Effects of sodium intake, age, gender, blood sampling time on distribution of plasma aldosterone, renin activity, deoxycorticosterone, cortisol, cortisone, and 24 h urinary aldosterone levels in normotensive individuals based on LC-MS/MS.

PURPOSE: This study aims to analyze the distribution of plasma aldosterone, renin activity, deoxycorticosterone (DOC), cortisol, cortisone, and 24 h urinary aldosterone (24 h-uAld) levels based on liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method. MATERIALS AND METHODS: Plasma and 24 h urine were collected from 129 healthy volunteers in Northeast China. The effect of sodium intake, age, gender, blood sampling time on plasma aldosterone concentration (PAC), plasma renin activity (PRA), PAC to PRA ratio (ARR), DOC, cortisol, cortisone, cortisol to cortisone ratio, and 24 h-uAld were investigated by nonparametric test, multiple linear regression and Harris-Boyd's standard deviate test. RESULTS: There was no significant difference observed in 24 h-uAld, PAC (AM), PRA(AM), ARR (AM), DOC (AM), cortisol (AM), cortisone (AM), and cortisol to cortisone (AM) between high and low sodium intake group. Significant differences were observed between morning and afternoon sampling groups in terms of PAC, ARR, DOC, cortisol, and cortisone. Reference intervals (RIs) of 24 h-uAld, PAC (AM) were recommended to be partitioned by gender. RI of PRA was recommended age stratification. CONCLUSION: We recommend that the same reference interval could be used regardless of sodium intake. Gender is the main influence factor for 24 h-uAld, PAC, and ARR. Age is key influence factor for PRA.

LC-HRMS and GC-MS Profiling of Urine Free Cortisol, Cortisone, 6Β-, and 18-Hydroxycortisol for the Evaluation of Glucocorticoid and Mineralocorticoid Disorders.

INTRODUCTION: Urine free cortisol measurements are routinely performed to evaluate hypercortisolism. Despite their analytical inaccuracy, immunoassay-based methods are frequently used. Advances in liquid chromatography-high-resolution mass spectrometry (LC-HRMS) facilitate the incorporation of powerful diagnostic tools into clinical laboratories. In addition to its high analytical specificity and simultaneous analysis of different metabolites, accurate mass measurement allows for untargeted compound identification, which may help to identify clinically relevant metabolites or drugs. METHODS: The present study aimed to validate a simple routine LC-HRMS method to quantify cortisol, cortisone, 6ß-hydroxycortisol, and 18-hydroxycortisol simultaneously in human urine. Additionally, the study also validated a GC-MS method for the same steroids, evaluated their cross-reactivity with commercial cortisol immunoassays, and quantified the 24 h urine excretion in patients under clinical suspicion or follow-up for hypercortisolism. RESULTS: The LC-HRMS method involved liquid-liquid extraction using dichloromethane, micro-LC for chromatographic separation and detection using the accurate masses of the steroids, and simultaneous high-resolution full scan acquisition. The method presented acceptable linearity, precision, and accuracy. Significant interference from 6ß-hydroxycortisol and cortisone was demonstrated in the cortisol immunoassays, which impacted their reliability in the follow-up of patients with hypercortisolism and significant changes in these cortisol metabolites (i.e., due to drug-induced changes in CYP3A4 activity). CONCLUSION: A rapid and accurate routine LC-HRMS method was validated, which is useful for the evaluation of hypercortisolism and other disorders of glucocorticoid and mineralocorticoid metabolism.

Dosagem de cortisol e cortisona livres urinários empregando cromatografia líquida associada a espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS) / Measurement of free urinary cortisol and cortisone using liquid chromatography associated with tandem mass spectrometry method

A dosagem de cortisol livre na urina (CLU) é um método útil na triagem de pacientes suspeitos de síndrome de Cushing. Os imunoensaios atuais apresentam limitacões que dificultam sua aplicacão e a comparacão de resultados por diferentes ensaios. No presente método para dosagem de cortisol e cortisona livres urinários, baseado em cromatografia líquida com deteccão por espectrômetro de massa em tandem (LC-MS/MS), uma alíquota de urina 24h (200æL) é misturada com solucão contendo quantidade conhecida de cortisol deuterado e extraída on-line em fase sólida (C18). O eluato é transferido para uma segunda coluna C18 (Phenomenex Luna, 3æ, de 50 x 2mm), e o eluato obtido em modo isocrático é aplicado diretamente no MS/MS modelo Quattro Micro, operando no modo positivo de ionizacão química a pressão atmosférica (APCI). Todo o processo é automatizado e a quantificacão é feita por diluicão isotópica com base nas razões das áreas dos picos dos analitos e do padrão interno deuterado. O estudo de especificidade mostrou que nenhum esteróide testado apresenta reatividade cruzada superior a 1 por cento com cortisol ou cortisona. A sensibilidade funcional é <1æg/L para os dois esteróides, e o CV interensaio <8 por cento. Os estudos de recuperacão e de linearidade foram satisfatórios, e a comparacão entre os resultados obtidos para cortisol em 98 amostras de rotina, pelo ensaio em estudo e por um RIE, mostraram correlacão de r= 0,838, sendo os valores obtidos por LC-MS/MS significativamente mais baixos (medianas de 22,0 e 49,4æg/24h, respectivamente) (P<0,0001). Os valores de referência para cortisol foram definidos entre 11 e 43æg/24h, compatíveis com métodos semelhantes recentemente descritos. A dosagem concomitante de cortisona livre urinária permite o estudo da atividade da enzima 11beta-HSD2 e a pesquisa da síndrome do excesso aparente de mineralocorticóides. O método descrito representa a primeira descricão, em nosso meio, de uma nova geracão de métodos para a medida de esteróides hormonais, baseados em processos preparativos automatizados e leitura por espectrometria de massa em tandem.