Detecção molecular de Anaplasma platys, Ehrlichia canise Babesia spp. em cães atendidos em clínica da região metropolitana do estado do Rio de Janeiro / Molecular detection of Anaplasma platys, Ehrlichia canis and Babesia spp. in dogs served at a clinic in the metropolitan region of the state of Rio de Janeiro

O presente estudo teve como objetivo detectar por meio da Reação em cadeia da Polimerase (PCR) a frequência de Ehrlichiacanis, Babesia spp. e Anaplasma platys em cães, relacionando a prevalência dos achados hematológicos aos resultados positivos pela PCR. Foram avaliadas 209 amostras de sangue de cães atendidos em clínica veterinária particular do município de Queimados, RJ, Brasil, no período de julho a outubro de 2014. Foram realizados hemograma completo e extração de DNA para técnica de PCR. Do total de 209 animais, 19,1% (40/209) animais apresentaram resultado positivo para hemoparasitos pela técnica de PCR. Destes, 52,5% (21/40) foram positivos para E. canis, 27,5% (11/40) positivos para Babesia spp. e 10% (4/40) positivos para A. platys. Quatro animais (1,91%), dos 209 testados, foram positivos para pelo menos dois agentes, caracterizando assim coinfecção. Dos 40 cães positivos para algum dos agentes testados, 25 (62,5%) estavam trombocitopênicos. Ou seja, 15 cães (37,5%) reagiram positivos para hemoparasitos, mas não apresentavam trombocitopenia. A anemia foi um achado comum, sobretudo nas infecções por Babesia spp., 100% (11/11) e E.canis, 90,5% (19/21). A técnica de PCR foi um importante método diferencial na detecção das principais hemoparasitoses caninas, juntamente com os achados clínicos e hematológicos para o diagnóstico preciso da infecção em questão.

The present study aimed to detect, by means of Polimerase chain reaction (PCR), the frequency of Ehrlichia canis, Babesia spp. and Anaplasma platys in dogs, relating the prevalence of hematological findings to positive PCR results. A total of 209 blood samples from dogs treated at a private veterinary clinic in the city of Queimados, RJ, Brazil, from July to October 2014 were evaluated. Complete blood count and DNA extraction were performed for the PCR technique. Of the total of 209 animals, 19.1% (40/209) animals were positive for hemoparasites by the PCR technique. Of these, 52.5% (21/40) were positive for E. canis, 27.5% (11/40) were positive for Babesia spp. and 10% (4/40) positive for A. platys. Four animals (1.91%) of the 209 tested were positive for at least two agents, thus characterizing coinfection. Of the 40 dogs positive for any of the agents tested, 25 (62.5%) were thrombocytopenic. That is, 15 dogs (37.5%) were positive for hemoparasites, but did not have thrombocytopenia. Anemia was a common finding, especially in infections by Babesia spp., 100% (11/11) and E. canis, 90.5% (19/21). The PCR technique was an important differential method in the detection of the main canine hemoparasitoses, together with the clinical and hematological findings for the accurate diagnosis of the infection in question.

Aspectos epidemiológicos da infecção por Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Mycoplasma spp. em gatos domésticos / Epidemiological aspects of infection by Ehrlichia canis, Anaplasma platys and Mycoplasma spp. in domestic cats

Hemoparasitoses vêm se tornando cada vez mais importantes na clínica médica de pequenos animais. Dentre os agentes causadores encontramos Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys., e Mycoplasma spp., torna-se de grande importância conhecer a epidemiologia nos gatos domésticos. Objetivou-se com esta pesquisa fazer um levantamento retrospectivo de fichas de gatos advindos de consultas no Hospital Veterinário Mário Dias Teixeira (HOVET) que realizaram exame de Reação de Cadeia da polimerase (PCR) no laboratório de biologia molecular, na Universidade Federal Rural da Amazônia, no ano de 2018 e 2019. No total foram 72 amostras de gatos domésticos processadas, sendo 33 machos e 39 fêmeas, 70 animais SRD e 2 Siameses, todos com trombocitopenia, além de outros sinais clínicos que os levaram a precisar de atendimento veterinário, foram categorizados os meses de entrada e processamento das amostras, bairros dos animais e grupos etários. De todos os animais testados, 34,7% obtiveram diagnóstico positivo para uma das enfermidades, sendo o gênero Mycoplasma spp. o que mais prevaleceu em amostras positivas, com maior frequência em fêmeas adultas, bem como foi descrita ocorrência de E. canis apenas nesse sexo, já A. platysfoi descrito com maior frequência em machos, além de achados de infecções concomitantes observado entre os agentes Anaplasmae Mycoplasma. Concluímos que os gatos atendidos no HOVET possuíam parasitismo por diferentes agentes infecciosos.

Hemoparasitosis have become increasingly important in the small animals' internal medicine. Among the causal agents, there are Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys. and Mycoplasma spp., which give the understanding of the epidemiology in domestic cats a great significance. This research aimed to make a retrospective survey of records from cats that came from appointments at the Veterinary Hospital Mário Dias Teixeira (HOVET) and underwent the Polymerase Chain Reaction (PCR) test at the molecular biology laboratory, at the Amazônia Federal Rural University (UFRA), in the years of 2018 and 2019. In total, 72 samples of domestic cats were processed, from which 33 were males and 39 females, 70 of them were mongrel cats and 2 siamese, all of them showed thrombocytopenia amongst other clinical signs that led them to need a veterinary appointment, the months of admission, processing of the samples, districts the animals came from and age group were categorized. 34,7% of all the animals tested showed positive results for one of the diseases, with the genus Mycoplasma spp. being the most prevalent in positive samples, showing a higher rate in adult females, as the occurrence of E. canis was reported only in females, while A. platys was reported with a higher rate in males, as well as concomitant infections following the observation of the agents Anaplasma and Mycoplasma. In conclusion, the cats admitted at HOVET showed parasitism by different infectious agents.

