RESUMO
BACKGROUND: Theoretical and experimental data support the geographic differentiation strategy as a valuable tool for detecting loci under selection. In the context of Plasmodium falciparum malaria, few populations have been studied, with limited genomic coverage. METHODS: We examined geographic differentiation in P. falciparum populations on the basis of 12 single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in 4 genes encoding drug resistance determinants, 5 SNPs in 2 genes encoding antigens, and a set of 17 putatively neutral SNPs dispersed on 13 chromosomes. We sampled 326 parasite isolates representing 7 P. falciparum populations from regions with varied levels of malaria transmission (Gabon, Kenya, Madagascar, Mali, Mayotte, Haiti, and the Philippines). RESULTS: Frequencies of drug resistance alleles varied considerably among populations (mean F(ST), 0.52). In contrast, allele frequencies varied significantly less for antigenic and neutral SNPs (mean F(ST), 0.16 and 0.24, respectively). This contrasting pattern was more pronounced when only the African populations were considered. Signature of selection was detected for most of the resistant SNPs but not for the antigenic SNPs. CONCLUSION: These data further validate the utility of geographic differentiation for identifying loci under strong positive selection, such as drug resistance loci. This study also provides frequencies of molecular makers of resistance in some overlooked populations.
Assuntos
Resistência a Medicamentos , Malária Falciparum/parasitologia , Plasmodium falciparum/classificação , Plasmodium falciparum/genética , Polimorfismo de Nucleotídeo Único , Adaptação Biológica , Adolescente , Adulto , África , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Criança , Pré-Escolar , DNA de Protozoário/química , DNA de Protozoário/genética , Feminino , Genes de Protozoários , Geografia , Haiti , Humanos , Lactente , Recém-Nascido , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Filipinas , Plasmodium falciparum/isolamento & purificação , Adulto JovemRESUMO
Introduction: Diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL) is a rare disease form associated with Leishmania (L.) amazonensis in South America. It represents the "anergic" pole of American Tegumentary Leishmaniasis, and the explanation for its resistance to treatment remains elusive. We aimed to study some possible immunological mechanisms involved in the poor DCL treatment response by evaluating some cell surface molecules obtained from a patient with DCL by flow cytometry. Case presentation: A 65-year-old DCL patient who initially failed to respond to the standard treatment for the disease showed vacuolated macrophages filled with amastigotes in lesion biopsy, and L. (L.) amazonensis was identified through ITS1PCR amplification. The Leishmania skin test and indirect immunofluorescence analysis revealed negative results. Peripheral blood from the patient was collected after a few months of treatment, when the patient presented with no lesion. Peripheral blood mononuclear cells were analyzed ex vivo and in vitro after 48 h of stimulation with soluble L. (L.) amazonensis antigen (SLA). Cell death, surface molecules, and intracellular molecules, such as IFN-γ and granzyme B, were analyzed in the cells using flow cytometry. Analysis of the surface markers showed an increased expression of the inhibitory molecule programmed death ligand 1 (PD-L1) in the monocytes restimulated with SLA (approximately 65%), whereas the negative controls were 35% positive for PD-L1. Conversely, compared with the negative controls, we observed a decrease in CD4+IFN-γ+ T cells (8.32 versus 1.7%) and CD8+IFN-γ+ T cells (14% versus 1%). We also observed a relevant decrease in the granzyme B levels in the CD8+ T cells, from 31% in the negative controls to 5% after SLA restimulation. Conclusion: The dysfunctional activation of PD-L1 inhibitory pathway after Leishmania antigen stimulation and reduced levels of IFN-gamma and granzyme B-producing cells could be closely related to unresponssiveness to standard drug treatment of DCL patient.
