Fatores de risco associados à infecção viral (BoHV-1 e BVDV) em rebanhos leiteiros mestiços com problemas reprodutivos, no município de Uberlândia, MG / Risk factors associated with viral infections (BoHV-1 and BVDV) in crossbreed dairy herds with reproductive failures, Uberlândia, MG

Com frequência, infecções virais são associadas a problemas da reprodução em rebanhos de bovinos de corte e leite de todo o mundo. Este estudo teve como objetivo avaliar variáveis de manejo que possam constituir fatores de risco da infecção por BoHV-1 e/ou por BVDV em rebanhos leiteiros com histórico de problemas da reprodução em vacas mestiças em manejo extensivo e sem histórico de vacinação prévia para o controle de IBR e BVD. Anticorpos neutralizantes anti-BoHV-1, anti-BVDV e para ambos os vírus simultaneamente foram identificados em 62,5% (165/264), 45,1% (119/264) e 31,4% (83/264), respectivamente, das amostras analisadas. Os fatores de risco associados à infecção por BoHV-1 foram rebanhos com número total de fêmeas superior a 100, presença de ordenha mecânica, não utilização de inseminação artificial na reprodução e a compra infrequente de animais. Para BVDV, os fatores de risco foram aptidão mista (leite/corte) do rebanho, presença de ordenha mecânica, ausência de quarentena para os animais recém-adquiridos, presença de piquete de parição e a não utilização de inseminação artificial. Para a infecção simultânea (BoHV-1/BVDV), a presença de ordenha mecânica aumentou o risco em 3,36 vezes, e o uso de inseminação artificial reduziu em 56% o risco de infecção nos rebanhos avaliados.(AU)

Viral infections are frequently associated with reproductive problems in dairy and beef cattle worldwide. The aim of this study was to verify managerial practices that may constitute risk factors associated with infection by BoHV-1 and/or BVDV in dairy herds with a history of reproductive disease in extensively reared dairy cows without a previous history of vaccination against IBR and BVD. Neutralizing antibodies anti-BoHV-1, anti-BVDV or both were detected in 62.5% (165/264), 45.1% (119/264), and 31.4% (83/264), respectively, in the samples analyzed. The risk factors associated with infection by BoHV-1 were herds with more than 100 cows, the presence of mechanical milking, the non-utilization of artificial insemination, and the infrequent acquisition of animals. Risk factors associated with BVDV were dual-purpose herds (milk and beef), these include the utilization of mechanical milking, absence of quarantine for newly acquired animals, the presence of picket calving, and the absence of artificial insemination. For simultaneous infections by both viruses (BoHV-1 and BVDV) the use of mechanical milking increased the chance of infection 3.36-fold while the use of artificial insemination reduced the risk of infection by 56% in these herds.(AU)

Retrospective study of Bovine herpesvirus 5 meningoencephalitis in cattle from São Paulo State, Brazil / Estudo retrospectivo de meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 em bovinos do estado de São Paulo, Brasil

Meningoencephalitis caused by Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an important neurological disease that affects Brazilian cattle herds. The present study investigated the presence of BoHV-5 DNA in cattle diagnosed with meningoencephalitis at Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, UNESP - Univ Estadual Paulista from 1980 to 2009. The records obtained from the Large Animal Internal Medicine Service and the Animal Pathology Service were reviewed to identify clinical and epidemiological data from cattle with neurological signs. Excluding rabies cases, we found 115 cases of cattle with neurological signs that had been necropsied. Non-suppurative meningoencephalitis was diagnosed in 28 animals of the 115 initially selected based on histopathological examination of brain tissues. Of these 28 animals, 15 (54%) were positive for BoHV-5 DNA by polymerase chain reaction (PCR) of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) brain samples. PCR target was 159-bp fragment from the BoHV-5 glycoprotein C gene. The oldest case identified in the present study was from 1988. PCR was a good tool for the diagnosis of BoHV-5 DNA extracted from FFPE tissues, allowing retrospective studies of samples stored for more than 20 years.(AU)

A meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 (BoHV-5) é uma doença neurológica importante no rebanho bovino brasileiro. Este estudo tem por objetivo verificar a presença do DNA de BoHV-5 em bovinos diagnosticados com meningoencefalite na Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista, entre os anos de 1980 e 2009. Foram revisados os arquivos do Serviço de Clínica de Grandes Animais e da Patologia Animal em busca dos dados clínicos e epidemiológicos de bovinos com sinais neurológicos. Excluídos os casos de raiva, foram encontrados 115 casos de bovinos com sinais neurológicos, que foram necropsiados. O exame histopatológico realizado nos tecidos encefálicos desses animais constatou lesões de meningoencefalite não supurativa em 28 animais. Destes, em 15 (54%) casos foi identificada a presença do DNA de BoHV-5 por meio de PCR realizada em amostras de tecido encefálico fixadas em formalina e incluídas em parafina (FFPE). O alvo da PCR foi um fragmento de 159 pb do gene da glicoproteína C do BoHV-5. O caso mais antigo identificado neste estudo foi de 1988. A PCR apresentou-se como boa ferramenta para o diagnóstico do DNA de BoHV-5 extraído de tecidos FFPE, possibilitando estudos retrospectivos e diagnóstico de amostras com mais de 20 anos de armazenamento.(AU)

Presença do genoma de BoHV-5 no líquido cefalorraquidiano de bovinos com meningoencefalite herpética / Presence of BoHV-5 genome in cerebrospinal fluid of cattle with herpetic meningoencephalitis

The diagnosis of bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) encephalitis is confirmed after death by laboratory methods applied to brain fragments. Alternative methods to confirm ante-mortem diagnosis are important because the disease is not always lethal. The aim of this study was to investigate whether the presence of the virus genome in the cerebrospinal fluid (CSF) detected by polymerase chain reaction (PCR) might be admitted as a method for ante-mortem diagnosis. CSF samples were taken from 14 animals suffering from BoHV-5 encephalitis, diagnosed by characteristic histopathological lesions in the brain and by identification of the virus genome by PCR in different portions of the brain. Virus DNA was detected in the CSF of 21.42% (3/14) of the evaluated animals. Ante-mortem detection of the virus genome in the CSF showed low sensitivity to confirm the diagnosis. The diagnosis is confirmed by a positive result but a negative one does not discard the disease.(AU)

Molecular detection and phylogenetic relationship of wild-type strains of canine distemper virus in symptomatic dogs from Uberlândia, Minas Gerais / Detecção molecular e relação filogenética de cepas selvagens do vírus da cinomose canina em cães sintomáticos oriundos de Uberlândia, Minas Gerais

This study investigated the occurrence of canine distemper virus (CDV) by evaluating the presence of viral RNA within urine samples of dogs from Uberlândia, MG, with clinical manifestations suggestive of infection by CDV by targeting the CDV N gene. Of the clinical samples collected ( n =33), CDV viruria was detected in 45.5%. Five dogs died spontaneously; all had characteristic CDV-associated histopathological alterations and demonstrated CDV viruria. Statistical analyses revealed that the age, gender, breed, or the organ system of the dog affected had no influence on the occurrence of canine distemper. Myoclonus and motor incoordination were the most significant neurological manifestations observed. A direct association was observed between keratoconjunctivitis and dogs with CDV viruria. These findings suggest that CDV viruria in symptomatic dogs might not be age related, and that symptomatic dogs can demonstrate clinical manifestations attributed to CDV without viruria identified by RT-PCR. Additionally, the results of the sequence identities analysed have suggested that all Brazilian wild-type strains of CDV currently identified are closely related and probably originated from the same lineage of CDV. Nevertheless, phylogenetic analyses suggest that there are different clusters of wild-type strains of CDV circulating within urban canine populations in Brazil.

A presença do ácido nucleico (RNA) do vírus da cinomose canina (CDV) foi avaliada por meio da amplificação parcial do gene N pela técnica RT-PCR realizada em urina de cães provenientes de Uberlândia, Minas Gerais, que apresentavam sinais clínicos sugestivos de cinomose. Das 33 amostras de urina avaliadas, o CDV foi identificado em 45,5%. Em cinco cães que morreram espontaneamente, além da excreção do CDV na urina, foram observadas alterações histopatológicas associadas à infecção por esse vírus. Análises estatísticas demonstraram que a idade, gênero, raça e o sistema orgânico comprometido dos cães avaliados não exerceram influência no diagnóstico da cinomose canina. Mioclonia e incoordenação motora foram as manifestações neurológicas que apresentaram frequência de ocorrência significativa (P<0,05). Uma associação direta foi observada entre a presença de ceratoconjuntivite e a identificação de virúria pelo CDV. Esses achados sugerem que a excreção do CDV pela urina em cães com sinais clínicos compatíveis com cinomose pode não ser relacionada com a idade do animal, e que animais sintomáticos podem apresentar manifestações clínicas atribuídas ao CDV, porém sem a caracterização de virúria por RT-PCR. Adicionalmente, análises filogenéticas sugerem que várias cepas de CDV podem estar circulando em populações caninas de áreas urbanas no Brasil.

