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1.
Protein Expr Purif ; 92(1): 9-13, 2013 Nov.
Artículo en Inglés | MEDLINE | ID: mdl-23993978

RESUMEN

Dengue is a major international public health concern. There is no drug to treat dengue virus infections and a vaccine is yet to be licensed. The laboratory diagnosis of dengue virus infection has been greatly improved during the last decade; therefore, the main limiting factor is the production of recombinant viral antigens on a large scale. Domain III of dengue virus envelope protein contains multiplex conformation-dependent neutralizing epitopes, making it an attractive diagnostic candidate. In this work, we have demonstrated the expression of dengue virus type 1 envelope domain III protein (EDIII-D1) in methylotrophic yeast, Pichia pastoris GS115. The recombinant secreted protein (sEDIII-D1) was purified by affinity chromatography and characterized by SDS-PAGE. Purified protein was recognized in immunoblot analysis and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with dengue-infected human serum samples. In conclusion, secreted expressions of domain III protein can be obtained in P. pastoris by methanol induction. This product has the potential to be used for the diagnosis of dengue infections.


Asunto(s)
Antígenos Virales/genética , Virus del Dengue/genética , Dengue/diagnóstico , Dengue/virología , Pichia/genética , Proteínas del Envoltorio Viral/genética , Secuencia de Aminoácidos , Anticuerpos Antivirales/sangre , Anticuerpos Antivirales/inmunología , Antígenos Virales/química , Antígenos Virales/inmunología , Antígenos Virales/aislamiento & purificación , Secuencia de Bases , Clonación Molecular/métodos , Dengue/sangre , Dengue/inmunología , Virus del Dengue/química , Virus del Dengue/inmunología , Virus del Dengue/aislamiento & purificación , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Humanos , Inmunoglobulina G/sangre , Inmunoglobulina G/inmunología , Inmunoglobulina M/sangre , Inmunoglobulina M/inmunología , Datos de Secuencia Molecular , Estructura Terciaria de Proteína , Proteínas Recombinantes/química , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/inmunología , Proteínas Recombinantes/aislamiento & purificación , Proteínas del Envoltorio Viral/química , Proteínas del Envoltorio Viral/inmunología , Proteínas del Envoltorio Viral/aislamiento & purificación
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