Assuntos
Antígeno B7-H1/genética , Leishmaniose Tegumentar Difusa/imunologia , Linfócitos T/imunologia , Idoso , Antígenos de Protozoários/imunologia , Antígeno B7-H1/imunologia , Biópsia , Citocinas/imunologia , Citometria de Fluxo , Granzimas/imunologia , Humanos , Interferon gama/imunologia , Leishmania , Leishmaniose Cutânea , Leishmaniose Tegumentar Difusa/tratamento farmacológico , Macrófagos/parasitologia , Macrófagos/patologia , Masculino , Monócitos/efeitos dos fármacos , Monócitos/parasitologia , Pele/parasitologia , Pele/patologia , Linfócitos T/patologia , Falha de TratamentoRESUMO
Visceral leishmaniasis is a severe form of the disease, caused by Leishmania infantum in the New World. Patients present an anergic immune response that favors parasite establishment and spreading through tissues like bone marrow and liver. On the other hand, Leishmania braziliensis causes localized cutaneous lesions, which can be self-healing in some individuals. Interactions between host and parasite are essential to understand disease pathogenesis and progression. In this context, dendritic cells (DCs) act as essential bridges that connect innate and adaptive immune responses. In this way, the aim of this study was to compare the effects of these two Leishmania species, in some aspects of human DCs' biology for better understanding of the evasion mechanisms of Leishmania from host innate immune response. To do so, DCs were obtained from monocytes from whole peripheral blood of healthy volunteer donors and from those infected with L. infantum or L. braziliensis for 24 h. We observed similar rates of infection (around 40%) as well as parasite burden for both Leishmania species. Concerning surface molecules, we observed that both parasites induced CD86 expression when DCs were infected for 24 h. On the other hand, we detected a lower surface expression of CD209 in the presence of both L. braziliensis and L. infantum, but only the last one promoted the survival of DCs after 24 h. Therefore, DCs infected by both Leishmania species showed a higher expression of CD86 and a decrease of CD209 expression, suggesting that both enter DCs through CD209 molecule. However, only L. infantum had the ability to inhibit DC apoptotic death, as an evasion mechanism that enables its spreading to organs like bone marrow and liver. Lastly, L. braziliensis was more silent parasite, once it did not inhibit DC apoptosis in our in vitro model.
RESUMO
BACKGROUND: Neutrophils are the first line of defense against invading pathogens and are rapidly recruited to the sites of Leishmania inoculation. During Leishmania braziliensis infection, depletion of inflammatory cells significantly increases the parasite load whereas co-inoculation of neutrophils plus L. braziliensis had an opposite effect. Moreover, the co-culture of infected macrophages and neutrophils also induced parasite killing leading us to ask how neutrophils alone respond to an L. braziliensis exposure. Herein we focused on understanding the interaction between neutrophils and L. braziliensis, exploring cell activation and apoptotic fate. METHODS AND FINDINGS: Inoculation of serum-opsonized L. braziliensis promastigotes in mice induced neutrophil accumulation in vivo, peaking at 24 h. In vitro, exposure of thyoglycollate-elicited inflammatory or bone marrow neutrophils to L. braziliensis modulated the expression of surface molecules such as CD18 and CD62L, and induced the oxidative burst. Using mCherry-expressing L. braziliensis, we determined that such effects were mainly observed in infected and not in bystander cells. Neutrophil activation following contact with L. braziliensis was also confirmed by the release of TNF-α and neutrophil elastase. Lastly, neutrophils infected with L. braziliensis but not with L. major displayed markers of early apoptosis. CONCLUSIONS: We show that L. braziliensis induces neutrophil recruitment in vivo and that neutrophils exposed to the parasite in vitro respond through activation and release of inflammatory mediators. This outcome may impact on parasite elimination, particularly at the early stages of infection.
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Apoptose , Leishmania braziliensis , Leishmania/imunologia , Ativação de Neutrófilo , Animais , Antígenos CD18/análise , Feminino , Selectina L/análise , Leishmania braziliensis/imunologia , Elastase de Leucócito/biossíntese , Macrófagos/imunologia , Macrófagos/parasitologia , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Infiltração de Neutrófilos/imunologia , Neutrófilos/imunologia , Superóxidos/metabolismo , Fator de Necrose Tumoral alfa/biossínteseRESUMO
Leishmania spp. cause a broad spectrum of diseases collectively known as leishmaniasis. Leishmania braziliensis is the main etiological agent of American cutaneous leishmaniasis and mucocutaneous leishmaniasis. During experimental infection with L. braziliensis, BALB/c mice develop an adaptive immune response that is associated with lesion healing and, in parallel, parasite persistence within draining lymph nodes (dLNs). In the Leishmania major model of cutaneous leishmaniasis, regulatory T cells (Tregs) play an important role in immune regulation, preventing pathological immune responses but at the same time precluding sterile cure. In this study we investigated the role of Tregs during experimental infection with L. braziliensis. CD4(+)CD25(+) T cells were detected throughout the duration of clinical disease both at the ear and in dLNs of infected mice. These cells expressed Treg markers such as glucocorticoid-induced TNF-receptor-related protein (GITR), the α chain of the αεß7 integrin (CD103), and the forkhead/winged helix transcription factor, Foxp3, and were able to suppress the proliferation of CD4(+)CD25(-) cells. Importantly, a high frequency of Foxp3(+) cells accumulated at the site of infection and in dLNs. We next investigated the outcome of a reinfection with L. braziliensis in terms of Treg distribution and disease reactivation. Interestingly, a secondary inoculation with L. braziliensis did not preclude an efficient recall response to L. braziliensis at a distal site, despite the presence of Tregs. Within dLNs, reinfection did not promote parasite dissemination or a differential recruitment of either CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) or CD4(+)IL-10(+) T cells. On the contrary, parasites were mainly detected in the LN draining the primary infection site where a high frequency of CD4(+)IFN-γ(+) T cells was also present. Collectively these data show that during experimental infection, Tregs are present in healed mice but this population does not compromise an effective immune response upon reinfection with L. braziliensis.