Prevalência das infecções latentes por BoHV-1 e BoHV-5 em bovinos de corte no Estado do Paraná / Prevalence of latent infection with BoHV-1 and BoHV-5 in beef cattle of Parana, Brazil

O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência das infecções latentes por BoHV-1 e por BoHV-5 em bovinos de corte criados no Estado do Paraná. Os gânglios do nervo trigêmeo foram coletados de 400 bovinos hígidos, entre 18 e 36 meses de idade, provenientes de 90 propriedades rurais localizadas em diferentes mesorregiões geográficas do Estado e abatidos em frigorífico com Serviço de Inspeção Federal. A reação em cadeia da polimerase com amplificação do gene que codifica a glicoproteína C foi empregada para a detecção do DNA viral. Cento e nove bovinos eram herpéticos (27,25%), sendo 14,25% (57/400) infectados com BoHV-1, 9,75% (39/400) infectados com BoHV-5 e 3,25% (13/400) portadores de infecção mista. A distribuição geográfica foi heterogênea e as infecções foram mais prevalentes nas mesorregiões localizadas ao norte do Estado. A vigilância para a encefalite por BoHV-5 deve ser intensificada na mesorregião Noroeste.

The prevalence of latent infection with BoHV-1 or BoHV-5 in beef cattle raised in the state of Paraná, Brazil, was studied. The trigeminal ganglia were collected in a slaughterhouse from 400 healthy cattle, 18 to 36 months old, raised in 90 farms located in distinct geographical regions of the state. Polymerase chain reaction for amplification of the gene encoding C glycoprotein was performed to detect virus DNA. One hundred and nine (27.25%) animals were herpetic; 14.25% (57/400) were infected with BoHV-1, 9.75% (39/400) were infected with BoHV-5 and 3.25% (13/400) had mixed infection. The geographical distribution was heterogeneous and the infections were more prevalent in the north of the state. The surveillance for BoHV-5 encephalitis should be intensive in the Northwest region.

Canine distemper virus and Toxoplasma gondii co-infection in dogs with neurological signs / Co-infecção pelo vírus da cinomose canina e Toxoplasma gondii em cães com sinais neurológicos

O presente estudo relata a ocorrência de co-infecção entre o vírus da cinomose canina (CDV) e Toxoplama gondii em cães com sinais neurológicos. Amostras de soro e tecido nervoso (pos-mortem) de 21 cães, suspeitos de cinomose canina foram analisadas pela Reação de Imunofluorecência indireta (RIFI) para pesquisa de anticorpos contra T. gondii e N. caninum e por RT-PCR para CDV. Dezessete (80,9 por cento) cães foram positivos para o CDV pela RT-PCR e 8 (38,1 por cento) foram positivos para anticorpos contra T. gondii. Sete cães (41,1 por cento) apresentaram-se positivos para ambos agentes, caracterizando processo de co-infecção. Somente 1 (4,7 por cento) cão foi soropositivo para N. caninum (RIFI=100), entretanto este mesmo animal foi positivo para T. gondii (RIFI=4096) e para CDV (RT-PCR).

Genetic analysis of the porcine group B rotavirus NSP2 gene from wild-type Brazilian strains

Group B rotaviruses (RV-B) were first identified in piglet feces, being later associated with diarrhea in humans, cattle, lambs, and rats. In human beings, the virus was only described in China, India, and Bangladesh, especially infecting adults. Only a few studies concerning molecular analysis of the RV-B NSP2 gene have been conducted, and porcine RV-B has not been characterized. In the present study, three porcine wild-type RV-B strains from piglet stool samples collected from Brazilian pig herds were used for analysis. PAGE results were inconclusive for those samples, but specific amplicons of the RV-B NSP2 gene (segment 8) were obtained in a semi-nested PCR assay. The three porcine RV-B strains showed the highest nucleotide identity with the human WH1 strain and the alignments with other published sequences resulted in three groups of strains divided according to host species. The group of human strains showed 92.4 to 99.7 percent nucleotide identity while the porcine strains of the Brazilian RV-B group showed 90.4 to 91.8 percent identity to each other. The identity of the Brazilian porcine RV-B strains with outer sequences consisting of group A and C rotaviruses was only 35.3 to 38.8 percent. A dendrogram was also constructed to group the strains into clusters according to host species: human, rat, and a distinct third cluster consisting exclusively of the Brazilian porcine RV-B strains. This is the first study of the porcine RV-B NSP2 gene that contributes to the partial characterization of this virus and demonstrates the relationship among RV-B strains from different host species.

