Accuracy of a dual path platform (DPP) assay for the rapid point-of-care diagnosis of human leptospirosis.

BACKGROUND: Diagnosis of leptospirosis by the gold standard serologic assay, the microscopic agglutination test (MAT), requires paired sera and is not widely available. We developed a rapid assay using immunodominant Leptospira immunoglobulin-like (Lig) proteins in a Dual Path Platform (DPP). This study aimed to evaluate the assay's diagnostic performance in the setting of urban transmission. METHODOLOGY: We determined test sensitivity using 446 acute and convalescent sera from MAT-confirmed case-patients with severe or mild leptospirosis in Brazil. We assessed test specificity using 677 sera from the following groups: healthy residents of a Brazilian slum with endemic transmission, febrile outpatients from the same slum, healthy blood donors, and patients with dengue, hepatitis A, and syphilis. Three operators independently interpreted visual results without knowing specimen status. RESULTS: The overall sensitivity for paired sera was 100% and 73% for severe and mild disease, respectively. In the acute phase, the assay achieved a sensitivity of 85% and 64% for severe and mild leptospirosis, respectively. Within seven days of illness onset, the assay achieved a sensitivity of 77% for severe disease and 60% for mild leptospirosis. Sensitivity of the DPP assay was similar to that for IgM-ELISA and increased with both duration of symptoms (chi-square regression P = 0.002) and agglutinating titer (Spearman ρ = 0.24, P<0.001). Specificity was ≥93% for dengue, hepatitis A, syphilis, febrile outpatients, and blood donors, while it was 86% for healthy slum residents. Inter-operator agreement ranged from very good to excellent (kappa: 0.82-0.94) and test-to-test reproducibility was also high (kappa: 0.89). CONCLUSIONS: The DPP assay performed acceptably well for diagnosis of severe acute clinical leptospirosis and can be easily implemented in hospitals and health posts where leptospirosis is a major public health problem. However, test accuracy may need improvement for mild disease and early stage leptospirosis, particularly in regions with high transmission.

Caracterização das leptospiras isoladas dos pacientes atendidos no Hospital Couto Maia / Characterization of isolated leptospires of patients seen in the hospital Couto Maia

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, com 1,2 milhões de casos registrados a cada ano. De 1996 a 2013, o grupo de pesquisa de leptospirose do CPqGM, realiza uma vigilância ativa no Hospital Couto Maia em Salvador-Ba, onde foi recrutado 4612 casos suspeitos para leptospirose. Destes 4612 foi confirmado o diagnóstico de 1853 (40%) utilizando pelo menos um dos três métodos de diagnóstico (MAT, Hemocultura, qPCR). Dentre os casos confirmados, 1759 (95%) foram confirmados pelo MAT. A sensibilidade do MAT foi diferente entre as amostras aguda e convalescente, sendo 60% na fase aguda e 97% na fase convalescente. O sorogrupo Icterohaemorrhagiae foi o mais prevalente (90%) dos casos confirmados para MAT. Durante o período do estudo foram coletadas 1133 hemoculturas e destas 203 (18%) foram positivas, sendo possível isolar leptospiras de 93/203 (45%) das hemoculturas, as quais foram soro-agrupadas com soros heterológos de coelho. A concordância entre o sorogrupo encontrado no MAT e na soro-agrupagem foi de 80%. Os achados mostram que existe uma concordância significante entre o sorogrupo encontrado pelos dois métodos, o que indica que o painel de cepas utilizado no MAT apresenta uma ótima cobertura para os sorogrupos prevalentes na região. A predominância de um sorogrupo facilitou quanto a tomadas de decisões para prevenção e controle, assim como facilita para o desenvolvimento de novos testes de diagnóstico e vacinas mais direcionados.

Leptospirosis is a re-emerging zoonotic disease of global importance, with 1,2 million cases reported each year. Diagnosis of leptospirosis is often difficult given the nonspecific disease presentation. In order to compare the performance of the two gold standard diagnostic tests for leptospirosis, the group enrolled 4612 patients with suspected leptospirosis during active surveillance at the state infectious disease reference hospital, Hospital Couto Maia, in Salvador, Bahia between 1996 and 2013. Of these, was confirmed Leptospira infection in 1853 (40%) using at least one of three diagnostic methods (microagglutination (MAT), blood culture, and qPCR). Was confirmed 1759 (95%) cases using only the MAT assay, and identified the serogroup Icterohaemorrhagiae as the infective agent in 90% of MAT positive samples. It was determined the sensitivity of the MAT was 60% for acute phase samples and increased to 97% for convalescent samples. Within this study period, it was possible to collect 1133 blood cultures and was isolated leptospires from 93 of 203 (45%) of blood cultures, and determined the serotype using heterologous rabbit sera. The concordance between the infective serogroup identified using hemoculture and MAT techniques was 80%. This result indicates that the panel of 11 strains used in the MAT represents a majority of the infective serogroups causing disease in our study population. The predominance of a single serogroup in symptomatic cases informs the development of new diagnostic tests and novel vaccines to prevent leptospirosis in Brazil.

Caracterização das leptospiras isoladas dos pacientes atendidos no Hospital Couto Maia.