Molecular evaluation of piroplasms and hematological changes in canine blood stored in a clinical laboratory in Niterói, Rio de Janeiro / Avaliação molecular de piroplasmídeos e alterações hematológicas em amostras de sangue de cães armazenadas em laboratório de análises clínicas de Niterói, Rio de Janeiro

Abstract Piroplasm species were analyzed by molecular tools in total 31 blood samples from positive dogs, previously checked by stained slides, stored until DNA extraction between 2016 to 2018 in the laboratory Clinical Analyzes in Niterói, Rio de Janeiro. The piroplasms were identified by PCR, targeting the 18S rRNA gene and sequencing. From the total number of samples only 24 (77.4%) were positive and show adequate nucleotide sequences for interpretation with identity between 93%-100% with Babesia vogeli in compared to the sequences isolated of infected dogs from other states in Brazil deposited on GenBank. Most of dogs infected with B. vogeli had anemia (62.5%) and thrombocytopenia (95.8%). The findings of this study are compatible with previous reports in the literature and highlight B. vogeli as the most incriminated species in canine piroplasmosis in Brazil, and thrombocytopenia the hematological alteration most frequently identified in this infection. It is important to note that this is the first study involving the molecular characterization of piroplasms in the metropolitan region of Rio de Janeiro, based on PCR followed by sequencing.

Resumo Espécies de piroplasmídeos foram analisadas por meio de métodos moleculares, em 31 amostras de sangue de cães, previamente verificadas em lâminas coradas, estocadas até a extração de DNA entre 2016 a 2018 em laboratório de Análises Clínicas, em Niterói, Rio de Janeiro. Os piroplasmídeos foram identificados pela PCR, utilizando-se como alvo o gene 18S RNAr e, posteriormente, o sequenciamento. Do total de amostras analisadas, somente 24 (77,4%) foram positivas e apresentaram sequências nucleotídicas adequadas para interpretação com identidade variando entre 93% a 100% com B. vogeli, em comparação com as sequências isoladas de cães infectados de outros estados do Brasil, depositadas no GenBank. A maioria das amostras de sangue dos cães detectados com B. vogeli apresentaram, no hemograma, anemia (62,5%) e trombocitopenia (95,8%). Os resultados detectados neste estudo estão compatíveis com o evidenciado na literatura, pois B. vogeli tem sido a espécie mais relatada nas infecções caninas no Brasil, sendo a trombocitopenia a alteração hematológica mais evidenciada nas amostras analisadas. É importante ressaltar que este é o primeiro estudo envolvendo análise molecular e caracterização de piroplasmídeos, em amostras de sangue de cães da região metropolitana do Rio de Janeiro, utilizando-se a PCR associada ao sequenciamento.

Surveillance of phlebotomine fauna and Didelphis marsupialis (Didelphimorphia: Didelphidae) infection in an area highly endemic for visceral leishmaniasis in Colombia / Vigilancia de la fauna flebotomínea e infección de Didelphis marsupialis (Didelphimorphia: Didelphidae) en un área de alta endemia de leishmaniasis visceral en Colombia

Abstract Introduction: The study of the interaction between the parasite, the vector and the mammalian hosts, including man, allows to understand the behavior of the leishmaniases. Objective: To determine the presence of Lutzomyia species and to detect the Leishmania infection in Didelphis marsupialis in an endemic area for visceral leishmaniasis. Materials and methods: Phlebotomine fauna and individuals of D. marsupialis were collected with CDC and Tomahawk™ traps, respectively. The species of Lutzomyia were identified using the Young and Duncan key (1994). Ear and tail biopsies and blood samples from D. marsupialis were taken to identify the Leishmania species by amplifying a fragment of the gene associated with the 70 kD heat shock protein. Results: Seven Lutzomyia species were identified: Lu. evansi, Lu. gomezi, Lu. panamensis, Lu. dubitans, Lu. cayennensis cayennensis, Lu. rangeliana and Lu. trinidadensis. The first three species have epidemiological importance in Colombia because of their implications in the transmission of the Leishmania parasite. Sixty-five tissue samples from 19 D. marsupialis individuals were negative for Leishmania spp. Conclusions: The presence of the Lutzomyia species that have been identified as vectors for Leishmania inside and around houses in the village of El Bledo, in El Carmen de Bolívar represents a risk of infection. Furthermore, the presence of Lu. panamensis is reported for first time in El Carmen de Bolívar in Colombia. Although the lack of detection of Leishmania spp. in D. marsupialis samples may suggest that D. marsupialis does not play an important role in the transmission cycle of Leishmania in this region, it is necessary to carry out further longitudinal studies to confirm this hypothesis.

Resumen Introducción. El estudio de la interacción entre el parásito, el vector y los huéspedes mamíferos, incluido el hombre, permite entender el comportamiento de la leishmaniasis. Objetivo. Determinar la presencia de especies del género Lutzomyia y detectar la infección por Leishmania spp. en Didelphis marsupialis en un área endémica de leishmaniasis visceral. Materiales y métodos. Se recolectaron flebotomíneos y D. marsupialis con trampas CDC y Tomahawk™, respectivamente. Las especies de Lutzomyia se identificaron usando la clave de Young y Duncan, 1994. Se tomaron biopsias de oreja, cola y muestras de sangre de D. marsupialis para diagnosticar Leishmania spp. mediante la amplificación de un fragmento del gen de la proteína de choque térmico de 70 kD. Resultados. Se identificaron siete especies de Lutzomyia: Lu. evansi, Lu. gomezi, Lu. panamensis, Lu. dubitans, Lu. cayennensis cayennensis, Lu. rangeliana y Lu. trinidadensis. Las tres primeras especies son reconocidas como vectores en el país por estar implicadas en la transmisión de Leishmania spp. En total, 65 muestras de tejidos de oreja, cola y de sangre provenientes de 19 D. marsupialis fueron negativas para Leishmania spp. en la PCR-HSP70. Conclusiones. La presencia de flebotomíneos con importancia epidemiológica en la zona evaluada representa un riesgo de transmisión. Asimismo, Lu. panamensis es reportada por primera vez en El Bledo (Carmen de Bolívar). La ausencia de Leishmania spp. en D. marsupialis podría sugerir que esta especie no tiene un papel importante en el ciclo de transmisión de Leishmania en la vereda El Bledo, por lo que es necesario profundizar en estudios longitudinales para corroborar esta hipótesis.