Alterações histológicas da pars esophagea de suínos e sua relação com Helicobacter spp / Histological findings in swine pars esophagea and its Helicobacter spp. relationship

A relação entre Helicobacter spp. e a presença de alterações histológicas na pars esophagea de suínos foi avaliada em 67 estômagos de animais em idade de abate. Para a identificação das helicobactérias, utilizou-se a técnica da PCR com primers específicos para o gênero Helicobacter. As alterações histológicas foram identificadas e classificadas como ulceração, erosão, degeneração epitelial, alongamento de papilas, hiperplasia, paraqueratose, intensidade do infiltrado inflamatório e aumento do número de folículos linfoides. As alterações mais frequentemente encontradas na pars esophagea foram a degeneração epitelial e o alongamento de papilas, observadas em 83,5 por cento (n=56) das amostras analisadas. Em 77,5 por cento (n=52) das amostras, observou-se paraqueratose e em 61,1 por cento (n=41) hiperplasia epitelial. Quarenta e sete (70,1 por cento) foram positivas na PCR para Helicobacter spp. Nessas amostras a erosão foi a lesão mais observada (40,2 por cento), seguida de ulceração da mucosa (11,9 por cento). Em 58,2 por cento das amostras positivas na PCR, não foram observadas ulcerações de mucosa. Observou-se associação significativa (P=0,003) entre a presença de Helicobacter spp. e a degeneração epitelial da pars esophagea de suínos em idade de abate.

The association between histological findings of gastric mucosa in pigs at slaughtering age and the presence of Helicobacter spp., identified by PCR, assay was investigated. Stomachs from 67 pigs were examined. Histological changes of pars esophagea were identified and classified as gastric ulcers, erosion, degeneration, distortion of papils, hyperplasia, paraqueratosis, and number of lymphoid follicles. Microscopic analysis revealed the most frequent alteration: 83.5 percent (n= 56) stomachs with epithelial degeneration and distortion of papils. Paraqueratosis of pars esophagea was observed in 77.5 percent (n=52) of the samples and epithelial hyperplasia in 61 percent (n=41). Forty-seven (70.1 percent) pigs were positive to Helycobacter spp. by PCR. Erosion of pars esophagea and ulceration were the most frequent findings in Helicobacter spp. PCR-positive pigs, occurring, respectively, in 40.2 percent and 11.9 percent. The frequency of animals without ulceration and Helicobacter spp. PCR-positive was 58.2 percent. It was observed a significant association (P=0.003) between Helicobacter spp. and epithelial degeneration of gastric mucosa in pigs at slaughtering age.

Molecular analysis of the bovine coronavirus S1 gene by direct sequencing of diarrheic fecal specimens

Bovine coronavirus (BCoV) causes severe diarrhea in newborn calves, is associated with winter dysentery in adult cattle and respiratory infections in calves and feedlot cattle. The BCoV S protein plays a fundamental role in viral attachment and entry into the host cell, and is cleaved into two subunits termed S1 (amino terminal) and S2 (carboxy terminal). The present study describes a strategy for the sequencing of the BCoV S1 gene directly from fecal diarrheic specimens that were previously identified as BCoV positive by RT-PCR assay for N gene detection. A consensus sequence of 2681 nucleotides was obtained through direct sequencing of seven overlapping PCR fragments of the S gene. The samples did not undergo cell culture passage prior to PCR amplification and sequencing. The structural analysis was based on the genomic differences between Brazilian strains and other known BCoV from different geographical regions. The phylogenetic analysis of the entire S1 gene showed that the BCoV Brazilian strains were more distant from the Mebus strain (97.8 percent identity for nucleotides and 96.8 percent identity for amino acids) and more similar to the BCoV-ENT strain (98.7 percent for nucleotides and 98.7 percent for amino acids). Based on the phylogenetic analysis of the hypervariable region of the S1 subunit, these strains clustered with the American (BCoV-ENT, 182NS) and Canadian (BCQ20, BCQ2070, BCQ9, BCQ571, BCQ1523) calf diarrhea and the Canadian winter dysentery (BCQ7373, BCQ2590) strains, but clustered on a separate branch of the Korean and respiratory BCoV strains. The BCoV strains of the present study were not clustered in the same branch of previously published Brazilian strains (AY606193, AY606194). These data agree with the genealogical construction and suggest that at least two different BCoV strains are circulating in Brazil.

