Diagnóstico molecular de Ehrlichia canis em cães de Goiânia, Brasil / Molecular diagnostics of Ehrlichia canis in dogs from Goiânia state of Goiás, Brazil

RESUMO

Ehrlichia canis é um parasito bacteriano intracelular obrigatório, agente da Erliquiose Monocítica Canina. O método de diagnóstico laboratorial de rotina é realizado pela demonstração microscópica direta das inclusões intraleucocitárias. Mais recentemente a reação em cadeia da polimerase (PCR)foi introduzida como um método para aumentar a sensibilidade e a especificidade do diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi pesquisar a presença de Ehrlichia em cães na cidade de Goiânia, Goiás, por métodos de diagnóstico molecular. Para o estudo, foram obtidas 40 amostras de sanguede cães sintomáticos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Goiás. Todas as amostras, após a extração de DNA, foram testadas pela PCR empregando-se oligonucleotídeos gênero-específicos e, posteriormente, espécie-específicos para o gene 16S rRNA. Em seguida, foirealizada a purificação do produto de PCR espécie-específico para a realização de sequenciamento. Destas, 17 mostraram-se PCR positivas tanto nas reações para gênero quanto para a espécie E. canis. Os produtos de PCR foram sequenciados e as sequências com melhor qualidade (n igual a 5)foram escolhidas para estudos subsequentes. A análise de similaridade pelo BLASTn demonstroucorrespondência com a espécie Ehrlichia canis. Graças à utilização do programa Mega4 foi possível verificar que as amostras de E. canis provenientes de cães da cidade de Goiânia apresentam elevado grau de similaridade molecular com os isolados de referência para a mesma subespécie de outras regiões do Brasil e do mundo. Amostras de E. canis de cães avaliados neste estudo formam grupo filogenético bem definido, juntamente com amostras de referência de E. canis de diferentes regiõesgeográficas. As sequências obtidas foram depositadas no GenBank como sequências parciais do gene 16S rRNA de E. canis, procedentes de Goiânia.