Development of a murine ocular posterior segment explant culture for the study of intravitreous vector delivery.

L'objectif de la présente étude était de développer un système murin de culture d'explant de rétine/choroïde/sclérotique afin de faciliter la livraison intra-vitréenne de vecteurs. Des explants de segments postérieurs provenant de souris adultes de deux groupes d'âge différents (4 sem et 15 sem) furent cultivés dans un milieu sans sérum pour des périodes de temps variables. La viabilité tissulaire fut évaluée par morphologie macroscopique, quantification de la survie cellulaire, expression de la caspase-3 activée, et immunohistochimie. Afin d'imiter la thérapie génique oculaire, les explants furent exposés pendant 48 h à des unités de transduction variables d'un vecteur lentiviral exprimant le gène pour la protéine fluorescente verte. Les explants de cellules de la rétine sont demeurés viables pour environ 1 sem, bien que dans la couche de cellules ganglionnaires on nota le développement de l'apoptose entre 4 à 7 j. Suite à l'infusion de vecteur dans le segment postérieur, la transduction virale fut notée dans plusieurs couches rétiniennes des animaux des deux groupes d'âge. Une influence de l'âge de la souris donneuse fut notée et chez les souris plus âgées la transduction ne se faisait pas aussi bien que chez les jeunes souris. Ce modèle d'explant permet la gestion facile de culture de segment oculaire postérieur avec un minimum de dérangement du tissu, et pourrait être utile pour étudier des méthodes visant à augmenter la thérapie génique sous conditions contrôlées.(Traduit par Docteur Serge Messier).