RESUMO
Persistent infection with high-risk human papillomavirus (HR-HPV) has been associated with cervical cancer. Developing assays for the identification of these viral types is of great importance for monitoring patients and controlling strategies. The development of the MCHA (microplate colorimetric hybridization assay), a PCR-based method for identifying six of the most common HR-HPV types (HPV 16, 18, 31, 33, 39 and 45) is described. The MCHA combines the amplification with the GP5+/GP6+ consensus primers followed by PCR reverse hybridization with specific probes and detection through a colorimetric assay. The performance of the MCHA was evaluated using 108 DNA samples typed previously by the PapilloCheck(®). The agreement between both methods was 69.4% for HPV 16; 79.1% for HPV 45; 82.4% for HPV 18; 93.6% for HPV 31; 87.9% for HPV 33, and 17.6% for HPV 39. The assay had higher sensitivity than the Papillocheck(®), particularly for identifying HPV 16 and 18. The MCHA seemed to be sensitive and specific for the identification of the most prevalent HPV types in invasive cervical cancer, HPV 16, 18, 45, 33 and 31. It requires low-cost reagents and common laboratory apparatus.
Assuntos
Técnicas de Genotipagem/métodos , Hibridização de Ácido Nucleico/métodos , Papillomaviridae/genética , Infecções por Papillomavirus/diagnóstico , Neoplasias do Colo do Útero/diagnóstico , Proteínas do Capsídeo/genética , Colorimetria , Feminino , Genótipo , Humanos , Proteínas Oncogênicas Virais/genética , Infecções por Papillomavirus/virologia , Valores de Referência , Reprodutibilidade dos Testes , Sensibilidade e Especificidade , Neoplasias do Colo do Útero/virologiaRESUMO
The aim of this work was to construct and test a plasmidial Internal Control (IC) to detect the inhibition in the PCR test for M. tuberculosis and also its contribution for a Public Health Laboratory routine. The IC was a 600-bp of DNA linked to a plasmid with the same primer sites, allowing the amplification with the 245-bp diagnostic fragment. The amplification of the positive samples rendered the IC and the diagnostic fragment; instead negative samples only showed the IC. A total of 149 tuberculosis samples were studied and introduced the IC to monitor. Results showed 3.3% of the samples without amplification of the IC, suggesting the inhibition. These samples showed results in accordance with the clinical results. The objective of the IC was to identify the false negative results.
A PCR do elemento IS6110 para diagnóstico da Tuberculose (TB) é muito utilizada em laboratórios de pesquisa. As suas limitações incluem, a inibição da enzima Taq DNA Polimerase. A seguir descrevemos a construção de um Controle Interno (IC) e ensaios de detecção da inibição da PCR para M. tuberculosis. O IC é um fragmento de DNA de 600 pb com os mesmos sítios de anelamento do primer, permitindo a amplificação com o fragmento diagnóstico de 245 pb. As amostras positivas fornecem um padrão de bandas referentes ao IC (664 pb) e ao fragmento diagnóstico (245 pb), e as amostras negativas apresentam apenas o fragmento correspondente ao IC. 149 amostras com diagnóstico conhecido foram analisadas por PCR introduzindo o IC em todas elas. Os resultados mostraram 3.3% de amostras sem amplificação do IC sugerindo inibição. Estas amostras quando testadas novamente mostraram resultados concordantes com os resultados clínicos. O objetivo do IC e identificar os falsos resultados negativos.
RESUMO
O objetivo do estudo foi descrever a prevalência do papilomavírus humano e da Chlamydia trachomatis entre mulheres assintomáticas na região Sul do Brasil. Estudo transversal, com 1.217 esfregaços cervicais testados para citologia, papilomavírus humano e Chlamydia trachomatis-DNA. Os resultados foram estimados por regressão logística múltipla. As prevalências de papilomavírus humano, Chlamydia trachomatis-DNA e coinfecção foram de 28,4, 12,6, e 6,5%, respectivamente. A infecção por papilomavírus humano foi associada com a raça não branca, estar empregada e ter parceiro sexual com história de condiloma genital. A infecção por Chlamydia trachomatis apresentou associação com o início da atividade sexual em idade ?20 anos e estar empregada. A coinfecção apresentou associação com ter ?3 parceiros sexuais. Anormalidades citológicas do colo versus papilomavírus humano e coinfecção apresentaram associação significativa (p>0,001). Elevadas prevalências de papilomavírus humano, Chlamydia trachomatis e coinfecção foram observadas em uma população de mulheres assintomáticas e os resultados indicam a importância de medidas de prevenção e promoção da saúde.
RESUMO
Introdução: a amplificação de ácido nucleico através da técnica de reaçã em cadeia da polimerase - PCR pode ser útil para o diagnóstico da tuberculose. O objetivo deste trabalho foi padronizar um método molecular para o diagnóstico da TB pulmonar. Material e métodos: iniciadores especificos foram usados para amplificação...