Characterization of Virulent netB+/tpeL+Clostridium perfringens Strains from Necrotic Enteritis-Affected Broiler Chicken Farms.

RESUMEN

Caracterización de cepas virulentas de Clostridium perfringens netB+/tpeL+ de granjas de pollos de engorde con enteritis necrótica. Clostridium perfringens (CP) tipo A y los tipos nuevos G son los factores etiológicos clave en la inducción de enteritis necrótica (NE), una enfermedad entérica importante que es responsable de pérdidas anuales de $6 mil millones en la industria avícola mundial. Se ha determinado que varios genes de toxinas de C. perfringens son críticos en la patogénesis de la enteritis necrótica en pollos, pero se dispone de información limitada sobre el gene tpeL de la toxina letal de C. perfringens. En este estudio, se caracterizaron microbiológicamente y molecularmente 19 cepas de C. perfringens aisladas de granjas avícolas afectadas por enteritis necrótica y se evaluaron en su patogenicidad en pollos de engorde comerciales. La tipificación de toxinas por PCR reveló que todas las cepas analizadas fueron positivas para el gene de la toxina netB, pero solo cinco fueron positivas para el gene de la toxina tpeL (LLY-TpeL 13, -TpeL 15, -TpeL 17, -TpeL 18, y -TpeL 19, simplificado como TpeL 13, TpeL 15, TpeL 17, TpeL 18 y TpeL 19). Los altos niveles de proteínas TpeL se detectaron en el sobrenadante del cultivo concentrado de las cepas TpeL 13, 15, 17 y 19 mediante inmunoelectrotransferencia tipo Western. La PCR cuantitativa mostró que las cepas TpeL 13, 15, 17, 18 y 19 albergaban un alto número de copias de los genes tpeL, mientras que TpeL 18 mostró el mayor número de copias del gene tpeL entre todas las cepas de C. perfringens analizadas cuando se normalizó con los números de copias del gene 16S rRNA como un marcador genético constitutivo. La prueba in vivo de desafío de enteritis necrótica utilizando múltiples inoculaciones orales de C. perfringens combinadas con una dieta alta en proteínas mostró que TpeL 17 fue la más virulenta en la inducción de lesiones típicas de enteritis necrótica, seguida de TpeL 19 como la siguiente más virulenta cuando se inoculó en pollos de engorde comerciales. La infección con TpeL 17 redujo significativamente la tasa de crecimiento, como lo demuestra la reducción del porcentaje de aumento de peso corporal relativo en el día cinco posterior a la infección. La disponibilidad de las cepas netB+ tpeL+ de C. perfringens virulentas es esencial para el desarrollo de un modelo de desafío enteritis necrótica únicamente con C. perfringens que podría proporcionar herramientas significativas para comprender la patogénesis de C. perfringens y para el desarrollo de alternativas a los antibióticos.