSTRACT The vascular wilting caused by the Fusarium oxysporum f. sp. dianthi (Fod) is the most important disease affecting carnation crops. Understanding the nature of the interaction between the plant and the pathogen will allow the development of new alternatives for disease control. That is why on this study, we want to know the role of the salicylic acid's (SA) signaling pathway and of some enzymes associated to the plant's resistance such as phenylalanine amino lyase (PAL), polyphenol oxidase (PFO), guaiacol peroxidase (GPX) and phospholipase D (PLD), at the stem's symplastic level during the interaction with the pathogen. An in vivo assay was established using two carnation cultivars presenting contrasting levels of resistance to the disease, and the levels of SA, MeSA (Methyl salicylate) and the named enzymes were determined. Induction of the studied enzymes occurred, showing an increase at the transcriptional level in the case of the GPX enzyme. Likewise, an increase of MeSA was presented at 1 and 14 dpi, while SA was accumulated at later times. The Pearson correlation determined that on this level there is an accumulation of the MeSA hormone on 1 dpi with the levels of the enzymes GPX and PLD. We proposed that the response on the stem symplast can be activated by the signaling pathway that involves SA, affecting the secondary metabolism and the regulation of reactive species of oxygen.

Metabolitos secundarios aislados de especies de la familia Myristicaceae que producen inhibición enzimática / Secondary metabolites of species of the Myristicaceae family that produce enzymatic inhibition / Metabólitos secundários isolados de espécies da família Myristicaceae que produzem inibição enzimática

RESUMEN Introducción: Diferentes especies de la familia Myristicaceae han sido utilizadas con fines medicinales, nutricionales e industriales, mostrando así la importancia y potencial de la familia en diversos campos. El uso medicinal ha sido primordial por diferentes comunidades indígenas y ha venido en aumento como alternativa al tratamiento de enfermedades, por lo cual la investigación se está concentrando en la medicina herbaria y plantas medicinales, siendo este el primer paso para el desarrollo e innovación de fármacos. Entre los tipos de fármacos se destacan los inhibidores enzimáticos, que actúan regulando procesos metabólicos o atacando patógenos. Objetivos: Recopilar información de la herboristería de la familia Myristicaceae que incluya aspectos de fitoquímica, etnobotánica, usos industriales, actividad biológica y determinar posibles metabolitos secundarios que producen inhibición enzimática y actividad biológica. Metodología: La búsqueda de información se realizó con artículos científicos, libros especializados y tesis de grado. Resultados y conclusiones: Se encontró que compuestos fenólicos de tipo: acilfenol, lignano, neolignano, flavonoide, alquenil-fenol, tocotrienol y ácido fenólico producen inhibición enzimática. Los compuestos fenólicos identificados en especies de la familia Myristicaceae son una fuente promisoria de metabolitos que producen inhibición enzimática. Siendo los metabolitos de tipo lignanos los que presentaron mayor número de estudios de inhibición enzimática. La información analizada puede servir de base para el desarrollo de investigaciones de relación estructura actividad y/o acoplamiento molecular entre metabolitos secundarios y enzimas inhibidas, con especies de la familia Myristicaceae.

SUMMARY Introduction: Different species of the Myristicaceae family have been used for medicinal, nutritional and industrial purposes, showing the importance and potential of the family in various fields. Medicinal use has been primordial for different indigenous communities and has been increasing as an alternative for the treatment of diseases, for which research is concentrating on herbal medicine and medicinal plants, being this the first step for the development and innovation of pharmaceuticals. Among the types of drugs, enzymatic inhibitors, which act by regulating metabolic processes or attacking pathogens, stand out. Objectives: To gather information on the herbalism of the Myristicaceae family including aspects of phytochemistry, ethnobotany, industrial uses, biological activity and to determine possible secondary metabolites that produce enzymatic inhibition and biological activity. Methodology: The search for information was carried out using scientific articles, specialized books and degree theses. Results and conclusions: Phenolic compounds of type: acylphenol, lignan, neolignan, flavonoid, alkenylphenol, tocotrienol and phenolic acid were found to produce enzymatic inhibition. Phenolic compounds identified in species of the Myristicaceae family are a promising source of metabolites that produce enzymatic inhibition. Lignan-type metabolites were the ones that presented the greatest number of enzymatic inhibition studies. The information analyzed can serve as a basis for the development of research on the structure-activity relationship andlor molecular coupling between secondary metabolites and inhibited enzymes, with species of the Myristicaceae family.