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, com 1,2 milhões de casos registrados a cada ano. De 1996 a 2013, o grupo de pesquisa de leptospirose do CPqGM, realiza uma vigilância ativa no Hospital Couto Maia em Salvador-Ba, onde foi recrutado 4612 casos suspeitos para leptospirose. Destes 4612 foi confirmado o diagnóstico de 1853 (40%) utilizando pelo menos um dos três métodos de diagnóstico (MAT, Hemocultura, qPCR). Dentre os casos confirmados, 1759 (95%) foram confirmados pelo MAT. A sensibilidade do MAT foi diferente entre as amostras aguda e convalescente, sendo 60% na fase aguda e 97% na fase convalescente. O sorogrupo Icterohaemorrhagiae foi o mais prevalente (90%) dos casos confirmados para MAT. Durante o período do estudo foram coletadas 1133 hemoculturas e destas 203 (18%) foram positivas, sendo possível isolar leptospiras de 93/203 (45%) das hemoculturas, as quais foram soro-agrupadas com soros heterológos de coelho. A concordância entre o sorogrupo encontrado no MAT e na soro-agrupagem foi de 80%. Os achados mostram que existe uma concordância significante entre o sorogrupo encontrado pelos dois métodos, o que indica que o painel de cepas utilizado no MAT apresenta uma ótima cobertura para os sorogrupos prevalentes na região. A predominância de um sorogrupo facilitou quanto a tomadas de decisões para prevenção e controle, assim como facilita para o desenvolvimento de novos testes de diagnóstico e vacinas mais direcionados.

Avaliação da atividade neutralizante do soro de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose

O ciclo de transmissão da leptospirose envolve a interação entre reservatórios animais, um ambiente favorável e grupos humanos suscetíveis. Dentro da resposta imune, a atividade dos anticorpos neutralizantes pode estar entre os fatores que contribuem com suscetibilidade individual. O Teste de Inibição do Crescimento de Leptospiras (TICL) in vitro detecta a presença de anticorpos neutralizantes que reagem contra antígenos de culturas vivas de leptospiras inibindo o crescimento da bactéria. O Teste de Microaglutinação Microscópica (MAT) detecta a presença de anticorpos aglutinantes e é o teste padrão ouro no diagnóstico da leptospirose. O objetivo deste trabalho foi avaliar se o soro de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose é capaz de inibir o crescimento de leptospiras in vitro e se existe relação com títulos da MAT. Foram utilizadas 21 amostras de soro coletadas de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose em Salvador-Ba. As amostras foram testadas para MAT e para o TICL, utilizando a cepa L1 130 sorogrupo Icterohaemorrhagiae. Para TICL foram selecionadas três amostras com títulos de MAT= 0, 100, 400, 1600 e 6400. Os soros em teste foram inoculados em meio com cultura de leptospiras vivas e soro de coelho; após cinco dias de incubação foi verificada inibição do crescimento. Entre as amostras de soro com MAT=0 nenhuma inibiu o crescimento das leptospiras; entre os soros com MAT=100, 66% inibiram o crescimento na diluição de 1:2, e 34% na diluição de 1:8; entre os soros com MAT=400, 66% inibiram o crescimento das leptospiras na diluição de 1:4, e 34% na diluição de 1:8; entre os soros com MAT=1600 e MAT=6400, 33% inibiram o crescimento na diluição 1:8, 33% inibiram o crescimento em 1:16, e 33% inibiram o crescimento em 1:32. Nossos achados indicam que há inibição do crescimento de leptospiras em soro de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose e que há relação entre os títulos da MAT e o potencial de inibição do soro.

Incidência de leptospirose em uma comunidade carente de Salvador, Bahia

A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, divididas em 11 espécies e mais de 200 sorovares. A infecção causada por Leptospira varia de casos assintomáticos a uma doença febril aguda. O objetivo do estudo foi descrever a incidência de infecção por Leptospiras e a diversidade de sorovares envolvidas na transmissão desta zoonose em uma comunidade carente de Salvador. De janeiro de 2013 a abril de 2014, 03 inquéritos sorológicos foram realizados. As amostras de sangue coletadas foram encaminhadas para análise laboratorial utilizando o teste de microaglutinação (MAT), com uma bateria de 7 sorovares (IcterohaemorragiaeL1-130, Icterohaemorragiae M20, Canicola H Ultrecht, Patoc 1, Autumnalis Akiyami A, Ballum Mus 127 e Cynopteri 3522C). Foram considerados confirmados, os participantes que apresentaram soroconversão ou aumento de 4 vezes no título da MAT. Nós identificamos que n=258 (21%) dos 1.226 residentes inclusos que participaram de todos os seguimentos, apresentavam evidência sorológica para infecção prévia pela Leptospira. Nos inquéritos seguintes, a taxa de confirmação foi de 11% (n=138) e 15% (n=190). A incidência de leptospirose por soroconversão foi de 10% e pelo aumento de 4 vezes no título da MAT foi de 2%. A cepa predominante foi a L1-130 (65%), foram considerados positivos para mais de uma cepa (12%) e para a cepa 3522C (3%). Conclui-se que a incidência de leptospirose é considerada significativa na população estudada e que mesmo em casos assintomáticos há uma predominância para a cepa L1-130. Entretanto, chama a atenção a porcentagem de casos positivos pela cepa 3522C, um sorovar considerado não patogênico e para o qual não se conhece o reservatório em ambiente urbano. Estes achados indicam a necessidade do estudo da diversidade de sorovares circulantes no ambiente urbano assim como a necessidade de investigar se a cepa 3522C está envolvida na infecção de casos graves de leptospirose.

Caracterização das Leptospiras isoladas dos pacientes atendidos no Hospital Couto Maia

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, com 1,2 milhões de casos registrados a cada ano. A doença apresenta sintomas inespecíficos, sendo confundida com outras doenças febris. Atualmente a leptospirose vem causando epidemias nos grandes centros urbanos