RT-PCR em pools de soros sangüíneos para o diagnóstico da infecção aguda e de animais persistentemente infectados pelo vírus da diarréia viral bovina / RT-PCR in pools of bovine blood serum to detect acute infection and persistently infected animals with bovine viral diarrhea virus

Utilizou-se a técnica da RT-PCR para a detecção da região 5' UTR do genoma do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) em pools de soros sangüíneos provenientes de um rebanho, constituído por 226 animais, que apresentava distúrbios da reprodução. A partir das amostras individuais de soro e de acordo com a categoria dos animais e o número de animais por categoria foram formados 10 pools (A a J) de soros. A primeira avaliação revelou a amplificação de um produto com 290pb nas reações referentes aos grupos D (35 vacas) e H (25 bezerros lactentes) que, após o desmembramento em amostras individuais, resultou na identificação de 11 vacas lactantes e 12 bezerros em amamentação positivos. Para a identificação de animais persistentemente infectados (PI) entre os 23 positivos na primeira avaliação, realizou-se a segunda colheita de soros sangüíneos, três meses após. A RT-PCR das amostras individuais de soro revelou resultado positivo em cinco bezerros. Em dois, foi possível isolar o BVDV em cultivo de células MDBK. A especificidade das reações da RT-PCR foi confirmada pelo seqüenciamento dos produtos amplificados a partir do soro de uma vaca com infecção aguda, de um bezerro PI e das duas amostras do BVDV isoladas em cultivo celular. A utilização da RT-PCR em pools de soros sangüíneos demonstrou ser uma estratégia rápida de diagnóstico etiológico e de baixo custo tanto para a detecção de infecção aguda quanto de animais PI.

The 5' untranslated region of the bovine viral diarrhea virus (BVDV) genome was detected by RT-PCR assay in pools of blood sera samples collected from a cattle herd (n=226 animals) with reproductive failures. Based on the classes of animal and the number of animals per class, the individual blood serum samples were distributed in 10 sera pools (A to J). During the first evaluation a 290bp amplicon was amplified in reactions from groups D (35 cows) and H (25 sucking calves). The individual analysis of serum from groups D and H resulted in positive reactions in serum samples from 11 cows and 12 calves. For the identification of persistently infected (PI) animals, three months after the first examination, blood serum samples from 23 positive animals were reevaluated by RT-PCR, resulting in five positive calves. In two of these calves the BVDV was isolated in MDBK cell culture. The specificity of RT-PCR amplicons from one cow with acute infection, one PI calf, and two wild type BVDV strains isolated in cell culture were confirmed by nucleotide sequencing. The use of RT-PCR in pools of blood sera proved to be a quick and low cost strategy for the etiological diagnosis of the acute infection as well as to detect PI animals thereby favoring the implementation of control and prophylaxis measures.

Avaliação da urina e de leucócitos como amostras biológicas para a detecção ante mortem do vírus da cinomose canina por RT-PCR em cães naturalmente infectados / Evaluation of the urine and leucocytes as biological samples for ante mortem detection of canine distemper virus by RT-PCR assay in naturally infected dogs

Urine and leucocytes were comparatively evaluated as clinical samples for ante mortem detection of the canine distemper virus (CDV) by a reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay. One hundred and eighty eight dogs with clinical symptoms of distemper, were distributed in three groups. The group A was constituted of 93 dogs with systemic signs of distemper; the group B by 11 dogs with neurological signs, and the group C by 84 dogs that presented simultaneously systemic and neurological signs. In 66.5 percent (125/188) of the dogs was amplified an amplicon with 287 base pair of the CDV nucleoprotein gene. In 60.8 percent (76/125) of the animals the CDV was detected simultaneously in the urine and leucocytes, and in 39.2 percent (49/125) of the dogs just a type of clinical sample (urine: n=37; leucocytes: n=12) was positive. These results demonstrate that the different forms of clinical distemper disease can hinder the choice of only one type of clinical sample to carry out the ante mortem etiological diagnosis of CDV infection, and false-negative results can be generated.

