Detection of Trypanosoma cruzi DNA in false negative samples of collected triatomines, xenodiagnosis material, and biopsies of experimentally infected animals.

Direct test over the gut material from triatomine vectors and xenodiagnosis over mammalian hosts are classical techniques for Trypanosoma cruzi parasitological diagnosis. Nevertheless, negative results can be a source of uncertainty. Experimental models have allowed evaluating the tissue invasion of different strains of T. cruzi, but conventional techniques for tissue biopsies involve time-consuming and elaborated procedures and have low sensitivity. Gut material of collected triatomines (microscopically negative) (n = 114), material of mammal xenodiagnoses (microscopically negative) (n = 138), and biopsy material (microscopically negative) from experimentally infected animals (n = 34) with isolates from endemic areas of Chagas' disease from Venezuela were used for DNA extraction and PCR for the amplification of kinetoplast DNA (kDNA) and satellite DNA (sDNA) of T. cruzi. Positive PCR was observed in 53.6% of collected triatomine material, 15.8% of parasitological negative xenodiagnosis material, and 70.6% in biopsies, revealing underestimation by the parasitological tests and the valour of this analysis with preserved material. Anzoátegui was the state with the highest percentage of infection, and the triatomine species Rhodnius prolixus and Panstrongylus geniculatus had the highest percentages of infection. Didelphis marsupialis and Canis familiaris were the most infected by T. cruzi revealed by PCR of xenodiagnosis material. In addition, the PCR technique allowed demonstrating the invasion of T. cruzi in all tissues analyzed, constituting a molecular marker of tissue invasion.

Diagnosis of Taeniosis in rural Venezuelan communities: Preliminary characterization of a Taenia solium specific monoclonal (VP-1) Coproantigen ELISA.

The objective of this study was to identify and treat carriers of adult Taenia solium present in two rural Venezuelan communities through examination of faecal samples by coproscopical analysis, and by the application of a polyclonal and a monoclonal (VP-1) coproantigen ELISA. Both the polyclonal and monoclonal ELISA's were negative when tested with soluble extracts of adults of Ascaris lumbricoides, Hymenolepis nana and Trichuris trichura. The polyclonal ELISA was positive for soluble extracts adults of T. solium and T. saginata, whereas the monoclonal ELISA, which recognizes a glycoprotein, was restricted to T. solium, and was also negative with faecal samples from five cases of T. saginata adult infections. In the first community studied, Potrero Largo (Total population: 300), of 248 faecal samples examined, 2 individuals were positive for Taenia spp eggs by coproscopical analysis and the VP-1 ELISA, and yielded T. solium adults upon purging. In contrast, when the polyclonal coproAg ELISA was applied to the same 248 faecal samples, there were a considerable number of positives. Indeed, seven patients highly positive in the polyclonal ELISA did not yield a Taenia spp upon purging and were negative in the VP-1 ELISA. In the second community studied La Yuca (Total population 560), none of the 333 individuals who donated faeces was positive for Taenia spp eggs. Many, however, were infected with a range of intestinal helminth and protozoan parasites. A total of 76 faecal samples with representative intestinal parasite were then tested in the polyclonal and VP-1 assays. Of these, many gave an unacceptable number of significant optical densities in the polyclonal coproAg ELISA. In contrast, all were negative in the VP-1 ELISA, thus providing evidence for the species specificity of the VP-1 ELISA in faecal samples. These results with the VP-1 coproAg ELISA, although preliminary, justify further validation through the testing of more faecal samples from T. solium and T. saginata adult infected individuals.

Seroepidemiología de leishmaniasis visceral urbana: Barrio Los Próceres. Municipio Naguanagua, Estado Carabobo, Venezuela 2009 / Seroepidemiology urban visceral leishmaniasis: Barrio Los Próceres. Naguanagua municipality. Carabobo State, Venezuela. 2009

La leishmaniasis visceral (LV) en Latinoamérica y particularmente en Venezuela, es una protozoosis que en las últimas décadas ha mostrado cambios en su patrón epidemiológico inicialmente rural hasta la activación de focos urbanos, significando esto, la emergencia de una problemática de salud pública en zonas marginales de la periferia de grandes ciudades. En el Departamento de Parasitología, de la Universidad de Carabobo, en el año 2005, fue diagnosticado un caso de leishmaniasis visceral humana en un niño de 2 años, residente del Barrio Los Próceres, ubicado en el Municipio Naguanagua, del Estado Carabobo-Venezuela, siendo este el primer caso de LV reportado en esta comunidad. A partir de este hallazgo se planteó realizar un estudio seroepidemiológico en la población humana y canina de esta comunidad el cual permitirá caracterizarlo como un foco urbano de LV. Se aplicó encuesta epidemiológica y se tomó muestra sanguínea a la población humana y canina que habitaba en un área de 200 m. a partir de la residencia del caso diagnosticado; se utilizó la prueba ELISA-rK39, la seroprevalencia obtenida fue de 5,96% (9/151) en humanos y 24,24% (8/33) en caninos. El 55,55% de seropositivos humanos tenían entre 0 - 13 años. No se evidenció asociación entre la seropositividad y variables epidemiológicas evaluadas como: grado de instrucción, ocupación, tiempo de residencia en la localidad, procedencia de otras comunidades y presencia de caninos. La mayoría de los caninos seropositivos tenían más de 2 años de edad y en condición asintomática. Los resultados obtenidos sugieren la presencia de un nuevo foco de LV urbano de reciente data en la localidad evaluada.