RESUMO Introdução: Diferentes espécies da família Myristicaceae têm sido utilizadas para fins medicinais, nutricionais e industriais, mostrando a importância e o potencial da família em vários campos. O uso medicinal tem sido de suma importância para diferentes comunidades indígenas e tem aumentado como alternativa para o tratamento de doenças, razão pela qual a pesquisa está se concentrando na medicina herbal e plantas medicinais, sendo este o primeiro passo para o desenvolvimento e inovação de produtos farmacêuticos. Entre os tipos de drogas estão os inibidores enzimáticos, que atuam regulando processos metabólicos ou atacando patógenos. Objetivos: Compilar informações sobre o herbalismo da família Myristicaceae, incluindo aspectos de fitoquímica, etnobotànica, usos industriais, atividade biológica e determinar possíveis metabolitos secundários que produzem inibição enzimática e atividade biológica. Metodologia: A busca de informações foi realizada utilizando artigos científicos, livros especializados e teses de graduação. Resultados e conclusões: Foram encontrados compostos fenólicos como: acylphenol, lignan, neolignan, flavonoid, alkenylphenol, tocotrienol e ácido fenólico para produzir inibição enzimática. Os compostos fenólicos identificados em espécies da família Myristicaceae são uma fonte promissora de meta-bólitos que produzem inibição enzimática. Os metabólitos do tipo lignano mostraram o maior número de estudos de inibição enzimática. As informações analisadas podem servir como base para o desenvolvimento de pesquisas sobre a relação estrutura-ativi-dade eIou acoplamento molecular entre metabolitos secundários e enzimas inibidas, com espécies da família Myristicaceae.

Partial characterization of digestive proteases in juveniles of Microphis brachyurus (short-tailed pipefish) (Syngnathiformes: Syngnathidae)

Short-tailed pipe fish (Microphis brachyurus) is a freshwater organism with high economic potential for the aquarium hobby, so it is necessary to implement methods to promote its culture through studies of digestive physiology. General activities of acid and alkaline proteases were evaluated, as well as the effect of pH, temperature and inhibitors. The optimal pH of stomach proteases was 2, while the optimal pH of intestinal proteases was 10. Optimal temperature for the acidic proteases was 35 ºC, while for alkaline proteases it was 45 ºC. Thermal stability showed high resistance at 35 ºC for both acid and alkaline proteases (above 100% residual activity). Acid proteases are resistant at pH 2 (50% of residual activity), meanwhile alkaline proteases were highly resistant at pH 10 (90% of residual activity). Acid proteases were inhibited by 80% with pepstatin A and alkaline proteases were inhibited with TLCK and TPCK for trypsin (75%) and chymotrypsin (80%), respectively. Finally, metallo-proteases were 75% partially inhibited some serine proteases by 75% with EDTA. In conclusion, M. brachyurus has a good digestive capacity, since they can degrade a wide variety of proteins due to their greater proteolytic activity.(AU)

El pez pipa (Microphis brachyurus) es un organismo dulceacuícola con alto potencial económico para la acuarofilia; sin embargo, es necesario implementar su cultivo a través de estudios de fisiología digestiva. Se evaluó el efecto del pH, temperatura e inhibidores sobre las actividades enzimáticas de proteasas ácidas y alcalinas. El pH óptimo de proteasas estomacales es de 2, mientras que el de proteases intestinales es de 10. La temperatura óptima de proteasas ácidas es de 35 ºC y las alcalinas de 45 ºC. La estabilidad térmica para proteasas ácidas y alcalinas es a los 35 ºC (más de 100% de actividad residual). La estabilidad a los diferentes pH de las proteasas ácidas es en 2 (50 % de la actividad residual), mientras que para las proteasas alcalinas es en 10 (90 % de la actividad residual). Las proteasas ácidas fueron inhibidas en 80% con pepstatina A y las proteasas alcalinas fueron altamente inhibidas con TLCK para tripsina (75%) y TPCK quimitripsina (80%). Finalmente, las metaloproteasas fueron inactivadas con EDTA en 70%. En conclusión, M. brachyurus tiene una buena capacidad digestiva al degradar una amplia variedad de proteinas debido a su alta actividad proteolítica.(AU)