Perfil de restrição de um fragmento do gene da hemaglutinina amplificado pela RT-PCR a partir de estirpes vacinais e selvagens do vírus da cinomose canina / Restriction pattern of a hemagglutinin gene amplified by RT-PCR from vaccine strains and wild-type canine distemper virus

Fragmentos com 721 pares de bases do gene da hemaglutinina (H) do vírus da cinomose canina (CDV), amplificados pela RT-PCR a partir de três estirpes vacinais (Snyder Hill, Onderstepoort e Rockborn) e de 27 amostras de campo, provenientes de cães com cinomose, foram clivados com as endonucleases Hinf I and Rsa I. A seleção das enzimas foi realizada por meio de análises in silico de seqüências do CDV depositadas em bases públicas de dados. Tanto as estirpes vacinais quanto as amostras selvagens do CDV apresentaram com a enzima Hinf I o mesmo perfil de restrição, confirmando a identidade do fragmento amplificado pela RT-PCR, uma vez que todas as estirpes com seqüências disponíveis (GenBank) têm sítios de restrição para essa enzima nas mesmas posições. O perfil de restrição das estirpes vacinais Snyder Hill e Onderstepoort, que diferem entre si, foi confirmado com a enzima Rsa I que também clivou a estirpe Rockborn nas mesmas posições que a estirpe Snyder Hill. Todas as 27 amostras de campo do CDV apresentaram com a enzima Rsa I o mesmo perfil de restrição, indicando conservar os mesmos sítios de restrição para essa enzima. O perfil das amostras de campo foi diferente daquele obtido nas três estirpes vacinais. Os perfis de restrição do gene que codifica a hemaglutinina do CDV, gerados pela enzima Rsa I, sugerem diferenças moleculares entre as estirpes vacinais e as selvagens circulantes na região norte do estado do Paraná e abrem a perspectiva da elaboração de análises moleculares comparativas mais complexas, como o seqüenciamento de todo o gene H, de estirpes do CDV identificadas em diferentes regiões brasileiras.

The restriction fragment length polymorphism (RFLP) assay of a 721 bp fragment from hemagglutinin (H) gene of canine distemper virus (CDV) amplified by RT-PCR was analyzed with Hinf I and Rsa I enzymes. Clinical samples from 27 dogs with natural canine distemper infection, and three vaccine (Snyder Hill, Onderstepoort and Rockborn) CDV strains were analyzed. All RT-PCR amplified product from CDV wild-type and vaccine-strains had the same RFLP pattern with Hinf I enzyme showing the amplicon specificity. The RFLP pattern for CDV vaccine-strains generated with Rsa I enzyme was the expected by in silico analysis. All 27 wild-type CDV strains present the same Rsa I enzyme RFLP pattern that was different from vaccine-strains pattern, suggesting molecular differences between vaccine-strains and wild-type of CDV from dogs population in North region of Paraná State/Brazil. These results open the perspectives of the accomplishment of comparative molecular analysis, such as sequencing of the whole gene H, of CDV wild-type strains identified in different Brazilian regions.

Detecção de ácidos nucléicos de Brucella spp., Leptospira spp., herpesvirus bovino e vírus da diarréia viral bovina, em fetos bovinos abortados e em animais mortos no perinatal / Detection of Brucella spp., Leptospira spp., bovine herpesvirus and bovine viral diarrhea virus nucleic acids in aborted fetuses and bovines dead perinatal

Samples of 114 bovine fetuses and 10 calves, which dead in perinatal period, were examined for detection of DNA. The most common detected agent was Brucella spp. in 17 samples (13.7 percent) followed by Leptospira spp. in 4 cases (3.2 percent),bovine herpesvirus (BHV) and bovine viral diarrhea (BVDV) in 3 animals (2.4 percent) each, and 1 for the association of BVDV and BHV. In 77.4 percent (96/124) of the samples it was not possible to detect any agent.

