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Expression and purification of monospecific and bispecific recombinant antibody fragments derived from antibodies that block the CD80/CD86-CD28 costimulatory pathway.
Dincq, S; Bosman, F; Buyse, M A; Degrieck, R; Celis, L; de Boer, M; Van Doorsselaere, V; Sablon, E.
Afiliação
  • Dincq S; Department of Microbiology, Innogenetics NV, Industriepark Zwijnaarde 7, Box 4, B-9052 Gent, Belgium. stephanie_dincq@innogenetics.be
Protein Expr Purif ; 22(1): 11-24, 2001 Jun.
Article em En | MEDLINE | ID: mdl-11388794
The development of recombinant techniques for rapid cloning, expression, and characterization of cDNAs encoding antibody (Ab) subunits has revolutionized the field of antibody engineering. By fusion to heterologous protein domains, chain shuffling, or inclusion of self-assembly motifs, novel molecules such as bispecific Abs can be generated that possess the subset of functional properties designed to fit the intended application. We describe the engineering of Ab fragments produced in bacteria for blocking the CD28-CD80/CD86 costimulatory interaction in order to induce tolerance against transplanted organs. We designed single-chain Fv antibodies, monospecific and bispecific diabodies, and a bispecific tetravalent antibody (BiTAb) molecule directed against the CD80 and/or CD86 costimulatory molecules. These recombinant Ab molecules were expressed in Escherichia coli, followed by purification and evaluation for specific interaction with their respective antigen in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A specific sandwich ELISA confirmed the bispecificity of the bispecific diabodies and the BiTAb.
Assuntos
Anticorpos Biespecíficos/imunologia; Anticorpos Biespecíficos/isolamento & purificação; Especificidade de Anticorpos; Antígenos CD/imunologia; Fragmentos de Imunoglobulinas/imunologia; Fragmentos de Imunoglobulinas/isolamento & purificação; Transdução de Sinais; Animais; Anticorpos Biespecíficos/química; Anticorpos Biespecíficos/farmacologia; Anticorpos Monoclonais/química; Anticorpos Monoclonais/imunologia; Anticorpos Monoclonais/isolamento & purificação; Anticorpos Monoclonais/farmacologia; Antígenos CD/metabolismo; Linfócitos B/efeitos dos fármacos; Linfócitos B/imunologia; Linfócitos B/metabolismo; Antígeno B7-1/imunologia; Antígeno B7-1/metabolismo; Antígeno B7-2; Sítios de Ligação de Anticorpos; Western Blotting; Antígenos CD28/imunologia; Antígenos CD28/metabolismo; Linhagem Celular; Ensaio de Imunoadsorção Enzimática; Citometria de Fluxo; Tolerância Imunológica/efeitos dos fármacos; Tolerância Imunológica/imunologia; Fragmentos de Imunoglobulinas/química; Fragmentos de Imunoglobulinas/farmacologia; Região Variável de Imunoglobulina/química; Região Variável de Imunoglobulina/imunologia; Região Variável de Imunoglobulina/isolamento & purificação; Região Variável de Imunoglobulina/farmacologia; Glicoproteínas de Membrana/imunologia; Glicoproteínas de Membrana/metabolismo; Camundongos; Modelos Moleculares; Engenharia de Proteínas; Proteínas Recombinantes/química; Proteínas Recombinantes/imunologia; Proteínas Recombinantes/isolamento & purificação; Proteínas Recombinantes/farmacologia; Transdução de Sinais/efeitos dos fármacos
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Coleções: 01-internacional Base de dados: MEDLINE Assunto principal: Fragmentos de Imunoglobulinas / Transdução de Sinais / Antígenos CD / Anticorpos Biespecíficos / Especificidade de Anticorpos Tipo de estudo: Prognostic_studies Idioma: En Revista: Protein Expr Purif Assunto da revista: BIOLOGIA MOLECULAR Ano de publicação: 2001 Tipo de documento: Article País de afiliação: Bélgica
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Coleções: 01-internacional Base de dados: MEDLINE Assunto principal: Fragmentos de Imunoglobulinas / Transdução de Sinais / Antígenos CD / Anticorpos Biespecíficos / Especificidade de Anticorpos Tipo de estudo: Prognostic_studies Idioma: En Revista: Protein Expr Purif Assunto da revista: BIOLOGIA MOLECULAR Ano de publicação: 2001 Tipo de documento: Article País de afiliação: Bélgica