Método microespectrofotométrico para la determinación de valores de referencia de la fosfomanosa isomerasa / A Microspectrophotometric Method for the Determination of Reference Values of Phosphomannose Isomerase / Método microespectrofotométrico para determinar valores de referência da fosfomanose isomerase

Resumen: Los desórdenes congénitos de glicosilación son un conjunto de defectos genéticos de tipo multisistémico que afectan la función de la proteína. Se han descrito cerca de 75 enfermedades desde sus primeros estudios. En el presente estudio se desarrolló un método microespectrofotométrico para el diagnóstico de la enzima citosólica fosfomanosa isomerasa EC 5.3.1.8 (PMI), se analizaron 32 muestras de individuos con rango de edad de 0,6 a 27 años y se estableció el intervalo y el valor de referencia de actividad enzimática específica. Este estudio permitirá iniciar el diagnóstico de pacientes deficientes de la PMI de forma temprana y oportuna, lo cual la convierte en una posible enzima candidata para pruebas de tamizaje neonatal, ya que esta patología tiene un tratamiento fácil y de bajo costo, que consiste en la suplementación de manosa en forma oral. El diagnóstico clínico de este desorden metabólico beneficiará al paciente y a su familia al mejorar su calidad de vida, como también al sistema de salud colombiano.

Abstract: Congenital glycosylation disorders are a set of multi-systemic genetic defects affecting protein function. About 75 diseases have been described since early studies. This study developed a microspectrophotometric method for the diagnosis of the cytosolic enzyme phosphomannose isomerase (PMI) (EC 5.3.1.8), analyzed 32 samples of individuals ranging between 0.6 and 27 years old, and established the interval and reference value of specific enzyme activity. This study will allow early and timely diagnosis of PMI deficient patients, which makes this enzyme a potential candidate for neonatal screening tests since this pathology has an easy, low-cost treatment (oral administration of mannose supplements). Clinical diagnosis of this metabolic disorder will benefit the patient and his family by improving his quality of life, as well as the Colombian healthcare system.

Resumo: Os defeitos congénitos de glicosilação são um conjunto de defeitos genéticos de tipo mul-tissistêmico que afetam a função da proteína. Foram descritas 75 doenças desde seus primeiros estudos. Neste estudo, foi desenvolvido um método microespectrofotométrico para diagnosticar a enzima citosólica fosfomanose isomerase EC 5.3.1.8 (PMI); foram analisadas 32 amostras de indivíduos entre 0,6 e 27 anos e estabelecidos o intervalo e o valor de referência de atividade enzimática específica. Este estudo permitirá iniciar o diagnóstico de pacientes deficientes da PMI de forma precoce e oportuna, o que a converte em uma possível enzima candidata para testes genéticos de rastreio pré-natal, já que essa patologia tem um tratamento fácil e de baixo custo, que consiste na suplementação de manose por via oral. O diagnóstico clínico desse defeito metabólico beneficiará o paciente e sua família ao melhorar a qualidade de vida e o sistema de saúde colombiano.

Efecto de la procedencia y el almacenamiento en la calidad del café / Effect of provenance and storage on coffee quality

Resumen Antecedentes. La calidad del grano de café ha sido relacionada con su procedencia, su manejo agronómico y sus condiciones de almacenamiento. Objetivo. Determinar la actividad de la polifenil oxidasa, el contenido de lípidos, el color y las características organolépticas de cafés provenientes de 3 subestaciones experimentales. Materiales y métodos. Se siguió un diseño completamente aleatorio en arreglo factorial factorial 3x6 (lugares de procedencia del café y tiempo de almacenamiento respectivamente). Resultados. La actividad de la polifenil oxidasa es mayor en el café fresco-para las tres procedencias. El café procedente de Naranjal presentó actividades enzimáticas más altas que los cafés provenientes de las subestaciones Supía y la Catalina. El análisis de varianza mostró el efecto de la procedencia sobre la variable actividad enzimática. La actividad de la polifenil oxidasa en los cafés estudiados decrece con el tiempo de almacenamiento. El contenido de lípidos es menor a menor en la subestación de la Catalina. Todos los cafés fueron caracterizados de buena calidad en el tiempo cero de almacenamiento. Las características de aroma, intensidad del aroma y cuerpo presentaron altibajos en los diferentes meses de almacenamiento. El café de Naranjal, obtuvo en promedio una calificación aceptable a lo largo de los seis meses de almacenamiento. Conclusiones. Se encontraron diferencias significativas para las variables estudiadas por efecto de la procedencia y el almacenamiento. La actividad enzimática de la PFO presentó etapas de activación/inhibición, durante los seis meses de almacenamiento.