Dairy cow abortion associated with Neospora caninum and other infectious agents

Trinta e cinco vacas de rebanhos leiteiros da região Norte do estado do Paraná, com histórico de abortamento, foram pesquisadas sorologicamente para verificar a presença de anticorpos contra Neospora caninum, Toxoplasma gondii, Leptospira spp., Brucella abortus, BHV-1 e BVDV. Vinte e uma vacas apresentaram títulos sorológicos compatíveis com infecção. Todas elas, soropositivas para N. caninum, foram também soropositivas para outros agentes infecciosos, sugerindo a possibilidade de associação desses agentes nos problemas reprodutivos de bovinos, no estado do Paraná.

Efeito da concentração de ácido 3-indol-acético na ativação e crescimento in vitro de folículos pré-antrais ovinos / Effect of indol acetic acid concentration in the activation and growth of ovine preantral follicles

Avaliou-se o desenvolvimento de folículos pré-antrais ovinos após o cultivo in vitro do córtex ovariano em várias concentrações de ácido 3-indol acético (IAA). O córtex ovariano foi dividido em fragmentos de aproximadamente 3 3mm. Um fragmento foi imediatamente fixado em Bouin (controle - dia 0) e os demais destinados ao cultivo por dois ou seis dias em meio essencial mínimo (MEM+) acrescido de 10, 40, 100, 500 ou 1000ng/ml de IAA. Após o cultivo in vitro, não houve variação entre folículos dos tratamentos e folículos-controle, exceto nos suplementados com 40ng/ml de IAA. Nestes observaram-se redução de folículos primordiais e aumento de folículos em desenvolvimento (P<0,05). Em relação aos folículos do grupo-controle, houve redução de pré-antrais normais no cultivo de seis dias (P<0,05). Após dois dias de cultivo, a redução foi observada somente nos folículos suplementados com 500 ou 1000ng/ml de IAA. Folículos pré-antrais ovinos podem ser ativados in vitro com sucesso após o cultivo em MEM+ suplementado com 40ng/ml de IAA.

Detecção do gene da nucleoproteína do vírus da cinomose canina por RT-PCR em urina de cães com sinais clínicos de cinomose / Detection of canine distemper virus nucleoprotein gene by RT-PCR in urine of dogs with distemper clinical signs

A presença do vírus da cinomose canina (CDV) foi avaliada pela reação em cadeia da polimerase, precedida de transcrição reversa (RT-PCR), em 87 amostras de urina de cães que apresentavam sinais clínicos sugestivos de cinomose. Os animais foram distribuídos em três grupos. No grupo A foram incluídos 41 cães com alterações sistêmicas; no grupo B, 37 cães com alterações neurológicas; e no grupo C, nove cães com alterações sistêmicas e neurológicas simultâneas. O grupo D (controle) foi composto por 20 cães assintomáticos. Os resultados da RT-PCR foram correlacionados com a forma clínica da infecção e com as alterações hematológicas encontradas. Foi possível a amplificação parcial do gene da nucleoproteína do CDV em 41 (47,1 por cento) das 87 amostras de urina provenientes de cães com sinais clínicos sugestivos de cinomose. Todas as amostras obtidas de animais assintomáticos foram negativas na RT-PCR. Amostras positivas foram encontradas nos três grupos de animais com sinais clínicos na proporção de 51,2 por cento (24/41), 29 por cento (11/37) e 100 por cento (9/9) para os grupos A, B e C, respectivamente. A leucocitose foi a alteração hematológica mais freqüente nos três grupos de cães com sinais clínicos porém, não foi possível estabelecer correlação entre o resultado da RT-PCR e as alterações hematológicas. Os resultados demonstraram que, independente da forma de apresentação clínica, a técnica da RT-PCR realizada em urina pode ser utilizada no diagnóstico ante mortem da infecção pelo CDV.

Efeito do dimetildioctadecilamônio na resposta imune humoral e celular de cobaios inoculados com o herpesvírus bovino-1 inativado / Effect of dimethyl dioctadecyl ammonium chloride on the humoral and cellular response to inactivated bovine herpesvirus-1 in guinea pigs