Visceral leishmaniasis (VL) in Latin America and particularly in Venezuela, is a protozoan infection that in recent decades has shown changes in the epidemiological pattern, initially rural to activating urban foci, resulting in the emergence of a public health problem in the periphery of large cities. In the Parasitology Department, Carabobo University, in 2005, was diagnosed a case of human visceral leishmaniasis in a 2-year old child, resident of Barrio Los Próceres, located in the Municipality Naguanagua, Carabobo State. This was the first reported case of VL in this community. From this finding we carried out a seroepidemiological study in human and canine population of this community in an attempt to characterize it as an urban focus of VL. An epidemiological survey was conducted and blood samples were taken from the human and canine population living in an area of 200 m. of the index case, in order to detect anti-leishmania antibodies using the ELISA-rK39 test. The seroprevalence obtained for human was 5.96% (9 / 151), and for dogs 24.24% (8 / 33). 55.55% of seropositive humans were between 0-13 years old. No evidence of association between seropositivity and assessed epidemiological variables such as educational level, occupation, length of residence in the town of origin, from other communities and the presence of dogs. Most of the seropositive dogs were over 2 years of age and in an asymptomatic condition. Results suggest the presence of a new recent focus of urban LV of in the studied area.

A PCR assay for the identification of Leishmania species of the Viannia subgenus / Un ensayo de PCR para identificar especies de Leishmania del subgénero Viannia

We have identified a novel DNA sequence of 500 bp (β500-DNA) on the Leishmania (Viannia) subgenus, located in the intergenic region of one of the loci of the β-tubulin gene family. The sequence analysis showed that this sequence has no homology to any other sequence described so far, including the β-tubulin gene. We improved a specific β500-PCR assay, which generated a PCR product of 375 bp for total genomic DNA from Leishmania strains belonging to the L. (Viannia) subgenus. In contrast, no amplification was found when using genomic DNA from species of L. (Leishmania) subgenus or other organisms. Under our PCR conditions, the lower detection limit was 1 fg when a purified DNA clone (pLgβ4), which contains one copy of the β500-DNA sequence, was used. The β500-DNA PCR assay confirmed the preliminary diagnosis of cutaneous leishmaniasis in clinical samples in which the Montenegro skin test was positive and parasite cultures were negative. The analytical specificity and the sensitivity of the PCR assay provide a tool for epidemiological studies of the disease.

En este trabajo identificamos una nueva secuencia de DNA de 500 pb (β500-DNA) en Leishmania del subgénero Leishmania (Viannia), localizada en la región intergénica de uno de los loci de la familia de los genes de la β tubulina. El análisis de secuencia mostró que β500 no tiene homología con ninguna otra secuencia previamente descrita, incluido el gen de la β tubulina. Nosotros implementamos un ensayo de PCR específico para β500, β500-PCR, que genera un producto de PCR de 375 pb a partir del DNA genómico de cepas de Leishmania pertenecientes al subgénero L. (Viannia). No hubo amplificación alguna cuando se utilizó el DNA genómico de especies del subgénero L. (Leishmania) o el de otros organismos. En las condiciones establecidas, utilizando DNA purificado del clon pLgβ4, que contiene una copia de la secuencia de DNA de β500, el límite de detección más bajo fue de 1 fentogramo. El ensayo β500-PCR confirmó el diagnóstico preliminar de leishmaniasis cutánea en muestras clínicas de pacientes positivas a la prueba de Montenegro y negativas en el cultivo de parásitos. La especificidad y sensibilidad analítica del ensayo de PCR proporciona una herramienta para estudios epidemiológicos de la enfermedad.