Detection of Trypanosoma cruzi strains circulating in Córdoba department (Colombia) isolated from triatomines (Hemiptera: Reduviidae) collected by the community / Detección y caracterización molecular de cepas de Trypanosoma cruzi aisladas de triatominos recolectados por la comunidad en el departamento de Córdoba, Colombia

Abstract Introduction: From 2011 to 2016, 24 cases of Chagas disease were reported in Córdoba according to the national public health surveillance system (Sistema Nacional de Vigilancia en Salud Pública, Sivigila), but the information regarding Trypanosoma cruzi circulating strains and infection rates are unknown. Objectives: To establish the triatomine species with which people come in contact and recognize as Chagas disease vectors, as well as to assess the infection with trypanosomes and make an exploratory approach to host feeding preferences with the participation of the local community. Materials and methods: Triatomines sampling was conducted in 12 municipalities between 2011 and 2016; T. cruzi infection was established by k-PCR, SAT-PCR, while strain genotyping was done by mini-exon and SL-IR (spliced-leader intergenic region) sequence characterization. We also screened for blood sources. Results: Local community members collected the majority of triatomines and we identified three species: Rhodnius pallescens, Panstrongylus geniculatus, and Eratyrus cuspidatus. The overall T. cruzi infection rate in collected triatomines was 66.6% and we detected the TcIDOM and TcI sylvatic strains. Community-based insect collection allowed reporting the presence of P. geniculatus in two new disperse rural settlements, T. cruzi infection of P. geniculatus in Córdoba, and the first report of triatomines infected with T. cruzi in Montería municipality. Conclusions: These results revealed the presence of triatomines infected with T. cruzi inside dwellings in five municipalities of Córdoba. The dominant circulating T. cruzi strain was TcIDOM, a genotype associated with human Chagas disease and cardiomyopathies in Colombia. Our results highlight the importance of local community participation in entomological surveillance tasks.

Resumen Introducción. Entre el 2011 y el 2016, se reportaron 24 casos de enfermedad de Chagas en Córdoba, según el Sistema Nacional de Vigilancia en Salud Pública (Sivigila), pero la información sobre las unidades discretas de tipificación de Trypanosoma cruzi circulantes y las tasas de infección se desconoce. Objetivos. Identificar las especies de triatominos con las cuales las personas entran en contacto y que reconocen como vectores de la enfermedad de Chagas, así como establecer la infección por tripanosomas y explorar posibles fuentes de alimentación de los triatominos con la participación de la comunidad. Materiales y métodos. El muestreo de triatominos se hizo en 12 municipios entre el 2011 y el 2016. T. cruzi se detectó mediante las técnicas de kinetic-polymerase chain reaction (k-PCR) y serial amplification of targets-polymerase chain reaction (SAT-PCR), en tanto que la genotipificación de las cepas se logró mediante la caracterización de secuencias de genes miniexon y de la región intergénica SL-IR (Spliced-Leader Intergenic Region). Se evaluaron, asimismo, las fuentes de alimento. Resultados. La mayoría de los triatominos fue recolectada por miembros de la comunidad y se identificaron tres especies: Rhodnius pallescens, Panstrongylus geniculatus y Eratyrus cuspidatus. La tasa de infección general por T. cruzi fue de 66,6 % y se detectaron las cepas TcIDOM y TcI sylvatic. La participación de la comunidad permitió reportar la presencia de P. geniculatus en dos nuevas localidades, la infección con T. cruzi de P. geniculatus en Córdoba y reportar por primera vez triatominos infectados con T. cruzi en Montería. Conclusiones. Se demostró la presencia de triatominos infectados con T. cruzi dentro de las viviendas en cinco municipalidades. La cepa circulante dominante fue T. cruzi TcIDOM, asociada con la enfermedad de Chagas y con cardiomiopatías en Colombia. Los resultados resaltan la importancia de vincular a miembros de la comunidad en la vigilancia entomológica.

Sympatry influence in the interaction of Trypanosoma cruzi with triatomine

Abstract INTRODUCTION: Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, is widely distributed in nature, circulating between triatomine bugs and sylvatic mammals, and has large genetic diversity. Both the vector species and the genetic lineages of T. cruzi present a varied geographical distribution. This study aimed to verify the influence of sympatry in the interaction of T. cruzi with triatomines. Methods: The behavior of the strains PR2256 (T. cruzi II) and AM14 (T. cruzi IV) was studied in Triatoma sordida (TS) and Rhodnius robustus (RR). Eleven fifth-stage nymphs were fed by artificial xenodiagnosis with 5.6 × 103 blood trypomastigotes/0.1mL of each T. cruzi strain. Every 20 days, their excreta were examined for up to 100 days, and every 30 days, the intestinal content was examined for up to 120 days, by parasitological (fresh examination and differential count with Giemsa-stained smears) and molecular (PCR) methods. Rates of infectivity, metacyclogenesis and mortality, and mean number of parasites per insect and of excreted parasites were determined. RESULTS: Sympatric groups RR+AM14 and TS+PR2256 showed higher values of the four parameters, except for mortality rate, which was higher (27.3%) in the TS+AM14 group. General infectivity was 72.7%, which was mainly proven by PCR, showing the following decreasing order: RR+AM14 (100%), TS+PR2256 (81.8%), RR+PR2256 (72.7%) and TS+AM14 (36.4%). CONCLUSIONS: Our working hypothesis was confirmed once higher infectivity and vector capacity (flagellate production and elimination of infective metacyclic forms) were recorded in the groups that contained sympatric T. cruzi lineages and triatomine species.

