Novos antígenos de Schistosoma mansoni para o diagnóstico sorológicoda infecção ativa e controle de cura

RESUMO

A esquistossomose continua sendo uma das infecções parasitárias mais prevalentes no mundo , e para o controle e monitoramento efetivo dessa doença é essencial que se disponha de métodos diagnósticos cada vez mais acurados. Utilizando ferramentas de bioinformática e o proteom a do parasito S. mansoni, nosso grupo selecionou in silico , antígenos candidatos do S. mansoni para serem utilizados no diagnóstico sorológico da esquistossomose e no control e de cura da doença pós - tratamento . A estratégia baseou - se em critérios para seleç ão de potenciais antígenos que levaram em consideração a predição de presença de peptídeo sinal, baixa similaridade com proteínas humanas e de camundongos, presença de epítopos lineares de células B e T preditos, localização predita favorável (secretada ou de membrana) e prediçã o de expressão em estágio s de vida do parasito presentes no hospedeiro definitivo. Estas condicionais foram aplicadas em um banco de dados relacional construído para integrar os resultados das diferentes predições. Sete proteínas f or am selecionadas e diante da inviabilidade de expressar todas elas, nosso grupo identificou epítopos lineares de célula B nas proteínas selecionadas , que foram produzidos como peptídeos sintéticos e utilizados na validação da estratégia de seleção in silico utilizada. Esses epítopos foram identificados por predição in silico dos programas AAP12, BCPred12 , BepiPred e predição de regiões intrinsecamente desordenadas (IDRs) . Adicionalmente, duas proteínas também foram expressas como proteínas recombinantes em s istema procarioto e avaliadas em ensaios de ELISA. Para os ensaios de ELISA com os peptídeos sintéticos e com as proteínas recombinantes, foram utilizados soro de camundongos infectados com S. mansoni e soros de indivíduos provenientes de uma área endêmica de baixa intensidade de infecção para S. mansoni e de doadores saudáveis não residentes em áreas endêmicas para esquistossomose . Dentre os sete peptídeos sintéticos utilizados nos ensaios de ELISA, cinco foram capazes de diferenciar indivíduos infectados de áreas endêmicas (INF), de indivíduos negativos de área endêmica (NEG) e doadores saudáveis não residentes de área endêmica (HD) . Além disso, um dos peptídeos também foi capaz de diferenciar soro de indivíduos infectados de área endêmica , de soro de indi víduos infectados 30 e 180 dias após tratamento, o que poderia ser utilizado para controle de cura. O uso de soros de indivíduos que vivem em área s endêmicas para esquistossomose demonstraram que as proteínas rSm200(1069 - 1520) - ELISA e a rSmVal7 - ELISA fo ram capaz es de discriminar os doadores saudáveis (HD) e ndivíduos infectados (INF) que vivem em áreas endêmicas para esquistossomose , porém não fo ram eficiente s para o controle de cura a pós tratamento . Nossos resultados demosntram que a estratégia de s eleção in silico de antígenos potencias para o diagnóstico da esquistossomose apre sentou um racional promissor e com resultados promissores