Abstract Background. The quality of the coffee bean has been related to its origin, the agronomic management and the storage conditions. Objective. To determine the activity of the polyphenyl oxidase, the lipid content, the color and the organoleptic characteristics of coffees from 3 experimental substations. Materials and methods. A completely randomized design was followed in a 3x6 factorial arrangement (places of coffee origin and storage time respectively). Results. The activity of polyphenyl oxidase is greater in fresh coffee-for the three provenances. The coffee from Naranjal presented higher enzymatic activities than the coffees from the Supía and the Catalina substations. The analysis of variance showed the effect of provenance on the enzyme activity variable. The activity of the polyphenyl oxidase in the coffees studied decreases with storage time. The lipid content is lower at a lower height in the Catalina. All coffees were characterized as good quality at zero storage time; but the characteristics of aroma, intensity of aroma and body presented ups and downs in the different months of storage. Naranjal coffee, on average, obtained an acceptable rating throughout the six months of storage. Conclusions. Significant differences were found for the variables studied due to the effect of provenance and storage. The enzymatic activity of the PFO showed activation / inhibition stages, during the six months of storage.

Determinación del contenido extra e intracelular de algunas enzimas líticas relacionadas con pared celular en raíces de clavel (Dianthus caryophyllus L.) / Determination of extra and intracellular lytic enzymes related with carnation (Dianthuscaryophyllus L.) root cell wall / Determinação do conteúdo extra e intracelular de algumas enzimas líticas relacionadas com a parede celular em raízes de cravo (Dianthus caryophyllus L.)

En el presente trabajo se verificó la presencia de algunas enzimas relacionadas con la pared celular vegetal (poligalacturonasa, pectato liasa, proteasa y xilanasa) en raíces de clavel (Dianthus caryophyllus L.). Así mismo, se determinaron los niveles de actividad de las mismas. Estos niveles se analizaron en diferentes espacios celulares: en el fluido intercelular que hace parte del apoplasto, en el simplasto y en el tejido total de las raíces de clavel (apoplasto y simplasto). Para extraer el fluido intercelular, se ensayaron dos metodologías. Para obtener el contenido intracelular (simplasto) y el extracto total (apoplasto y simplasto) en raíces de clavel se ensayaron tres metodologías que utilizaban como solución i) extractante buffer fosfato, ii) buffer fosfato con PVPP y iii) lavados con acetona a las raíces de clavel, antes de la extracción con buffer fosfatos. Los resultados mostraron el efecto de las diferentes soluciones en las actividades enzimáticas y en el contenido de proteína. Se propuso una de estas metodologías para extraer las cuatro enzimas en un único paso y realizar análisis comparativo de actividad enzimática.

The presence of some enzymes related to cell wall (polygalacturonase, the pectate lyase, protease and xylanase) in carnation (Dianthus caryophyllus L.) roots as well as the activity levels were determined. These levels were analyzed in different cellular places: the intercellular fluid that is part of the apoplast, the symplast, and the total level (apoplast and symplast) in carnation roots. Two methods were tested to extract the intercellular fluid. To obtain the intracellular content (symplast) and total extract (apoplast+symplast), three methods were tested, using as extracting solution i) phosphate buffer, ii) phosphate buffer + PVPP, iii) before the extraction with phosphate buffer, the carnation roots were washed with acetone. The results showed the effect of different extracting solutions in the enzymatic activities and in the protein content. A new only one step method is proposed to extract the four enzymes and make the comparative analysis of enzymatic activity.