PREVALENCE OF CHAGAS DISEASE AMONG BLOOD DONOR CANDIDATES IN TRIANGULO MINEIRO, MINAS GERAIS STATE, BRAZIL / Prevalência de casos de doença de Chagas em candidatos a doação de sangue na região do Pontal do Triângulo Mineiro, Brasil

Despite public health campaigns and epidemiological surveillance activities, Chagas disease remains a major health problem in Latin America. According to data from the World Health Organization, there are approximately 7-8 million people infected with Trypanosoma cruzi worldwide, a large percentage of which in Latin America. This study aims to examine the serological profile of blood donors in blood banks of Hemominas hematology center, in the town of Ituiutaba, Minas Gerais State, Brazil. The study sample consisted of 53,941 blood donors, which were grouped according to gender and age. Sample collections were performed from January 1991 to December 2011, and 277 donors (0.5%) were considered serologically ineligible due to Chagas disease. Analysis of data showed no significant difference between genders. As for age, the highest proportion of ineligible donors was from 40 to 49 years (30%), and there was a positive correlation between increasing age and the percentage of patients seropositive for Chagas disease. Therefore, adopting strategies that allow the safe identification of donors with positive serology for Chagas disease is essential to reduce or eliminate indeterminate serological results.

A doença de Chagas, apesar das campanhas de saúde pública e das ações de vigilância epidemiológica, ainda constitui-se um sério problema de saúde na América Latina. De acordo com dados divulgados pela Organização Mundial de Saúde, existem cerca de 7 a 8 milhões de pessoas infectadas com Trypanosoma cruzi em todo o mundo, principalmente na América Latina. Este estudo tem por objetivo analisar o perfil sorológico de doadores de sangue dos bancos de sangue do Hemominas de Ituiutaba, Minas Gerais. Os doadores também foram separados de acordo com o sexo e a idade. A amostra do estudo foi composta por 53.941 doadores de sangue durante o período de janeiro de 2001 a dezembro de 2011. Duzentos e setenta e sete doações (0,5%) foram considerados sorologicamente inaptas para a doença de Chagas. Quanto à idade, a maior proporção de doadores impróprios foi de 40 a 49 anos (30%). Os dados não revelaram diferença significativa entre os sexos (p < 0,05). Houve correlação positiva entre o aumento da idade e o percentual de pacientes soropositivos para doença de Chagas. É imprescindível a adoção de estratégias que permitam a identificação segura de um doador com sorologia positiva para doença de Chagas, tentando assim minimizar ou eliminar resultados sorológicos indeterminados.

PCR em tempo real para caracterização de fontes alimentares de flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) / Real-time PCR for the characterization of feeding sources of sand flies (Diptera: Psychodidae)

Os flebotomíneos são insetos hematófagos de grande importância médica e veterinária atuando como vetores de parasitas como Leishmania. O estudo do padrão alimentar desses vetores pode ajudar a compreender a sua interação com potenciais reservatórios de Leishmania. Neste estudo, desenvolvemos ensaios de PCR em tempo real para identificação de sangue em flebotomíneos. Seis pares de primers foram desenhados com base no gene citocromo b de sequencias disponíveis no GenBank dos seguintes hospedeiros potenciais: cão, gato, cavalo, galinha, rato e humano. Primeiramente, os ensaios de PCR em tempo real utilizando SYBR Green foram conduzidos usando uma curva padrão com oito concentrações diferentes (i.e., 10 ng, 1 ng, 100 pg, 10 pg, 1 pg, 100 fg, 10 fg e 1 fg por 2 µl) de amostras do DNA extraído do sangue com EDTA a partir de cada espécie de animal. Em seguida, o DNA foi extraído de 100 fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas de campo pertencentes a três espécies (i.e., Lutzomyia longipalpis, L. migonei e L. lenti) foram testadas pelos protocolos aqui padronizados. Fêmeas de flebotomíneos foram experimentalmente alimentadas em um rato (Rattus rattus) e utilizadas para avaliar a detecção do ensaio. Os protocolos funcionaram de forma eficiente com limites de detecção de 10 pg a 100 fg. Fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas coletadas no campo estavam alimentadas de humanos...

Toxoplasma gondii and Neospora caninum in domestic cats from the Brazilian semi-arid: seroprevalence and risk factors / Toxoplasma gondii e Neospora canimum em gatos no semiárido nordestino: soroprevalência e fatores de risco

In the present study we aimed to establish the seroprevalence of T. gondii and N. caninum in stray and domiciled cats from the municipality of Patos, Paraíba state, Brazil. Blood samples were collected from 201 animals: 132 domiciled cats and 69 stray cats. An epidemiological questionnaire was conducted with all cat owners. Indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) was performed at cut-offs of 1:16 and 1:50 for T. gondii and N. caninum, respectively. Overall prevalence of seroreagent cats for T. gondii was 43.8 percent. We found a prevalence of 47.7percent in domiciled cats and 36.2 percent in stray cats. Antibody titers ranged from 1:16 (cut-off) to 1:8192; 1:128 was the most frequent titer. No statistical difference was observed between domiciled cats and stray cats. Correlation was verified between seroreagent for T. gondii and age and hunting habit (P<0.05). No animals tested seroreagent for N. caninum. It was possible to conclude that there is high prevalence of cat seroreagent for T. gondii and that N. caninum is not present in cats from the area studied...

Este trabalho teve como objetivo determinar frequência de Toxoplasma gondii e Neospora caninum em gatos domiciliados e errantes do município de Patos, mesorregião do sertão paraibano. Foram coletadas amostras de sangue provenientes de 201 gatos, 132 domiciliados e 69 errantes. Nos domiciliados, foi aplicado um questionário epidemiológico aos proprietários. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) foi realizada levando-se em consideração os pontos de corte 1:16 e 1:50 para T. gondii e N. caninum, respectivamente. Foi obtida uma prevalência total de 43.8 por cento de gatos sororreagentes para T. gondii. Nos domiciliados, a prevalência foi de 47,7 por cento (63/132), e nos errantes de 36,2 por cento (25/69), com títulos variando de 1:16 a 1:8192, sendo a titulação 1:128 a mais frequente. Não se observou diferença estatística entre animais domiciliados e errantes. Verificou-se correlação entre sororreagentes a T. gondii e idade e hábito de caçar (P<0.05). Nenhum animal foi sororreagente para N. caninum. Concluiu-se que é alta a prevalência de gatos sororreagentes para T. gondii e que o N. caninum não está presente em gatos na área estudada...