Avaliou-se o potencial adjuvante do cloreto de dimetildioctadecilamônio (DDA cloreto) em estimular as respostas imune humoral e celular, do tipo hipersensibilidade cutânea tardia (DTH), em cobaios que receberam preparações de antígeno contendo o herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) inativado. Os animais foram vacinados com o BHV-1 em cinco diferentes formulações, representadas pelos grupos: A- adjuvante completo / incompleto de Freund, B- hidróxido de alumínio (Al(OH)3), C- DDA cloreto, D- associação Al(OH)3 / DDA cloreto e E- BHV-1 em solução aquosa sem adjuvante. Os animais do grupo F, grupo-controle negativo, foram inoculados apenas com meio de cultivo celular. Os maiores títulos de anticorpos neutralizantes do BHV-1, expressos em log2, foram obtidos nos grupos D, A e C, com títulos de 6,25, 6,0 e 5,25, respectivamente. Na avaliação da DTH, os maiores aumentos na espessura da dobra da pele foram observados nos grupos A (2,4mm), C (1,8mm) e D (1,1mm). O DDA cloreto, utilizado tanto de forma isolada quanto em associação, determinou a potencialização das respostas imunológicas humoral e celular de cobaios imunizados com o BHV-1 inativado.

Lesões histológicas no sistema nervoso central de cães com encefalite e diagnóstico molecular da infecção pelo vírus da cinomose canina / Histopathological lesions in the central nervous system of dogs with encephalitis and molecular diagnosis of canine distemper virus infection

Dez amostras de urina de cães que apresentavam sinais clínicos sistêmicos e neurológicos indicativos da infecção pelo vírus da cinomose canina (CDV) foram analisadas pela técnica da reação em cadeia pela polimerase precedida de transcrição reversa (RT-PCR) para a detecção do RNA do CDV. O exame histopatológico foi realizado em fragmentos de cérebro, cerebelo e bexiga. Como controle negativo foram colhidos fragmentos de órgãos e urina de quatro cães sem sinais clínicos de doença infecciosa e que morreram por outras causas. Todos os cães (9/10) positivos em RT-PCR apresentaram alterações histológicas no cérebro e cerebelo, características de encefalite aguda (5/9) ou crônica (4/9) compatíveis com as causadas pelo CDV. Um dos cães com alterações clínicas neurológicas semelhantes às observadas em cinomose foi negativo na RT-PCR e apresentou alterações histopatológicas inespecíficas. Nas amostras de bexiga não foram observadas lesões histológicas. Todas as amostras biológicas provenientes dos cães-controle foram negativas na RT-PCR (urina) e não apresentaram alterações histológicas (fragmentos de órgãos). O trabalho evidenciou a especificidade da RT-PCR no diagnóstico precoce e ante mortem na infecção pelo CDV.

Hematological changes in sheep inoculated with natural and cobalt 60- irradiated Crotalus durissus terrificus venom (Laurenti, 1768)

Natural (NV)and cobalto 60-irradiated (IrV) Crotalus durissus terrificus venom were used to evaluate serum production capacity of sheep and possible hematological and biochemical effects. Freeze-dried venom aliquots were diluted in acidified saline solution (NaCl 150 mM, pH 3.0) and irradiated by a Cobalt 60 source at a dose of 5.54 x 102 Gy/h and a concentration of 2.000 Gy. Twelve sheep were divided into two groups of six animals. One group received irradiated venom (IrV) and the other natural venom (NV). Three antigen doses (venom) were administered at monthly intervals. Blood samples were collected weekly for analysis of serum neutralization potency and capacity, complete blood count (CBC), total plasma protein, fibrinogen, albumin, and globulin. At the end of the experiment, the animals were challenged with a LD50 for sheep and showed no signs of envenoming. The two groups did not present clinical alterations. Results of the total leukocyte count did not present interaction or time factor effect for both groups, but there was a different action between them, with the NV group presenting more cells than the IrV group. The leukocyte increase to 13,000/µl indicates that slight leukocytosis occurred in the week after the first inoculation in the NV group. There was no statistically significant difference between groups in the absolute count of segmented neutrophils, eosinophils, and lymphocytes but there were statistically significant oscillations in values ant the different collecting times. The NV group presented an increase in the absolute neutrophil count after the first inoculation that persisted for 5 weeks. In the IrV group, the increase in neutrophils occured only in the first week returning to normal in the following weeks. The alterations in the neutrophil count are indicative of systemic inflammatory response related to cytokine release; response was more marked in the NV group, showing its greater toxicity.

Achados histológicos em fetos bovinos abortados e näo abortados / Histological findings in aborted and non-aborted cattle fetuses

Tissue fragments from 17 non-aborted and 93 aborted fetuses were histologically studied. No histological lesions were observed in non-aborted fetuses, and 51.6 percent of the aborted fetuses presented histological lesions. The main lesions were: focal gliosis and mononuclear infiltrate in liver, CNS, lungs and muscular tissues