No presente trabalho foi evidenciada a presença de algumas enzimas relacionadas com a parede celular vegetal: poligalacturonasa, pectato liasa, proteasa e xilanasa e se determinaram seus níveis de atividade, em raízes de cravo (Dianthus caryophyllus L.). Os níveis se analisaram em diferentes espaços celulares: no fluido intercelular que faz parte do apoplasto, no simplasto e no tecido total das raízes de cravo (apoplasto e simplasto). Foram avaliadas duas metodologias para extrair o fluido intercelular. Para obter o conteúdo intracelular (simplasto) e o extrato total (apoplasto e simplasto) se avaliaram três metodologias que utilizavam como solução extratora i) buffer fosfato, ii) buffer fosfato com PVPP e iii) lavados com acetona às raízes de cravo, antes da extração com buffer fosfato. Os resultados mostraram o efeito das diferentes soluciones nas atividades enzimáticas e no conteúdo de proteína. Se propõem uma de estas metodologias para extrair as quatro enzimas num único passo e realizar a analise comparativa da atividade enzimática.

Efecto del anegamiento en la actividad de la enzima alcohol deshidrogenasa en raíces de maracuyá amarillo Passiflora Edulis var. Flavicarpa / Effect of waterlogging on the alcohol dehydrogenase activity in yellow passion fruit roots Passiflora Edulis var. Flavicarpa

Bajo entornos naturales, las plantas de maracuyá amarillo frecuentemente se enfrentan a condiciones de anegamiento, un factor limitante para la producción generalizada de su cultivo, especialmente en tierras bajas inundables. El presente estudio se encargó de identificar la activación de la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) durante la inundación, como un posible mecanismo de sobrevivencia de plántulas de maracuyá amarillo. Se evaluó la actividad de la enzima ADH durante 0, 1, 3, 7, 9 y 14 días de tratamiento con inundación y sin inundación, en raíces de plántulas de maracuyá amarillo de tres meses y medio de germinadas. En las raíces de plántulas de maracuyá amarillo en condiciones de inundación, la actividad de la enzima ADH presentó un aumento significativo respecto a las plántulas en condiciones normales de riego (sin inundación). Esto sugiere que la actividad de la enzima alcohol deshidrogenasa, implicada en el metabolismo anaeróbico, es un posible mecanismo de supervivencia al anegamiento de plántulas de maracuyá amarillo en periodos cortos de inundación.

Under natural environments, yellow passion fruit plants often face flooded conditions as a limiting factor for the widespread production of the crop, especially in flood-prone lowlands. This study was carried out to identify the activation of the enzyme alcohol dehydrogenase (ADH) during the flood, as a possible mechanism for the survival of yellow passion fruit seedlings. The activity of the ADH enzyme was assessed on days 0, 1, 3, 7, 9 and 14, with and without flooding, on rooted yellow passion fruit seedlings germinated during three and a half months. In the roots of the yellow passion fruit seedlings in flood conditions, the activity of the ADH enzyme showed a significant increase compared to seedlings under normal irrigation (no flooding). These results suggest that the activity of the alcohol dehydrogenase enzyme involved in anaerobic metabolism, is a possible mechanism for survival of yellow passion fruit seedlings waterlogged in short periods of flooding.

Isolation and characterization of infectious Vibrio sinaloensis strainsfrom the Pacific shrimp Litopenaeus vannamei (Decapoda: Penaeidae)

Infectious diseases especially those caused by bacterial and viral pathogens are serious loss factors in shrimp farming. In this study, bacteria were isolated from the gut and hepatopancreas of stressed shrimps obtained from a commercial farm. The isolates were screened on Thiosulfate citrate bile salt sucrose (TCBS) agar plates for the selection of Vibrio species. Presumptive vibrios were characterized through tests for hemolytic and enzymatic activity, hydrophobicity, growth and molecular identification. Three experimental infections were conducted in order to confirm the pathogenicity of selected bacterial strains VHPC18, VHPC23, VHPC24 and VIC30. In the third experimental challenge the LD50 was obtained, it lasted 10 days with 10 shrimp, weighing 6.9±1.1g, per tank. The treatments in triplicate were: (1) saline solution (control group); (2) 2×10(5)CFU/shrimp; (3) 4×10(5)CFU/shrimp; (4) 2×10(6)CFU/shrimp; (5) 4×10(6)CFU/shrimp, and (6) 8×10(6)CFU/shrimp. In all challenges, water parameters measured during the experimental period remained within optimum ranges. Pathogenicity tests confirmed that the mixture of four vibrio isolates, identified as Vibrio sinaloensis, was virulent for L. vannamei. The LD50 value was 1.178×10(5)CFU/g body weight. V. sinaloensis may act as opportunistic pathogens for cultured L. vannamei. Rev. Biol. Trop. 60 (2): 567-576. Epub 2012 June 01.