Levantamento da prevalência da babesiose bovina no município de Umuarama, Paraná, Brasil / Assessment of bovine babesiosis, prevalence in the municipality of Umuarama, Paraná, Brazil / Levantamiento de prevalencia de babesiosis bovina en el município de Umuarama, Paraná, Brasil

A babesiose bovina é uma hemoparasitose causada por duas espécies de protozoários, Babesia bovis e Babesia bigemina, que atinge os rebanhos de bovinos em praticamente todo território nacional, sendo responsável por grandes perdas na produtividade dos rebanhos. A transmissão ocorre, principalmente, pelo carrapato Rhipicephalus Boophillus microplus. Os sinais clínicos se caracterizam por anemia intensa, por hemólise extravascular, febre, hemoglobinúria, icterícia e morte. O diagnóstico da babesiose pode ser por meio do exame microscópico de esfregaços de sangue periférico. O objetivo desse trabalho foi estudar a prevalência da babesiose bovina no município de Umuarama. Foram analisados 325 prontuários clí-nicos de bovinos provenientes do município de Umuarama atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Paranaense no período de janeiro de 2003 a dezembro de 2010. A análise revelou que 32,4% foram positivos e 68,6% foram negativos para Babesia spp. Em relação ao sexo dos animais, 30,5% das fêmeas (n=243) e 34,1% dos machos (n=82) foram positivos. Segundo a aptidão zootecnica 27,4% dos bovinos com aptidão para corte (n=164) e 35,4% dos bovinos com aptidão para leite (n=161) foram positivos. Não houve diferença significativa entre os sexos e entre as aptidões (p>0,05). Segundo a subespécie bovina, 23% dos bovinos Bos taurus indicus (n=107) e 37,4% dos bovinos Bos taurus taurus (n=179) foram positivos. Houve diferença significativa entre as subespécies (p<0,05), ocorrendo maior prevalência de babesiose nos Bos taurus taurus. De acordo com os resultados encontrados pode-se concluir que nao houve diferença na prevalência de babesiose quando se comparou o sexo e a aptidão zootécnica. Foi observada uma maior prevalÇencia de babesiose em Bos taurus quando comparado com Bos indicus.

Bovine babesiois is a hemoparasitosis, this disease is caused by two protozoa species, Babesia bovis and Babesiabigemina, and afflicts bovine herds on the entire country, being, responsible for great losses in productivity of the herds.Transmission happens mainly by the tick Rhipicephalus Boophilus microplus. Clinical signs are intense anemia by extravascularhemolysis, fever, hemoglobinuria, jaundice and death. The diagnosis for babesiosis may be through microscopic examinationof peripheral blood smears. It is a disease of great importance for bovine production. The aim of this paper was to studythe prevalence of babesiosis in the municipality of Umuarama. It was analyzed 325 clinical charts from Umuarama, treatedat the Universidade Paranaense (UNIPAR) Veterinary Hospital, from January 2003 to December 2010. The analysis showedthat 32.4% were positive and 68.6% were negative for Babesia spp. Considering gender, 30.5% of the female (n=243) and34.1% of male (n=82) were positive. Concerning productive aptitude 27.4% of the bovines with beef aptitude (n=164) and35.4% of bovines with dairy aptitude (n=161) were positive. There was no significant difference between genders and aptitude(p>0.05). Concerning bovine subspecies 23% of Bos taurus indicus (n=107) and 37.4% of Bos taurus taurus (n=179) werepositive. There was significant difference between subspecies (p<0,05), with greater prevalence of babesiosis in Bos taurustaurus.. According to the results found, it is possible to conclude that there was no difference in the prevalence of babesiosiswhen compared gender and productive aptitude. It was observed a higher prevalence of babesiosis in Bos taurus taurus whencompared to Bos indicus.

Comparação de kits ELISA® comerciais para anticorpos no soro e leite com um teste coproparasitológico em bovinos naturalmente infectados por Fasciola hepatica / Comparison of comercial® ELISA kits for antibodies in serum and milk with a fecal test in cattle naturally infected with Fasciola hepatica

A fasciolose é uma enfermidade causada por um trematoda que acomete o fígado principalmente de ruminantes domésticos, podendo parasitar o homem e seu diagnóstico é realizado rotineiramente por exames coproparasitológicos. O objetivo do presente estudo foi comparar kits comerciais de ELISA para anticorpos no soro e leite com um teste coproprarasitológico em bovinos naturalmente infectados por Fasciola hepatica. Foram coletadas amostras de fezes (92) sangue (92) e leite (43) de bovinos provenientes de propriedades de gado leiteiro do município de Jerônimo Monteiro, sul do Estado do Espírito Santo. As amostras de fezes coletadas foram processadas pela técnica de sedimentação fecal para ovos de F. hepatica, utilizada como padrão ouro para as análises. Amostras de sangue e de leite foram processadas segundo a orientação do fabricante dos respectivos Kits ELISA comerciais testados. Utilizou-se o c² de McNemar para comparação estatística e calcularam-se a sensibilidade e especificidade, valores preditivos e kappa. Os resultados obtidos mostraram que as frequências de positividade pelo uso dos kits ELISA comerciais de soro e de leite diferiram significativamente (p<0,0001) em relação ao exame coproparasitológico. A sensibilidade dos Kits foi de 100%, porém possuíram baixa especificidade, 42,85 e 30% para o soro e leite respectivamente. O coeficiente de kappa mostrou concordância sofrível para os testes de soro (0,33) e de leite (0,21). Os valores preditivos positivos dos kits para soro e leite foram, respectivamente, 44,61 e 38,23% e, os valores preditivos negativos de 100% para ambos os testes. Apesar da maior sensibilidade dos kits ELISA comerciais e, destes apresentarem diferença em relação ao exame coproparasitológico na detecção dos animais positivos para F. hepatica, a escolha de um teste diagnóstico deve considerar o custo benefício. Quando se trata da presença de parasitismo em rebanhos, o tratamento é aplicado em todos os animais e, assim, o exame coproparasitológico para o diagnóstico da doença tem maior eficiência, já que é menos oneroso e de fácil execução.

