RESUMEN
Genome-wide expression analyses have provided clues on how Salmonella proliferates inside cultured macrophages and epithelial cells. However, in vivo studies show that Salmonella does not replicate massively within host cells, leaving the underlying mechanisms of such growth control largely undefined. In vitro infection models based on fibroblasts or dendritic cells reveal limited proliferation of the pathogen, but it is presently unknown whether these phenomena reflect events occurring in vivo. Fibroblasts are distinctive, since they represent a nonphagocytic cell type in which S. enterica serovar Typhimurium actively attenuates intracellular growth. Here, we show in the mouse model that S. Typhimurium restrains intracellular growth within nonphagocytic cells positioned in the intestinal lamina propria. This response requires a functional PhoP-PhoQ system and is reproduced in primary fibroblasts isolated from the mouse intestine. The fibroblast infection model was exploited to generate transcriptome data, which revealed that â¼2% (98 genes) of the S. Typhimurium genome is differentially expressed in nongrowing intracellular bacteria. Changes include metabolic reprogramming to microaerophilic conditions, induction of virulence plasmid genes, upregulation of the pathogenicity islands SPI-1 and SPI-2, and shutdown of flagella production and chemotaxis. Comparison of relative protein levels of several PhoP-PhoQ-regulated functions (PagN, PagP, and VirK) in nongrowing intracellular bacteria and extracellular bacteria exposed to diverse PhoP-PhoQ-inducing signals denoted a regulation responding to acidic pH. These data demonstrate that S. Typhimurium restrains intracellular growth in vivo and support a model in which dormant intracellular bacteria could sense vacuolar acidification to stimulate the PhoP-PhoQ system for preventing intracellular overgrowth.
Asunto(s)
Proteínas Bacterianas/biosíntesis , Regulación Bacteriana de la Expresión Génica , Genoma Bacteriano , Salmonella typhimurium/citología , Salmonella typhimurium/genética , Animales , Proteínas Bacterianas/genética , Proteínas Bacterianas/metabolismo , Femenino , Fibroblastos/metabolismo , Fibroblastos/microbiología , Estudio de Asociación del Genoma Completo/métodos , Islas Genómicas/genética , Concentración de Iones de Hidrógeno , Péptidos y Proteínas de Señalización Intercelular , Mucosa Intestinal/metabolismo , Intestinos/microbiología , Riñón/metabolismo , Riñón/microbiología , Proteínas de la Membrana/genética , Proteínas de la Membrana/metabolismo , Ratones , Ratones Endogámicos C57BL , Membrana Mucosa/metabolismo , Membrana Mucosa/microbiología , Péptidos/genética , Péptidos/metabolismo , Ratas , Infecciones por Salmonella/genética , Infecciones por Salmonella/metabolismo , Infecciones por Salmonella/microbiología , Salmonella typhimurium/metabolismo , Salmonella typhimurium/patogenicidad , Transcriptoma/genética , Virulencia/genéticaRESUMEN
Transcriptional regulation depends on the specificity of transcription factors (TFs) recognizing cis regulatory sequences in the promoters of target genes. Current knowledge about DNA-binding specificities of TFs is based mostly on low- to medium-throughput methodologies, revealing DNA motifs bound by a TF with high affinity. These strategies are time-consuming and often fail to identify DNA motifs recognized by a TF with lower affinity but retaining biological relevance. Here we report on the development of a protein-binding microarray (PBM11) containing all possible double-stranded 11-mers for the determination of DNA-binding specificities of TFs. The large number of sequences in the PBM11 allows accurate and high-throughput quantification of TF-binding sites, outperforming previous methods. We applied this tool to determine binding site specificities of two Arabidopsis TFs, MYC2 and ERF1, rendering the G-box and the GCC-box, respectively, as their highest-affinity binding sites. In addition, we identified variants of the G-box recognized by MYC2 with high and medium affinity, whereas ERF1 only recognized GCC variants with low affinity, indicating that ERF1 binding to DNA has stricter base requirements than MYC2. Analysis of transcriptomic data revealed that high- and medium-affinity binding sites have biological significance, probably representing relevant cis-acting elements in vivo. Comparison of promoter sequences with putative orthologs from closely related species demonstrated a high degree of conservation of all the identified DNA elements. The combination of PBM11, transcriptomic data and phylogenomic footprinting provides a straightforward method for the prediction of biologically active cis-elements, and thus for identification of in vivo DNA targets of TFs.
