Suppression of TGF-ß/Smad2 signaling by GW788388 enhances DENV-2 clearance in macrophages.

Dengue fever, caused by the dengue virus (DENV-1, -2, -3, and -4), affects millions of people in the tropical and subtropical regions worldwide. Severe dengue is correlated with high viraemia and cytokine storm, such as high levels of transforming growth factor-ß1 (TGF-ß1) in the patient's serum. Here, the TGF-ß1 signaling was investigated in the context of in vitro viral clearance. Macrophages were infected with DENV-2 at MOI 5 and treated with the TGF-ß receptor 1 and 2 inhibitor, GW788388. TGF-ß1 expression, signal transduction and viral load were evaluated 48 h after DENV-2 infection by enzyme-linked immunoassay, immunofluorescence, and RT-qPCR assays. Total TGF-ß1 level was reduced in 15% after DENV-2 infection, but the secretion of its biologically active form increased threefold during infection, which was followed by the phosphorylation of Smad2 protein. Phosphorylation of Smad2 was reduced by treatment with GW788388 and it was correlated with reduced cytokine production. Importantly, treatment led to a dose-dependent reduction in viral load, ranging from 6.6 × 105 RNA copies/ml in untreated cultures to 2.3 × 103 RNA copies/ml in cultures treated with 2 ng/ml of GW788388. The anti-TGF-ß1 antibody treatment also induced a significant reduction in viral load to 1.6 × 103 RNA copies/ml. On the other hand, the addition of recombinant TGF-ß1 in infected cultures promoted an increase in viral load to 7.0 × 106 RNA copies/ml. These results support that TGF-ß1 plays a significant role in DENV-2 replication into macrophages and suggest that targeting TGF-ß1 may represent an alternative therapeutic strategy to be explored in dengue infection.

Structural investigation of C6/36 and Vero cell cultures infected with a Brazilian Zika virus.

Zika virus (ZIKV) is a member of the flavivirus genus, and its genome is approximately 10.8 kilobases of positive-strand RNA enclosed in a capsid and surrounded by a membrane. Studies on the replication dynamics of ZIKV are scarce, which limits the development of antiviral agents and vaccines directed against ZIKV. In this study, Aedes albopictus mosquito lineage cells (C6/36 cells) and African green monkey kidney epithelial cells (Vero cells) were inoculated with a ZIKV sample isolated from a Brazilian patient, and the infection was characterized by immunofluorescence staining, phase contrast light microscopy, transmission electron microscopy and real-time RT-PCR. The infection was observed in both cell lineages, and ZIKV particles were observed inside lysosomes, the rough endoplasmic reticulum and viroplasm-like structures. The susceptibility of C6/36 and Vero cells to ZIKV infection was demonstrated. Moreover, this study showed that part of the replicative cycle may occur within viroplasm-like structures, which has not been previously demonstrated in other flaviviruses.

Atividade de substâncias naturais e sintéticas sobre agentes infecciososTrypanosoma cruzi e vírus dengue

Agentes patológicos que causam importantes doenças em países tropicais e subtropicais como o Trypanosoma cruzi, causador da doença de Chagas, e o vírus dengue, agente etiológico da febre do dengue e seu agravo, representam um sério problema de saúde pública. Como o tratamento terapêutico específico para ambas às doenças é insatisfatório ou inexistente, é urgente a busca por novos compostos naturais ou sintéticos, visando o desenvolvimento de novos fármacos. Neste sentido, as esponjas marinhas representam importante fonte de substâncias bioativas, bem como espécies de plantas de diversos gêneros como o Isatis, que serão abordados no presente estudo que possui dois objetivos principais. No primeiro foi investigada a atividade de dois extratos, orgânico (E1) e aquoso (E2), da esponja marinha Amphimedon viridis sobre o T. cruzi. Os resultados demonstraram que E1 e E2 apresentam efeito lítico dose-dependente, sobre tripomastigotas sanguíneos, com valores de IC50 de 10,80 e 0,57 \03BCg/ml, respectivamente e sobre amastigotas intracelulares, com valores de IC50 de 44,85 \03BCg/ml (E1) e 21,37 \03BCg/ml (E2). Sobre a forma tripomastigota foi observado que a atividade de E2 está relacionada à perda do potencial de membrana mitocondrial em 78,7 % dos parasitos e morte por apoptose em 50,9 %parasitos. No segundo objetivo foi avaliada a atividade antiviral de 19 derivados triazólicos sintéticos, como os derivados de isatina, triazol-fosfonato e 2-nitroimidazol sobre o vírus dengue. A investigação do efeito dos compostos sobre a replicação viral foi avaliado através da dosagem da proteína NS1 do DENV no sobrenadante de células Vero infectadas com a multiplicidade de infecção (MOI) 10 do DENV-2 e tratadas por 48 e 120 h. O tratamento com os derivados de isatina por 48 h levou a uma redução de 12- 28% na liberação da proteína. Na tentativa de observar se este seria um efeito prolongado, a proteína foi dosada após 120 h de infecção e tratamento. Os resultados revelaram uma boa redução da NS1 no sobrenadante das culturas de 29-57% em comparação com as culturas não tratadas, confirmando um efeito prolongado e potencializado. Interessantemente, a redução de 58% de NS1 obtido pelo tratamento com a ribavirina, o fármaco antiviral de referência, foi semelhante ao observado com o tratamento dos compostos testados. Este estudo visa contribuir na busca de substâncias que possam ser fonte para o desenvolvimento de novos fármacos.