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Imunidade , Leishmania braziliensis/fisiologia , Leishmaniose/imunologia , Leishmaniose/parasitologia , Linfócitos T Reguladores/imunologia , Animais , Feminino , Humanos , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB CRESUMO
Tromboembolismo pulmonar é uma doença caracterizada por êmbolos alojados na artéria pulmonar principal ou em seus ramos, gerando bloqueio do fluxo sanguíneo pelos pulmões. Um grande êmbolo pulmonar é uma das poucas causas de morte virtualmente instantânea, sendo considerado uma das etiologias possíveis de atividade elétrica sem pulso. O tratamento do tromboembolismo pulmonar agudo deve incluir anticoagulação com heparina de baixo peso molecular, fondaparinux ou heparina comum endovenosa em bólus seguida de infusão contínua. Nos pacientes hemodinamicamente estáveis e sem disfunção de ventrículo direito, a anticoagulação sistêmica tem bom prognóstico, não sendo indicada a realização de trombólise. No grupo de pacientes hemodinamicamente instáveis, o uso de fibrinolíticos pode ter benefícios como a dissolução de grande parte do trombo obstrutivo da circulação pulmonar, assim como a promoção de lise da fonte do êmbolo nas veias profundas dos membros inferiores. Em pacientes hemodinamicamente estáveis e com disfunção de ventrículo direito, há controvérsias quanto à realização de trombólise. Alguns ensaios clínicos controlados sugerem que estes pacientes podem se beneficiar da resolução mais rápida do êmbolo, com melhora da função do ventrículo direito. Um dos argumentos de estudos que questionam a decisão por trombólise em pacientes hemodinamicamente estáveis e com disfunção de ventrículo direito é o de que esta pode ser resultado de outra doença de base do paciente, não sendo, pois, uma consequência do tromboembolismo pulmonar. Este relato de caso descreve um caso de tromboembolismo pulmonar, além de apresentar uma revisão de literatura do tema embolia pulmonar.
Pulmonary embolism is a disease characterized by the presence of emboli lodged in the main pulmonary artery or in its branches, causing an obstruction to blood flow through the lungs. A large pulmonary embolus is one of the of the few cases of sudden death, being one of the possible aetiologies of pulseless electric activity. The treatment of pulmonary embolismshould include anticoagulation with low molecular weight heparin, fondaparinux or IV bolus of unfractionated heparin followed by continuous infusion. In hemodynamically stable patients with no right ventricular dysfunction, systemic anticoagulation carries a good prognosis, with thrombolysis not being indicated in those patients. In hemodynamically unstable patients, the use of fibrinolytic agents can lead to the dissolution of a large part of the obstructing thrombus in the pulmonary circulation, as well as the promotion of lysis of the primary thrombus in the deep veins of the lower limbs, which originated the pulmonary emboli. In hemodynamically stable patients with right ventricular dysfunction, there are controversies as to the use of thrombolysis. A few controlled clinical trials have suggested that these patients could benefit from the more rapid dissolution of thrombi seen with thrombolysis, leading to a greater improvement in right ventricular function. One of the arguments of the articles that question the use thrombolysis in hemodinamically stable patients with right ventricle dysfunction is that this dysfunction could be the result of another underlying disease the patient may have, rather than a result of pulmonary embolism. This case report describes a case of pulmonary embolism and presents a literature review of the referred theme.