The fascioliasis is a disease caused by a trematode that affects the liver mainly of domestic ruminants and can also parasite man; its diagnosis is routinely done by coprological methods. The aim of this study was to compare commercial ELISA kits for antibodies in serum and milk with a coprological test in cattle naturally infected by Fasciola hepatica. We collected fecal, blood and milk samples from cattle in the municipality of Jerônimo Monteiro, southern Espírito Santo state. The fecal samples were processed by the fecal egg sedimentation for F. hepatica, which is used as a gold standard for analyzis. Blood (92) and milk (43) samples were processed according to the manufacturer instructions of the respective commercial ELISA kits tested. We used the McNemar chi-square for statistical comparison and calculated the sensitivity, specificity, predictive values, and kappa. The results showed that the frequency of positivity for the commercial serum ELISA kits (χ2=34.02) and milk (χ2=19.04) differed significantly (p<0.0001) compared with fecal egg sedimentation. The sensitivity of the kits was 100%, but possessed low specificity, 42.85 and 30% for serum and milk respectively. The coefficient kappa showed agreement for testing serum (0.33) and milk (0.21). The positive predictive value of the kits for serum and milk were respectively 44.61% and 38.23%, and negative predictive values were 100% for both tests. Despite the increased sensitivity of commercial ELISA kits and the difference in relation to the fecal egg sedimentation test for detection of F. hepatica positive animals, the choice of a diagnostic test should consider the effectiveness. When a herd is affected by parasitism, treatment is applied to all animals; so, the fecal egg sedimentation test for the diagnosis of disease in the field is most efficient, as the test is cheap and easy to perform.

Aporte de la técnica de PCR en el diagnóstico de Mansonella ozzardi en zonas endémicas de la Argentina / Contribution of the PCR assay to the diagnosis of Mansonella ozzardi in endemic areas of Argentina

Mansonella ozzardi es un nematode parásito tisular, agente etiológico de mansonellosis en casi la totalidad de los países latinoamericanos. En Argentina la mansonellosis ha sido descrita a lo largo de la región de las yungas. Su diagnóstico microscópico puede dar resultados falsos negativos en microfilaremias bajas. El objetivo del presente estudio fue optimizar su diagnóstico molecular y comparar los resultados con los obtenidos mediante las pruebas microscópicas de Knott, de gota gruesa y de extendido hemático fino, en 92 muestras de sangre de pacientes de zona endémica. La técnica de PCR seguida de la secuenciación del producto amplificado presentó una sensibilidad del 100 % frente al método de Knott, considerado como referencia, e incluso permitió identificar 7 casos más de la parasitosis.

Mansonella ozzardi is a tissue-dwelling parasitic nematode, the causative agent of mansonelliasis in almost all Latin American countries. It has been described along the Argentine Yungas region. The microscopic diagnosis can yield false-negative test results at low microfilaremia levels. The aim of this study was to optimize the molecular diagnostic technique and compare it with the Knott's method and standard blood smear procedures (thin blood films and thick smears) in 92 blood samples of individuals from an endemic area. The PCR technique followed by the sequencing of the amplified product yielded 100 % sensitivity compared to the Knott's test, which is considered a reference method. Seven more cases of this parasitosis could only be identified with the molecular technique.

Polymerase chain reaction and blood culture in blood donors screened by ELISA test for Chagas' disease / Reação em cadeia da polimerase e da cultura de sangue em doadores de sangue selecionados pelo teste de ELISA para doença de Chagas

The objective of this study was to evaluate, through blood culture and PCR, the results of the ELISA for Chagas' disease in the screening of blood donors in the public blood-supply network of the state of Paraná, Brazil, and to map the epidemiological profile of the donors with respect to their risk of infection by Trypanosoma cruzi. The negative and positive results of the ELISA were confirmed by blood culture and PCR for 190/191 individuals (99.5 percent). For one individual (0.5 percent), the ELISA was inconclusive, blood culture and IIF were negative, and IHA and PCR positive. Three individuals (1.6 percent) were positive for T. cruzi on all the tests. Donors were predominantly female, and natives of Paraná, of rural origin, had observed or been informed of the presence of the vector in the municipalities where they resided, had never received a blood transfusion, had donated blood 1 to 4 times, and reported no cases of Chagas' disease in their families. We concluded that PCR and blood culturing have excellent potential for confirming the results of the ELISA, and that candidate blood donors with negative or positive tests have a similar risk of infection by T. cruzi, indicating that the ELISA test is sufficiently safe for screening blood prior to use.

O objetivo deste estudo foi avaliar, pela hemocultura e PCR, os resultados do teste ELISA utilizado para doença de Chagas na triagem de doadores de sangue na rede pública do Estado do Paraná, Brasil, e traçar o perfil epidemiológico dos doadores quanto ao risco de infecção pelo Trypanosoma cruzi. Os resultados negativos e positivos do ELISA foram confirmados pela hemocultura e PCR em 190/191 indivíduos (99,5 por cento). Para um indivíduo (0,5 por cento), o teste de ELISA foi inconclusivo, hemocultura e IFI foram negativas, HAI e PCR foram positivas. Três indivíduos (1,6 por cento) foram positivos para T. cruzi em todos os testes. A maioria dos doadores era do sexo feminino, oriundos do Estado do Paraná, de origem rural, tinham observado ou foram informados da presença do vetor nos municípios onde residiam, nunca tinham recebido sangue, haviam doado sangue de 1 a 4 vezes e não relataram casos de doença de Chagas na família. Nós concluímos que a PCR e a hemocultura são excelentes testes para confirmar os resultados do ELISA e os candidatos a doadores de sangue com testes positivos e negativos apresentam risco semelhante de infecção pelo T. cruzi, reforçando o nível satisfatório de segurança do teste ELISA para liberar o sangue para o uso.