Asunto(s)
Proteínas de Arabidopsis/genética , Arabidopsis/genética , Factores de Transcripción Básicos con Cremalleras de Leucinas y Motivos Hélice-Asa-Hélice/genética , Análisis de Secuencia por Matrices de Oligonucleótidos/métodos , Agrobacterium tumefaciens , Arabidopsis/metabolismo , Proteínas de Arabidopsis/metabolismo , Factores de Transcripción Básicos con Cremalleras de Leucinas y Motivos Hélice-Asa-Hélice/metabolismo , Sitios de Unión , Proteínas de Unión al ADN/genética , Proteínas de Unión al ADN/metabolismo , Perfilación de la Expresión Génica , Regulación de la Expresión Génica de las Plantas , Mutagénesis Sitio-Dirigida , Factores de Terminación de Péptidos/genética , Factores de Terminación de Péptidos/metabolismo , Filogenia , Regiones Promotoras Genéticas , Especificidad por Sustrato , Nicotiana/genética , Nicotiana/metabolismoRESUMEN
Analisa a sustentatibilidade ambiental das bacias envolvidas - ecológica, econômica, social e política - face a essas transposições. A revisão crítica de mais de 30 transposições de bacia no mundo no tocante aos aspectos ambientais e o aprofundamento da aplicação do conceito de desenvolvimento sustentável possibilitaram a seleção dos indicadores de sustentabilidade ambiental mais relevantes aos problemas encontrados. Analisa propostas de autores e organizações nacionais e internacionais preocupados com gestão de recursos hídricos e desenvolvimento sustentável. Verifica que cerca de 80 por cento das transposições hídricas mundiais são realizadas visando às demandas da agricultura irrigada e envolvem uma variedade de aspectos ambientais, sejam naturais ou antrópicos. As conclusões abordam 4 temas: o valor sustentabilidade ambiental; estratégias de desenvolvimento; fatores ambientais afetados; seleção de indicadores. Se de maneira geral os efeitos são controláveis pela tecnologia em saneamento básico e ambiental, ou compensáveis em casis mais drásticos, exigem sobretudo uma política adequada de gestão dos recursos de ambas as bacias. Será sempre necessário trabalhar com um conjunto de indicadores de determinada região/situação/projeto, selecionados individualmente e para cada caso. Dentre os indicadores, destaca-se a relevância daqueles relacionados à conservação dos sistemas de sustentação à biodiversidade, ao uso sustentável dos recursos renováveis e à monitoração dos limites da capacidade de suporte dos ecossistemas. A água já é considerada um bem finito e escasso e eventualmente será objeto dos principais conflitos do século XXI
Asunto(s)
Cuencas Hidrográficas , Transferencia de Agua entre Cuencas , Administración Financiera , Desarrollo Sostenible , Recursos Hídricos , Ambiente , Gestión Ambiental , Desarrollo de Recursos Hídricos , Planificación HídricaRESUMEN
Se estudian las características del embarazo, parto y del R.N. de madres menores de 19 años atendidas en la maternidad del Hospital de Clínicas de Asunción, desde el 1§ de enero al 31 de diciembre de 1985. Se comparan algunas variables biológicas de la madre y del neonato de las menores de 18 años de edad con las de 18 años, encontrándose diferencias notorias en: maniobras obstétricas, desproporción feto-pélvica, pre-eclampsia y eclampsia fototerapia en neonatos, peso al nacer, ictericia neonatal, Apgar a los 5', asfixia y anoxia neonatal, S.D.R., mortalidad. Otras variables estudiadas de orden social fueron estado civil y duración de la hospitalización de la madre. El análisis efectuado no obstante las limitaciones advertidas, permite comprobar las afirmaciones de los expertos internacionales respecto a la existencia de mayores riesgos perinatales cuando más próximo a la menarquía acontece el embarazo (11-12). La madurez reproductiva de la mujer se alcanzaría cinco años después de la menarquía. Por tanto, es de alta prioridad la atención cuidadosa de todo embarazo antes iniciado antes de los 18 años de edad