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Humanos , Masculino , Adulto , Anticoagulantes/uso terapêutico , Fibrinólise , Heparina/uso terapêutico , Embolia Pulmonar/diagnóstico , Tomografia Computadorizada por Raios X/métodosRESUMO
A leishmaniose tegumentar americana (LTA) tem como principal agente etiológico a L. braziliensis e é uma das afecções dermatológicas que merece mais atenção, por seu alto coeficiente de detecção e sua capacidade de produzir deformidades. O neutrófilo é considerado a primeira linha de defesa contra agentes infecciosos ou substâncias estranhas e o seu rápido recrutamento para os tecidos é fundamental para o sistema imune inato. No modelo murino de infecção por L. braziliensis, mostramos um constante recrutamento de neutrófilos para o sítio de infecção. Baseados nesses resultados, nós formulamos uma hipótese que os neutrófilos desempenham um papel importante durante os estágios iniciais de infecção com L. braziliensis. Assim, conduzimos experimentos com neutrófilos recrutados com tioglicolato e neutrófilos derivados de medula óssea. Inicialmente, observamos que os neutrófilos são prontamente infectados com parasitas opsonizados com soro fresco. O contato entre neutrófilos e L. braziliensis ativou os neutrófilos, aumentando a expressão de CD18 e diminuindo a expressão de CD62L. Essa ativação levou à produção de superóxido, secreção de elastase e liberação de TNF-a. O contato com L. braziliensis não impediu a apoptose dos neutrófilos e a destruição dos parasitas internalizados. Utilizando anticorpos específicos para neutrófilos, observamos o aumento significativo no número de parasitas em animais depletados de neutrófilos. Em paralelo, o contato dos neutrófilos com L. braziliensis levou à secreção de quimiocinas, capazes de induzir o recrutamento de células dendríticas. Os neutrófilos, portanto, desempenham um papel importante no combate ao parasita no período inicial da infecção por L. braziliensis.
RESUMO
A leishmaniose tegumentar americana (LTA) tem como principal agente etiológico a L. braziliensis e é uma das afecções dermatológicas que merece mais atenção, por seu alto coeficiente de detecção e sua capacidade de produzir deformidades. O neutrófilo é considerado a primeira linha de defesa contra agentes infecciosos ou substâncias estranhas e o seu rápido recrutamento para os tecidos é fundamental para o sistema imune inato. No modelo murino de infecção por L. braziliensis, mostramos um constante recrutamento de neutrófilos para o sítio de infecção. Baseados nesses resultados, nós formulamos uma hipótese que os neutrófilos desempenham um papel importante durante os estágios iniciais de infecção com L. braziliensis. Assim, conduzimos experimentos com neutrófilos recrutados com tioglicolato e neutrófilos derivados de medula óssea. Inicialmente, observamos que os neutrófilos são prontamente infectados com parasitas opsonizados com soro fresco. O contato entre neutrófilos e L. braziliensis ativou os neutrófilos, aumentando a expressão de CD18 e diminuindo a expressão de CD62L. Essa ativação levou à produção de superóxido, secreção de elastase e liberação de TNF-a. O contato com L. braziliensis não impediu a apoptose dos neutrófilos e a destruição dos parasitas internalizados. Utilizando anticorpos específicos para neutrófilos, observamos o aumento significativo no número de parasitas em animais depletados de neutrófilos. Em paralelo, o contato dos neutrófilos com L. braziliensis levou à secreção de quimiocinas, capazes de induzir o recrutamento de células dendríticas. Os neutrófilos, portanto, desempenham um papel importante no combate ao parasita no período inicial da infecção por L. braziliensis.
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Animais , Leishmania braziliensis/patogenicidade , Leishmaniose Visceral/parasitologia , Neutrófilos/metabolismoRESUMO
A Leishmaniose Tegumentar (LT) constitui um grave problema de saúde pública no Brasil. As células T reguladoras (CD4+CD25+) (Tregs) executam um papel geral na regulação imune, prevenindo uma resposta imune patológica induzida. As Tregs naturais são definidas a partir da expressão constitutiva de CD25, CTLA-4, GITR, CD103 e FoxP3, entre outros marcadores. As células Tregs, ao se acumularem no sítio de infecção por Leishmania, suprimem a proliferação de células T CD4+CD25-, levando à persistência do parasita por mecanismos dependentes de IL-10. Nosso objetivo foi caracterizar a população de células Treg em camundongos BALB/c infectados e re-infectados com L. Braziliensis e avaliar se estas células estão relacionadas com a persistência do parasota. Células T CD4+CD25+, obtidas de camundongos infectados, expressam diferentes marcadores de superfície de Tregs (CD103, GITR, FoxP3) e foram capazes de suprimir a proliferação das células T CD4+CD25-. Observamos também a produção IFN-y e IL-10 por parte de células T CD4+CD25+. Observamos que os parasitas persistem no lifondo e no baço cuja infecção, contudo na orelha, o número de parasitas diminui com a cicatrização da lesão. Observamos também que não há reativação da lesão após o desafio. Nossos resultados mostram que as células Tregs estão presentes na infecção experimental por L. Braziliensis e sugerem que estas células estão associadas com a ausência de reativação da doença após um desafio.