Avaliação de diferentes dietas merídicas sobre a emergência de adultos de Ctenocephalides felis felis (Siphonaptera: Pulicidae) / Evaluation of different meridic diets upon adult emergence of Ctenocephalides felis felis (Siphonaptera: Pulicidae)

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência de dietas merídicas compostas por sangue de diferentes espécies animais sobre a emergência de adultos da pulga Ctenocephalides felis felis. Foram utilizadas seis dietas artificiais contendo areia e sangue desidratado de cão, boi, coelho e galinha, acrescidas ou não com farelo de trigo. Foram realizadas seis repetições contendo dez ovos de C. f. felis para cada dieta. Após 25 dias de incubação, os ovos foram quantificados e avaliados quanto à emergência de adultos. O número de pulgas emergidas para dietas com sangue de boi, cão, coelho e galinha, com areia e farelo de trigo, foi de aproximadamente oito pulgas. Para as dietas contendo apenas sangue de boi ou de cão e areia, essa emergência foi de aproximadamente uma pulga para ambas. Conclui-se que a origem do sangue empregado na elaboração da dieta não interfere significativamente no percentual de emergência de adultos de C. f. felis. Portanto, pode-se optar pela espécie animal disponível para o preparo da dieta artificial, aliada à suplementação comfarelo de trigo, para suprir uma eventual perda nutricional decorrente da desidratação do sangue.

The objective of the present study was to evaluate the influence of meridic diets composed by blood from different animal species upon the adult emergence of Ctenocephalides felis felis fleas. Six artificial diets containing dried bloodof cattle (standard), dogs, rabbit and chicken, combined with sand or sand/wheat bran were prepared. For each diet six samples containing ten C. f. felis eggs were evaluated. After 25 days of incubation, samples were assessed for adult emergence. The number of emerge fleas for diets composed by bovine, canine, rabbit and chicken combined with sand/ wheat bran was aproximally eight fleas. Diets composed by bovine and canine combined with sand, this emergence was aproximally one flea, for both. It can be concluded that the blood origin do not alter significantly C. f. felis adultemergence rate. Therefore, blood from any available animal species can be used for artificial diet formulation, combined with wheat bran in order to supply any nutritional losses occurred during blood dehydration.

Ocorrência da Mansonella ozzardi (Nematoda, Onchocercidae) em comunidades ribeirinhas do rio Purus, Município de Boca do Acre, Amazonas, Brasil / Occurrence of Mansonella ozzardi (Nematoda, Onchocercidae) in riverine communities of the Purus river, Boca do Acre municipality, Amazonas State, Brazil

Este estudo teve o objetivo de estimar as prevalências de Mansonella ozzardi e calcular taxa de infecção parasitária nos simulídeos. O trabalho foi realizado em comunidades ribeirinhas do rio Purus, Boca do Acre, Amazonas, Brasil. As prevalências foram obtidas por meio do método de gota espessa de sangue obtido por porção digital. Os simulídeos coletados foram dissecados para estimar a taxa de infecção parasitária. A prevalência de M. ozzardi foi de 27,3 por cento (282/77). Foram observadas maiores prevalências nos homens (31,97 por cento) que nas mulheres (22,22 por cento), nos agricultores (48 por cento) e nos indivíduos entre: 38-47 (60 por cento), 48-57 (66,66 por cento) e 58-67 (75 por cento). A microfilaremia foi maior nos indivíduos entre 58-67 anos (média = 58,41mf/40µL), sexo masculino (41,44mf/40µL) e nos agricultores (49,94mf/40µL). Somente o simulídeo Cerqueirellum amazonicum foi encontrado infectado com taxa de infecção parasitária de 0,98 por cento.

The study aimed to estimate the prevalence of Mansonella ozzardi and calculate the parasitic infection rate in simuliid blackflies. The research was conducted in communities on the Purus River, Boca do Acre municipality, Amazonas State, Brazil. Prevalence was measured using the thick smear method. Captured blackflies were dissected to verify the parasitic infection rate. M. ozzardi prevalence was 27.30 percent (77/282). The study showed higher prevalence in men (31.97 percent) than women (22.22 percent), farmers (48.99 percent), and individuals in the 38-47 (60.00 percent), 48-57 (66.66 percent), and 58-67-year age brackets (75.00 percent). Microfilaremia was higher in individuals 58 to 67 years of age (average= 58.41mf/40µl), men (41.44mf/40µl), and farmers (49.94mf/40µl). Only the simuliid Cerqueirellum amazonicum was found infected with a parasitic infection rate of 0.98 percent.

Control de la infección por Trypanosoma cruzi en donantes de sangre de Colombia, 2003 / Control of infection for the Trypanosoma cruzi in blood donors