Las enfermedades de etiología infecciosa, especialmente las causadas por patógenos bacterianos y virales ocasionan graves pérdidas en el cultivo de camarón blanco Litopenaeus vannamei. En este estudio se caracterizo: la actividad enzimática y hemolítica; hidrofobicidad; crecimiento e identificación molecular de vibrios aislados del intestino y hepatopancreas de camarones estresados, obtenidos de una granja comercial, en medio Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa. Además, se realizaron tres infecciones experimentales para confirmar la patogenicidad de las cepas bacterianas seleccionadas VHPC18, VHPC23, VHPC24 y VIC30. En la tercera infección experimental se obtuvo la LD50, el reto duro 10 días, con 10 camarones por tanque con un peso de 6.9±1.1g. Los tratamientos se realizaron por triplicado: (1) solución salina (grupo control); (2) 2×10(5)UFC/camarón; (3) 4×10(5)UFC/camarón; (4) 2×10(6)UFC/camarón; (5) 4×10(6)UFC/camarón y (6) 8×10(6)UFC/camarón. En todos los retos, los parámetros del agua permanecieron dentro de los intervalos óptimos. Las pruebas de patogenicidad confirmaron que la mezcla de cuatro aislados de Vibrio, identificados como Vibrio sinaloensis, fue virulenta para L. vannamei. El valor de la LD50 fue de 1.178×10(5)UFC/g de peso corporal. Los resultados permiten establecer que las cepas de V. sinaloensis pueden actuar como patógenos oportunistas en L. vannamei cultivado.

INMOVILIZACIÓN DE LIPASA de Candida antarctica SOBRE SOPORTES DE QUITOSANO-GELATINA / IMMOBILIZATION OF LIPASE FROM Candida antarctica ON CHITOSAN-GELATIN SUPPORTS / IMOBILIZAÇÃO DA LIPASE DE Candida antarctica EM SUPORTES DE QUITOSANA-GELATINA

Se preparó una serie de películas de quitosano-gelatina variando la relación de los constituyentes, quitosano-gelatina entre 1:2, 1:5 y 1:10, con concentración total de biopolímeros entre 3,0%, 3,5%, 4,0% y pH de 5,5. Se deshidrataron los soportes por crioconcentración (congelaciones descongelaciones sucesivas) y secado convectivo con aire. La inmovilización de lipasa de Candida antarctica se realizó sobre un hidrogel entrecruzado iónicamente con quitosano por atrapamiento y por adsorción; los mejores resultados en cuanto a actividad enzimática y reutilización del soporte se obtuvieron con el método por atrapamiento. Se llevaron a cabo pruebas de caracterización fisicoquímica de los soportes, actividad del sistema biocatalítico y estabilidad.

A set of chitosan-gelatin films were prepared by varying the chitosan-gelatin ratio between 1:2, 1:5 and 1:10, with total concentration of biopolymers from 3,0% 3,5%, 4,0 and pH of 5,5. We carried out the dehydration of the supports through cryoconcentration (successive freeze thawing) and convective drying with air. Immobilization of lipase from Candida antarctica was performed on an ionically crosslinked hydrogel with chitosan by entrapment and adsorption, getting the best results in terms of enzymatic activity and reuse of the support with the entrapment method. Tests of physicochemical characterization of the supports, biocatalytic system activity and stability were carried out.

Uma serie de filmes de gelatina quitosana foi preparada variando a proporção dos componentes, a quitosana-gelatina entre 01:02, 01:05 e 01:10, com concentração total de biopolímeros de 3,0%, 3,5% 4,0% e pH de 5,5. Realizou-se a desidratação dos suportes por crioconcentração (ciclos sucessivos de descongelamento-congelamento) e secagem por convecção com o ar. A imobilização de lipase de Candida antarctica foi realizada em um hidrogel ionicamente entrecruzado com quitosana por adsorção e atrapamento, obtendo os melhores resultados em termos de atividade enzimática e reutilização do suporte com o método de atrapamento. Foram realizados testes de caracterização físico-química dos suportes, da atividade do sistema biocatalítico e da estabilidade.

