A new experimental model to study shrimp allergy.

Shrimp is among the most sensitizing food allergens and has been associated with many anaphylaxis reactions. However, there is still a shortage of studies that enable a systematic understanding of this disease and the investigation of new therapeutic approaches. This study aimed to develop a new experimental model of shrimp allergy that could enable the evaluation of new prophylactic treatments. BALB/c mice were subcutaneously sensitized with 100 µg of shrimp proteins of Litopenaeus vannamei adsorbed in 1 mg of aluminum hydroxide on day 0, and a booster (100 µg of shrimp proteins only) on day 14. The oral challenge protocol was based on the addition of 5 mg/ml of shrimp proteins to water from day 21 to day 35. Analysis of shrimp extract content detected at least 4 of the major allergens reported to L. vannamei. In response to the sensitization, allergic mice showed significantly enhanced IL-4 and IL-10 production in restimulated cervical draining lymph node cells. High detection of serum anti-shrimp IgE and IgG1 suggested the development of allergies to shrimp while Passive Cutaneous Anaphylaxis assay revealed an IgE-mediated response. Immunoblotting analysis revealed that Allergic mice developed antibodies to multiple antigens present in the shrimp extract. These observations were supported by the detection of anti-shrimp IgA production in intestinal lavage samples and morphometric intestinal mucosal changes. Therefore, this experimental protocol can be a tool to evaluate prophylactic and therapeutic approaches.

Development and in vitro characterization of polymeric nanoparticles containing recombinant adrenomedullin-2 intended for therapeutic angiogenesis.

Cardiovascular diseases (CVD) are the leading cause of death worldwide. Growth factor therapy has emerged as novel therapeutic strategy under investigation for CVD. In this sense, adrenomedullin-2 (ADM-2) has been recently identified as a new angiogenic factor able to regulate the regional blood flow and cardiovascular function. However, the therapeutic value of ADM-2 is limited by its short biological half-life and low plasma stability. Poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) micro- and nanoparticles have been investigated as growth factor delivery systems for cardiac repair. In this study, we aimed to develop PLGA nanoparticles containing ADM-2 intended for therapeutic angiogenesis. PLGA nanoparticles containing ADM-2 were prepared by a double emulsion modified method, resulting in 300 nm-sized stable particles with zeta potential around - 30 mV. Electron microscopy analysis by SEM and TEM revealed spherical particles with a smooth surface. High encapsulation efficiency was reached (ca.70%), as quantified by ELISA. ADM-2 associated to polymer nanoparticles was also determined by EDS elemental composition analysis, SDS-PAGE and LC-MS/MS for peptide identification. In vitro release assays showed the sustained release of ADM-2 from polymer nanoparticles for 21 days. Cell viability experiments were performed in J774 macrophages and H9c2 cardiomyocyte cells, about which PLGA nanoparticles loaded with ADM-2 did not cause toxicity in the range 0.01-1 mg/ml. Of note, encapsulated ADM-2 significantly induced cell proliferation in EA.hy926 endothelial cells, indicating the ADM-2 bioactivity was preserved after the encapsulation process. Collectively, these results demonstrate the feasibility of using PLGA nanoparticles as delivery systems for the angiogenic peptide ADM-2, which could represent a novel approach for therapeutic angiogenesis in CVD using growth factor therapy.

Avaliação do papel protetor de histonas nucleossomais de Leishmania como estratégia vacinal contra a leishmaniose cutânea experimental causada por L. braziliensis

INTODUÇÃO: A vacinação é uma das intervenções médicas mais importantes já implementadas. Apesar de todos os avanços, ainda existem muitas doenças sem vacinas disponíveis. Entre estas doenças, pode-se destacar a leishmaniose. Esta é uma doença parasitária que apresenta grande impacto na saúde pública. Existe um consenso que a indução de uma forte resposta imune celular seja protetora para leishmaniose. Dentre as novas plataformas para apresentar antígenos e induzir esta resposta podemos destacar novas formas de delivery e os adjuvantes. Neste trabalho, foram abordadas três estratégias visando gerar conhecimentos sobre o desenvolvimento de uma vacina contra este parasito. Primeiramente, foi avaliado o efeito adjuvante de nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) catiônicas e aniônicas sobre histonas nucleossomais de L. infantum em células dendríticas (DC) murinas. Posteriormente, foi avaliado o efeito protetor destas histonas nucleossomais como antígenos vacinais em associação com CpG ODN, bem como de parasitos nocautes, ambos utilizando o modelo murino cutâneo de L. braziliensis. OBJETIVO: Avaliar o papel protetor de histonas nucleossomais (H2A, H2B, H3 e H4) de Leishmania como estratégia vacinal contra a leishmaniose cutânea experimental causada por L. braziliensis. MATERIAIS E MÉTODOS: As NLS catiônicas e aniônicas foram preparadas pelo método de dupla emulsão, utilizando Precirol ATO 5 como um lipídio, e quitosana a fase aquosa externa para obter NLS catiônicas. As partículas foram analisadas por tamanho, índice de polidispersão (PdI) e potencial zeta por espalhamento dinâmico de luz. Em seguida, a captação de NLS por DC e ativação delas foi avaliada por microscopia confocal e citometria de fluxo, respectivamente. Para os ensaios de imunização e desafio foi utilizado o modelo de infecção de orelha em BALB/C. Foram realizadas três imunizações com histonas nucleossomais acompanhadas de CpG, ou uma imunização com L. infantum nocaute para o gene LPG2 (Li \0394lpg2). Após o desafio com L. braziliensis o curso da doença foi avaliado medindo o tamanho da lesão, e decorridas 10 semanas do desafio, foi avaliada a carga parasitária, a resposta imune celular e humoral. RESULTADOS: Foi possível padronizar formulações de nanopartículas negativas e positivas. Estas apresentaram tamanhos médios de 260 e 340 nm, respectivamente, cargas de -31 e +56 mV e índices de polidispersão de 0,2 e 0,4. Em seguida, a avaliação da captação por DC demonstrou uma baixa taxa de internalização. Além disto, não foi possível notar diferenças nos marcadores de ativação celular após exposição das DC às NLS. Ensaios de imunização e desafio revelaram uma redução significativa do tamanho de lesão apenas no grupo imunizado com o parasito nocaute Li \0394lpg2. Também houve uma redução da carga parasitária no linfonodo em todos os grupos quando comparados ao grupo Salina. A análise da resposta humoral revelou razões equilibradas IgG2a/IgG1 para os grupos salina e histona + CpG contra antígenos solúveis de Leishmania (SLA), e uma resposta de perfil mais Th1 para o grupo Li \0394lpg2. Não houve diferença significativa na produção de citocinas por esplenócitos entre os grupos avaliados. CONCLUSÕES: Foi possível padronizar a produção de NLS positivas e negativas, porém essas não demonstraram um efeito adjuvante. A imunização com Li \0394lpg2 levou à proteção parcial contra o desafio por L. braziliensis e esta proteção pode estar associada a uma resposta de perfil Th1 contra SLA.