Production of monoclonal antibodies specific to human von Willebrand Factor

RESUMO

Um anticorpo monoclonal específico para o fator von Willebrand (FvW) humano, o vW1E2, foi produzido imunizando-se camundongos da lihangem BALB/c com FVIII/FvW parcialmente purificado. A análise do anti-soro e a triagem dos hibridomas foram feitas por ELISA empregando anti-soro de coelho anti-FvW como anticorpo de captura do FvW plasmático. A especificidade do vW1E2 ao FvW foi demonstrada testando-o contra plasmas de indivíduos normais, hemofílicos A e pacientes com DvW. Esta especificidade foi confirmada através de experimentos de imunoprecipitaçäo nos quais o FvWAg era precipitado do plasma pelo vW1E2 com auxílio de anti-soro de coelho anti-Ig de camundongo, como demonstrado por imunoelectroforese (EIA) e ELISA. Foi entäo desenvolvido um ELISA, empregando o vW1E2, o qual foi avaliado como técnica de quantificaçäo do FvWAg plasmático. Foram testados amostras de plasmas de pacientes com DvW tipo I e tipo II, assim como de indivíduos normais e hemofílicos A. Os níveis de FvWAg obtidos por ELISA foram comparados aos obtidos por IEA observando-se uma correlaçäo significativa entre eles (r=0,735; GL=35; P<0,001)