Introducción. La enfermedad de Chagas es un problema de salud pública en Latinoamérica. Después de la vectorial, la segunda fuente de transmisión es la transfusional; en Colombia el tamizaje para este marcador es obligatorio en los bancos de sangre desde 1995. Objetivo. Evaluar el comportamiento de algunas estrategias de control de la infección en donantes y estimar el riesgo transfusional por enfermedad de Chagas. Materiales y métodos. Se analizaron los datos de cobertura de tamizaje y reactividad para anticuerpos anti- Trypanosoma cruzi; los resultados de los bancos de sangre en el Programa de Evaluación Externa del Desempeño de Serología (PEED) y los reportes de los Laboratorios de Salud Pública sobre pruebas confirmatorias de serología en donantes. Resultados. En 2003, los bancos de sangre del país captaron 482.371 unidades, 99,91 por ciento fueron analizadas para anti- T.cruzi, resultando reactivas 0,42 por ciento. Casanare presentó la mayor reactividad con 107/1.487 (7,2 por ciento), de los cuales se confirmaron como positivos 75. En el PEED participaron 45,5 por ciento bancos, la totalidad de los cuales utilizó ELISA para tamizaje; se hallaron 1,1 por ciento resultados falsos positivos y ningún falso negativo. En 12 departamentos que analizaron 338.563 unidades para anti- T.cruzi, 1.298 casos fueron notificados como reactivos y 1.108 (85,4 por ciento) se confirmaron por la prueba de IFI, registrando una positividad de 0,33 por ciento. Conclusiones. Aunque la cobertura del tamizaje llegó a 99,91 por ciento, existe aún riesgo de infección por T.cruzi. Los casos de T.cruzi en donantes oscilan entre 0 y 50 por cada mil, y como ya se mencionó, Casanare es el departamento con mayor riesgo de adquirir Chagas transfusional. Los bancos participantes en el PEED no mostraron resultados falsos negativos

Criopreservación de plasmodium, novyella, juxtanucleare con glicerol / Cryopreservation of plasmodium, novyella, juxtanucleare with glycerol

Se evaluó la criopreservación de Plasmodium juxtanucleare utilizando glicerol bajo cuatro concentraciones (20 por ciento, 16 por ciento, 12 por ciento, y 8 pro ciento). Posteriormente, congelamiento a -196ºC, por seis meses, la sangre fue descongelada e inoculada en pollos, tres pollos para cada concentración de glicerol (CG). Se realizó frotis sanguíneos diarios, de las aves, durante 35 días. El análisis de variables biológicas reveló que la parasitemia fue directamente proporcional a CG, el período pre-patente fue de 12,4 ñ 2,7 días, el pico máximo de parasitemia (PMP) fue de 23,5 ñ 3,5 días y la duración media de la parasitemia fue de 33,6 ñ 1,0 días. La tasa de hemólisis varió de 12,45 por ciento a 40 por ciento y, fue inversamente proporcional a CG. Hubo diferencia significativa (P<0,05) en cuanto a PMP; donde el inoculo con glicerol a 12 por ciento difirió de los demás, presentando el mayor PMP (30,5 ñ 0,5). La parasitemia media, de los grupos experimentales tuvo el inicio entre el séptimo y octavo día post-inoculación (DPI), durando, en media, hasta el 35º DPI. El grupo que recibió inoculo con glicerol a 20 por ciento presentó la mayor y más alta parasitemia. El glicerol a 20 por ciento fue la concentración más eficiente para la criopreservación de P. juxtanucleare

Removal of Trypanosoma cruzi by white cell-reduction filters: an electronmicroscopic study

Os filtros de leucócitos säo eficazes em remover agentes infecciosos de hemocomponentes infectados. Neste estudo, foram avaliados os mecanismos de retençäo de Trypanosoma cruzi (T. cruzi) por filtros de leucócitos. Amostras de concentrado de glóbulos vermelhos (CGV) e concentrado de plaquetas (CP) foram contaminados com parasitas T. cruzi (cepa Y, 3,4 x 10(6)/ml), e filtrados com filtros experimentais de leucócitos, com capacidade de remoçäo de aproximadamente 3 log(10) leucócitos. A análise das fibras dos filtros através de microscopia eletrônica de transmissäo mostrou que os parasitas T. cruzi foram removidos dos CGV e CP contaminados por mecanismo físico, sem interaçäo com células sangüíneas. Além disso, foi demonstrado que os parasitas T. cruzi foram também removidos por adesäo direta às fibras dos filtros, sugerindo um mecanismo biológico, provavelmente mediado por proteínas da superfície do parasita

Diagnosis of Malaria by polymerase chain reaction

Malaria is no longer endemic in Puerto Rico, however, imported cases of the disease are occasionally reported to the Health Department of the Island. This is a report of a 45-year-old female patient who traveled to Kenya and Niger and was admitted to a San Juan area hospital with an 8 day history of daily chills and fever, myalgia, nausea and vomiting. Upon admission, peripheral blood displayed multiple intra-erythrocytic ring-shape trophozoites, highly suggestive of Plasmodium falciparum. The polymerase chain reaction was used as a complementary method for the detection of malaria parasites and confirmation of post-treatment parasite clearance. This report presents an imported case of malaria in Puerto Rico and showed the use of a molecular technique to diagnose Plasmodium

Comportamento da parasitemia pelo Trypanosoma cruzi em chagásicos crônicos durante 13 anos / Aspects of parasitemia by Trypanosoma cruzi in chronic chagasic patients during 13 years

Foi estudada a parasitemia de 202 chagásicos crônicos por um período médio de 13 anos, através de repetidos xenodiagnósticos convencionais. Os pacientes tinham média de idade de 41,4 anos, residiam em área endêmica, sendo 124 do sexo feminino e 78 do sexo masculino. Foi observado que o nível de parasitemia aumentou em 14 indivíduos, diminuiu em 42 e permaneceu inalterado em 146. Porém, no geral, a parasitemia declinou. Os percentuais de chagásicos xenopositivos que foram 37,6 por cento, 48,5 por cento, 51 por cento no primeiro, segundo e terceiro xenodiagnósticos, respectivamente, em 1976/78, passaram a ser 30,2 por cento em 1988/91 (p = 0,00003). Os percentuais de pools positivos que foram 15,2 por cento, 20,9 por cento, 20,8 por cento no primeiro, segundo e terceiro xenodiagnósticos, respectivamente, em 1976/78, passaram a ser 10,4 por cento em 1988/91, (p = 0. 00000001). Houve 62 pacientes que tiveram todos os xenodiagnósticos negativos e 23 que apresentaram todos os exames positivos. Os percentuais de chagásicos com alta, média e baixa parasitemias que, em 1976/78, foram, respectivamente, 9,4 por cento; 20,8 por cento e 69,8 por cento passaram a ser, em 1988/91, respectivamente, 4,4 por cento, 12,9 por cento e 82,7 por cento