Estudio del efecto inhibitorio de extractos de Salvia scutellarioides sobre la actividad de la enzima convertidora de angiotensina / Study of the inhibitory effect of Salvia scutellarioides extracts on the activity of the angiotensin-converting enzyme / Estudo do efeito inibitório de extratos de Salvia scutellarioides sobre a atividade da enzima conversora de angiotensina

Objetivo. Identificar los grupos de metabolitos secundarios de la Salvia scutellarioides presentes en la fracción que presenta un mayor efecto inhibitorio sobre la actividad de la enzima convertidora de angiotensina (ACE). Materiales y métodos. Se empleó material vegetal seco con el que inicialmente se prepararon extractos etanólicos, luego estos se concentraron y se separaron por cromatografía en columna en diferentes polaridades (éter de petróleo, diclorometano, éter etílico y etanol). Posteriormente se aisló tejido pulmonar de ratas Wistar, el cual fue disgregado y sometido a centrifugación para separar el material soluble. Se separaron las proteínas encontradas en el sobrenadante empleando una columna de Sephacryl; se realizó un pool con las fracciones que presentaron actividad frente al sustrato de la ACE Hippuril-L-histidyl-L-leucine. Con este extracto enzimático fue posible medir el efecto de los extractos vegetales obtenidos de la Salvia scutellarioides sobre la actividad de la ACE. Resultados. La fracción de acetato de etilo (T2) fue la que mostró un mayor efecto inhibitorio sobre la actividad de la ACE. Los metabolitos encontrados en la fracción de T2 fueron: taninos, glicosidos cardiotónicos, cumarinas y quinonas. Conclusión. Se determinó el efecto antihipertensivo para la especie en estudio, por medio de la inhibición de la actividad de la ACE; de igual manera se identificaron varios grupos de metabolitos secundarios presentes en el extracto de T2 que podrían ser los responsables de tal efecto.

Objective. To identify groups of secondary metabolites of Salvia scutellarioides present in the fraction with the greatest inhibitory effect on the activity of the angiotensin-converting enzyme (ACE). Materials and methods. Dry plant material was used to prepare ethanolic extracts that were then concentrated and separated by column chromatography using solvents of different polarity (petroleum ether, dichloromethane, diethyl ether and ethanol). Subsequently, lung tissue isolated from Wistar rats was broken and centrifuged in order to separate the soluble material. Proteins found in the supernatant were separated using a Sephacryl column; a pool was made with the fractions that showed activity with hippuryl-L-histidyl-L-leucine (HHL), the substrate of the ACE. This enzyme extract was used to measure the effect of plant extracts obtained from S. scutellarioides on the ACE activity. Results: The fraction of ethyl acetate (T2) showed a greater inhibitory effect on the ACE activity. Metabolites found in T2 fraction were: tannins, cardiac glycosides, coumarins, and quinones. Conclusion. An antihypertensive effect was found for the plant species Salvia scutellarioides by studying the inhibitory effect on the ACE activity. Several groups of secondary metabolites present in the T2 fraction were identified, which could be responsible for this effect.

Objetivo. Identificar os grupos de metabólitos secundários de Salvia scutellarioides presentes na fração que tem um maior efeito inibitório sobre a atividade da enzima conversora de angiotensina (ECA). Materiais e métodos. Foi utilizado material vegetal seco com o qual inicialmente prepararam-se os extratos etanólicos, depois, estes se concentraram e foram separados por cromatografia em coluna em diferentes polaridades (éter de petróleo, diclorometano, éter etílico e etanol). Posteriormente, foi isolado tecido pulmonar de ratos Wistar, o qual foi desagregado e centrifugado para separar o material solúvel. Foram separadas as proteínas presentes no sobrenadante utilizando uma coluna de Sephacryl; realizou-se um pool com as frações que apresentaram atividade contra o substrato da ACE Hippuril-L-histidil-L-leucine. Com este extrato enzimático foi possível medir o efeito de extratos vegetais obtidos da Salvia scutellarioides sobre a atividade da ACE. Resultados. A fração de acetato de etilo (T2) foi a que apresentou maior efeito inibitório na atividade da ACE. Os metabolitos encontrados na fração do T2 foram: taninos, glicosídeos cardiotónicos, cumarinas e quinonas. Conclusão. Foi determinado o efeito anti-hipertensivo para a espécie em estudo, através da inibição da atividade da ACE, também foram identificados vários grupos de metabólitos secundários presentes no extrato de T2 que poderiam ser responsáveis por este efeito.