Situación nutricional y características sociodemográficas de niños en una comunidad rural del estado Cojedes: Año 2005 / Children’s nutritional situacion and socio-demographic characteristics, in a rural comunity of the states of cojedes: Year 2005

La evaluación del estado nutricional, especialmente en grupos vulnerables, permite medir en forma indirecta la calidad de vida de una comunidad. Objetivo: Conocer el estado nutricional de niños que viven una comunidad rural del Estado Cojedes y las condiciones socioeconómicas de su grupo familiar. Metodología: Estudio descriptivo, transversal con 31 niños de 6 a 14 años, de ambos sexos. El diagnóstico nutricional se realizó por los indicadores: Talla-edad. Peso-talla, Peso-edad e Índice de Masa Corporal (IMC). Se utilizó para la clasificación, la referencia nacional y para la estratificación socioeconómica, Graffar - Méndez Castellano. En el análisis estadístico se utilizó distribución de frecuencia con porcentajes y medidas de tendencia central para las diferentes variables. Resultados: 83,9 % de los niños tuvo diagnóstico nutricional normal y 28,1 % presentó talla baja, 83,3% de las familias se encontró en situación de pobreza crítica. Conclusión: pese al estado de pobreza de las familias evaluadas, la mayoría de los escolares tienen IMC normal. Sin embargo, el hallazgo de talla baja refleja los posibles efectos deletéreos de la condición socioeconómica que predomina en la comunidad.

The evaluation of the nutritional state, especially in vulnerable groups, allows to measure in indirect form the quality of life of a community. Objetive: to know the state nutritional children who live a rural community on the Cojedes State and the socioeconomics conditions of their familiar group. Methodology: A descriptive, cross-sectional study was made where 31 children of 6 to 14 years, both sexes evaluated themselves. The nutritional diagnosis was made by the indicators: Stature-age. Weigh-it stature, Weigh-age and Index of Corporal Mass (IMC). Classification was used the national reference, and for the socioeconomic stratification, Graffar - Méndez Castellanos. For the statistical analysis the frequency allocation in percentage and measures of central tendency for the different variables was used. Results: 83,9% of the children had I diagnose normal nutritional and 28,1 % presented/displayed low stature. 83,3% of the families were in situation of critical poverty. Conclusion: in spite of the state of poverty of the evaluated families, most of the students they have a normal nutritional diagnosis, but the present low stature, reflects the possible deleterious effects of the socioeconomic condition that predominates.

Diagnóstico de leishmaniasis visceral en el departamento de parasitología: Valencia estado Carabobo / Diagnosis of visceral leishmaniasis in the parasitology departament: Valencia Carabobo state state

La leishmaniasis visceral (LV) es una protozoosis humana caracaterizada clínicamente por síndrome febril prolongado hepatoesplenomegalia, anemia y pérdida progresiva de peso. En América afecta principalmente a niños de 5 años pudiendo causar la muerte, por lo cual es necesario contar con procedimientos confiables para el diagnóstico precoz. Entre 1989 y 2003, el laboratorio de Leishmaniasis del Departamento de Parasitología (FCS-UC) Valencia, ha abordado el diagnóstico de LV, en pacientes sospechosos. El protocolo disgnóstico consideró los criterios: epidemiológico, clínico, serológico (ELISA) y demostración directa del parásito, por extendido de médula ósea (MO) coloreado con Giemsa e inoculación de MO en hámster. Se consideró como caso LV a todo paciente con diagnóstico parasitológico positivo o tener al menos 3 de los otros criterios. De los 118 evaluados, 23 cumplieron los criterios disgnósticos para LV. El método de ELISA detectó 95,7 por ciento, extendido de MO 91,3 por ciento e inoculación en hámster 70 por ciento. El 78,3 por ciento procedieron de áreas endémicas conocidas de LV; 43,5 por ciento en menores de 10 años. El número de casos por año presentó un patrón hipoendémico, no cíclico. El presente estudio ratifica la importancia de la integración de criterios para garantizar un diagnóstico eficaz precoz, con el fin de iniciar tratamiento y evitar complicaciones. Además contribuye a documentar la morbilidad e importancia de LV en el país

Validación del inmuno ensayo enzimático (ELISA) y hemoaglutinación indirecta (HAI) para el serodiagnóstico de la Enfermedad de Chagas / Validation of enzime-linked inmunosorbert assay (ELISA) and indirect hemagglutination (IHA) for serodiagnosis of Chagas Disease

