Your browser doesn't support javascript.
loading
Expression, purification of human vasostatin120-180 in Escherichia coli, and its anti-angiogenic characterization.
Sun, Qi-Ming; Cao, Lin; Fang, Lei; Chen, Cheng; Dai, Jun; Chen, Li-Li; Hua, Zi-Chun.
Afiliação
  • Sun QM; The State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, Department of Biochemistry, College of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing 210093, PR China.
Protein Expr Purif ; 39(2): 288-95, 2005 Feb.
Article em En | MEDLINE | ID: mdl-15642481
According to codon preference of Escherichia coli, the optimized coding sequence of human vasostatin120-180aa (VAS) was obtained by chemical synthesis and molecular cloning methods. Using PCR and enzyme digestion, the full encoding sequence for VAS was cloned into the E. coli expression vector pALEX and expressed as a GST fusion protein in BL21 (DE3) strain. GST-VAS protein approximately accounted for 45% of the total bacterial proteins. Most of target protein existed in inclusion body. To improve the solubility of GST-VAS, the contribution of low temperature and molecular chaperone co-expression to the solubility of GST-VAS was tested. The results showed that co-expression with chaperons, TF and GroES/GroEL, and low expression temperature cooperatively improved the solubility of GST-VAS from 10 to 85%, and the yield of soluble GST-VAS was sixfold increased. When purified by GST affinity chromatography, 50 mg GST-VAS was obtained with purity over 85% from 1 L culture. Intact VAS was released by enterokinase digestion and further purified by Sephadex G50 gel filtration chromatography. About 7.2 mg intact homogeneous VAS protein was finally produced from 1L bacterial culture. The identity of GST-VAS and VAS was validated by Western blotting analysis. Recombinant VAS protein displayed distinct inhibition of endothelial cell proliferation and anti-angiogenic activity by chick embryo chorioallantoic membrane assay.
Assuntos
Inibidores da Angiogênese/farmacologia; Proteínas de Ligação ao Cálcio/isolamento & purificação; Proteínas de Ligação ao Cálcio/metabolismo; Neovascularização Fisiológica/efeitos dos fármacos; Fragmentos de Peptídeos/isolamento & purificação; Fragmentos de Peptídeos/metabolismo; Ribonucleoproteínas/isolamento & purificação; Ribonucleoproteínas/metabolismo; Animais; Western Blotting; Proteínas de Ligação ao Cálcio/genética; Proteínas de Ligação ao Cálcio/farmacologia; Calreticulina; Proliferação de Células/efeitos dos fármacos; Células Cultivadas; Chaperonina 10/genética; Chaperonina 10/metabolismo; Chaperonina 60/genética; Chaperonina 60/metabolismo; Embrião de Galinha; Membrana Corioalantoide/efeitos dos fármacos; Clonagem Molecular; Relação Dose-Resposta a Droga; Eletroforese em Gel de Poliacrilamida; Endotélio Vascular/efeitos dos fármacos; Escherichia coli/genética; Proteínas de Escherichia coli/metabolismo; Fibroblastos/metabolismo; Expressão Gênica; Glutationa Transferase/metabolismo; Humanos; Isopropiltiogalactosídeo/farmacologia; Camundongos; Células NIH 3T3; Fragmentos de Peptídeos/genética; Fragmentos de Peptídeos/farmacologia; Peptidilprolil Isomerase/metabolismo; Plasmídeos; Regiões Promotoras Genéticas; Proteínas Recombinantes/isolamento & purificação; Proteínas Recombinantes/metabolismo; Proteínas Recombinantes/farmacologia; Ribonucleoproteínas/genética; Ribonucleoproteínas/farmacologia; Solubilidade; Temperatura; Veias Umbilicais/citologia
Buscar no Google
Base de dados: MEDLINE Assunto principal: Fragmentos de Peptídeos / Ribonucleoproteínas / Proteínas de Ligação ao Cálcio / Neovascularização Fisiológica / Inibidores da Angiogênese Idioma: En Ano de publicação: 2005 Tipo de documento: Article
Buscar no Google
Base de dados: MEDLINE Assunto principal: Fragmentos de Peptídeos / Ribonucleoproteínas / Proteínas de Ligação ao Cálcio / Neovascularização Fisiológica / Inibidores da Angiogênese Idioma: En Ano de publicação: 2005 Tipo de documento: Article