Actividad enzimática de bacterias frecuentes en camarones (Litopenaeus schmitti), mejillones (Perna viridis) y calamares (Loligo plei) congelados producidos en Cumaná, Estado Sucre, Venezuela / Enzymatic activity of frequent bacteria in frozen shrimps (Litopenaeus schmitti), mussels (Perna viridis) and squids (Loligo plei) produced in Cumaná, Estado Sucre, Venezuela

Se evaluó la calidad microbiológica de camarones (Litopenaeus schmitti), mejillones (Perna viridis) y calamares (Loligo plei) congelados producidos en Cumaná, Estado Sucre, Venezuela. Para ello, se recolectaron 60 muestras divididas en dos marcas comerciales distintas: 20 muestras correspondieron a camarones (Litopenaeus schmitti), 20 a mejillones (Perna viridis) y 20 a calamares (Loligo plei). Se determinaron las Unidades Formadoras de Colonia por gramo (UFC/g) aplicando el método de las diluciones decimales seriadas. Posteriormente, se aislaron e identificaron las especies bacterianas mesófilas y psicrotróficas presentes. Se estableció la frecuencia de los microorganismos aislados y finalmente fue determinada la actividad enzimática de los microorganismos aislados con mayor frecuencia. Los recuentos promedio de las UFC/g de las bacterias en las muestras de camarones se ajustan a la Normativa para ellos; sin embargo, los recuentos de las UFC/g en las muestras de mejillones y calamares superaron los límites establecidos internacionalmente. La mayor frecuencia de bacterias mesófilas y psicrotróficas aisladas de las muestras de camarones (Litopenaeus schmitti) fue para Acinetobacter (65 % y 85 %, respectivamente); en las muestras de mejillones (Perna viridis) el género mesófilo más aislado fue Micrococcus (65 %) y el género psicrotrófico aislado con mayor frecuencia fue Acinetobacter (50 %). En las muestras de calamares (Loligo plei), Micrococcus fue la bacteria mesófila aislada con mayor frecuencia, mientras que Achromobacter resultó la más aislada dentro de las bacterias psicrotróficas (55 %). Las enzimas producidas por las bacterias aisladas con mayor frecuencia fueron: fosfohidrolasas, esterasas, esterasa-lipasa. Los microorganismos que presentaron mayor actividad enzimática fueron: Aeromonas salmonicida y Micrococcus nishinomiyaensis.

The microbiological quality of frozen shrimps (Litopenaeus schmitti), mussels (Perna viridis) and squids (Loligo plei) produced in Cumana, Estado Sucre, Venezuela. For this, 60 samples from two different commercial labels were collected corresponding to: 20 samples of shrimps (Litopenaeus schmitti), 20 of mussels (Perna viridis) and 20 of squids (Loligo plei). The Colony Forming Units per gram (CFU/g) were determined through the serial decimal dilution method. Later, mesophil and psychotrophic bacterial species present were isolated and identified. The frequency of the isolated microorganisms was established and finally the enzymatic activity of the most frequent microorganisms isolated was determined. The mean CFU/g and bacterial counts in the prawn samples correspond to those previously established; nevertheless, the CFU/g counts in the mussel and squid samples were higher than internationally established limits. The highest frequency of mesophil and psychotrophic bacteria isolated from shrimps samples (Litopenaeus schmitti) corresponded to Acinetobacter (65% and 85% respectively); in the mussel samples (Perna viridis) the mesophil genus most frequently isolated was Micrococcus (65%) and the psychotrophic genus most frequently isolated was Acinetobacter (50%). In the squid (Loligo plei) samples, the mesophil bacterium most frequently isolated was Micrococcus, while Achromobacter turned out to be the most frequently isolated within the psychotrophic bacteria (55%). The enzymes produced by the most frequently isolated bacteria were: phosphohydrolases, stereases, and estero-lipases. The microorganisms that showed greatest enzymatic activity were: Aeromonas salmonicida and Micrococcus nishinomiyaensis.