Las técnicas serológicas constituyen una importante herramienta en la confirmación del diagnóstico de la enfermedad de Chagas inaparente y crónico. En estas fases de la enfermedad el diagnóstico parasitológico es muy poco sensible debido a la baja parasitemia que las caracteriza. Uno de los principales problemas plantedos en serodiagnóstico de esta protozoosis, lo constituye la diversidad de criterios en los diferentes laboratorios nacionales, es por ello que actualmente se están realizando esfuerzos para contribuir a su unificación, donde han jugado un papel importante tanto la comunidad científica como el Ministerio de Salud y Desarrollo Social (MSDS). En tal sentido, en el presente nos planteamos evaluar la validez de las técnicas de ELISA y HAI para contribuir con el control de calidad de serodiagnóstico de la Enfermedad de Chagas, utilizando un antígeno crudo de epimastigotas de Trypanosoma cruzy. Se ensayaron 100 sueros positivos y 100 negativos provenientes de individuos comprobadamente chagásicos y no chagásicos, además de determinar las reacciones cruzadas con el ensayo de 31 sueros de pacientes con otras enfermedades como malaria, lepra, TBC, toxoplasmosis, rangeliosis, leishmaniasis tegumentaria y visceral. Se determinó el punto de corte para cada prueba. El diagnóstico de referencia lo constituyó el resultado positivo y negativo que en conjunto fue obtenido por las tres pruebas serológicas utilizadas en el Laboratorio de Chagas de la Dirección General de Salud Ambiental y Contraloría Sanitaria del MSDS. Los resultados obtenidos reflejaron un 96 por ciento de sensibilidad y 97 por ciento de especifidad para ELISA. En HAI se obtuvo 99 por ciento tanto de sensibilidad como de especificidad

Zoonotic cutaneous leishmaniasis due to Leishmania (Viannia) braziliensis associated with domestic animals in Venezuela and Brazil

Após o surgimento do foco de leishmaniose tegumentar em Solano, Estado de Cojedes, Venezuela, 55 da populaçäo possuíam úlceras parasitadas, enquanto que em Mesquita, Estado do Rio de Janeiro, Brasil, 9% apresentavam a doença. Nos dois focos, crianças com menos de seis anos eram acometidas. Näo existe diferença significativa na ocorrência da doença entre sexos ou entre trbalhadores domésticso e agricultores. Em solano, 3% dos cäes e 28% dos equinos apresentavam lesöes paraditadas; em Mesquita estes índices eram de 19,8% e 30,8%, respectivamente. O parasito isolado de humanos, cäes e equinos foi identificado como Leishmania (Viannia) braziliensis, através da análise de zimodema e serodema. Neste foco existe uma evidência sugerindo que a leishmaniose é uma zoonose, onde os equinos e os cäes seriam os prováveis reservatórios. Entretanto, o ciclo enzoótico silvestre näo foram devidamente avaliados. A transmissäo nestes focos é provavelmente peridomiciliar, envolvendo vetores ecléticos como Lutzomyia panamensis, na Venezuela, e Lutzomya intermedia, no Brasil. Dados sobre a origem destes focos sugerem que equinos infectados säo importantes na disseminaçäo do parasita em área ecologicamente receptivas

Cutaneous leishmaniasis in frequent in equines from an endemic area in Rio de Janeiro, Brazil

O achado de uma mula infectada num foco endêmico de leishmaniose tegumentar no Rio de Janeiro, levou-nos a procurar sistematicamente infecçöes por Leishmania em equinos, resultando no encontro de 30,8% de parasitados, incluindo cavalos e mulas. A possibilidade de esses animais participarem da cadeia epidemiológica da leishmaniose humana está sendo investigada

Leishmaniose tegumentar em uma mula (Equus caballus x equus asinus) em área endêmica no Estado do Rio de Janeiro / Cutaneous leishmaniasis in a mule (Equus caballus x Equus asinus) in a endemic area of the state of Rio de Janeiro

É relatado o encontro de infecçäo por parasitos do gênero Leishmania, em lesäo cutânea de uma mula (Equus caballus x Equus asinus) procedente de uma localidade endêmica de leishmaniose tegumentar, no Estado do Rio de Janeiro

Study of an outbreak of cutaneous leishmaniasis in Venezuela: the role of domestic animals

Durante um surto de leishmaniose tegumentar em Las Rosas, localidade previamente näo endêmica do Estado Cojedes, Venezuela, 12,9% dos habitantes, 7% dos cäes e 21,4% dos asnos (Equus asinus) apresentavam lesöes com parasitos. O agente etiológico nos tres hospedeiros foi identificado como Leishmania braziliensis, sendo da subespécie braziliensis pelo menos em pessoas e asnos. O transmissor provável foi Lutzomyia panamensis. Näo comprovamos a infecçäo numa pequena amostra de mamíferos silvestres examinados. O surto esteve aparentemente relacionado com a importaçäo de asnos com úlceras de áreas endêmicas. Chamamos a atençäo para o fato de que näo é apenas nos fócos de "uta", mas também nos de outras formas de leishmaniose tegumentar americana que os cäes estäo freqüentemente parasitados. Enfatizamos a necessidade de se procurar a infecçäo em asnos e de se proceder a hemoculturas e a xenodiagnósticos com flebotomos em casos humanos, caninos e equinos para investigar seu possível papel como fontes de infecçäo e näo o de meros "fins de linha" na cadeia epidemiológica da doença