Análise comparativa da estabilidade do DNA de Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) sob diferentes métodos de preservação para uso em RAPD-PCR / Comparative analysis of the stability of DNA of Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) under different methods of preservation for use in RAPD-PCR

ABSTRACT

The appropriate preservation of the DNA of a certain organism is important for successful application of molecular techniques like RAPD-PCR. This study was designed to compare simple methods of preservation of specimens of Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera Cicadellidae) with respect to quantity and quality of DNA for use in RAPD-PCR, after different storage periods. Eight methods were tested freezing (-20°C); ethyl alcohol 70 percent (-20°C and room temperature); absolute ethyl alcohol (-20°C and room temperature); air-dry; and preservation in extraction buffer (whole and homogenized insect). At intervals of 10 to 30 days, insect DNA was extracted, quantified and amplified through RAPD-PCR using primer OPA-04. The quality of extracted DNA was observed on 0.8 percent agarose gel. After 210 days of preservation, freezing (-20°C) showed to be the best method. Satisfactory quantities of DNA were also obtained from insects conserved in absolute ethyl alcohol (-20°C), ethyl alcohol 70 percent (-20°C) and extraction buffer (whole and homogenized insect). Insects conserved in absolute ethyl alcohol (room temperature), ethyl alcohol 70 percent (room temperature) and air-dry conditions were inappropriate for RAPD-PCR studies after 120, 60 and 10 days of storage, respectively.

RESUMO

A preservação adequada do DNA de um determinado organismo é fundamental para o sucesso no uso de técnicas moleculares como RAPD-PCR. O objetivo deste trabalho foi comparar métodos simples de preservação de espécimes de Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera Cicadellidae) quanto à quantidade e qualidade do DNA para uso em RAPD-PCR, após períodos sucessivos de armazenamento. Avaliaram-se oito métodos: congelamento (-20°C); álcool etílico 70 por cento (-20°C e temperatura ambiente); álcool etílico absoluto (-20°C e temperatura ambiente); secagem ao ar; e preservação em tampão de extração (inseto inteiro e macerado). A intervalos de 10-30 dias, o DNA foi extraído, quantificado e amplificado via RAPD-PCR pelo oligonucleotídeo OPA-04. A qualidade do DNA extraído foi observada em gel de agarose 0,8 por cento. Após 210 dias de armazenamento, o congelamento (-20°C) mostrou ser a melhor técnica. Quantidades satisfatórias de DNA também foram obtidas dos insetos conservados em álcool etílico absoluto (-20°C), álcool etílico 70 por cento (-20°C) e tampão de extração (inseto inteiro e macerado). Insetos conservados em álcool etílico absoluto (temperatura ambiente), em álcool etílico 70 por cento (temperatura ambiente) e secos ao ar mostraram-se impróprios para estudos com RAPD-PCR após 120, 60 e 10 dias de armazenamento, respectivamente.