RESUMO
Rocio virus (ROCV) is a highly neuropathogenic mosquito-transmitted flavivirus responsible for an unprecedented outbreak of human encephalitis during 1975-1976 in Sao Paulo State, Brazil. Previous studies have shown an increased number of inflammatory macrophages in the central nervous system (CNS) of ROCV-infected mice, implying a role for macrophages in the pathogenesis of ROCV. Here, we show that ROCV infection results in increased expression of CCL2 in the blood and in infiltration of macrophages into the brain. Moreover, we show, using CCR2 knockout mice, that CCR2 expression is essential for macrophage infiltration in the brain during ROCV infection and that the lack of CCR2 results in increased disease severity and mortality. Thus, our findings show the protective role of CCR2-mediated infiltration of macrophages in the brain during ROCV infection.
Assuntos
Encefalite/metabolismo , Infecções por Flavivirus/metabolismo , Flavivirus/patogenicidade , Macrófagos/metabolismo , Receptores CCR2/metabolismo , Animais , Encéfalo , Brasil , Encefalite/virologia , Feminino , Infecções por Flavivirus/virologia , Macrófagos/virologia , Camundongos , Camundongos Endogâmicos C57BL , Camundongos KnockoutRESUMO
BACKGROUND: Dengue is the most important arbovirus disease in tropical and subtropical countries. The viral envelope (E) protein is responsible for cell receptor binding and is the main target of neutralizing antibodies. The aim of this study was to analyze the diversity of the E protein gene of DENV-3. E protein gene sequences of 20 new viruses isolated in Ribeirao Preto, Brazil, and 427 sequences retrieved from GenBank were aligned for diversity and phylogenetic analysis. RESULTS: Comparison of the E protein gene sequences revealed the presence of 47 variable sites distributed in the protein; most of those amino acids changes are located on the viral surface. The phylogenetic analysis showed the distribution of DENV-3 in four genotypes. Genotypes I, II and III revealed internal groups that we have called lineages and sub-lineages. All amino acids that characterize a group (genotype, lineage, or sub-lineage) are located in the 47 variable sites of the E protein. CONCLUSION: Our results provide information about the most frequent amino acid changes and diversity of the E protein of DENV-3.
Assuntos
Vírus da Dengue/genética , Dengue/virologia , Polimorfismo Genético , Proteínas do Envelope Viral/genética , Substituição de Aminoácidos/genética , Brasil , Análise por Conglomerados , Vírus da Dengue/isolamento & purificação , Genótipo , Humanos , Dados de Sequência Molecular , Filogenia , Análise de Sequência de DNA , Homologia de SequênciaRESUMO
We studied the molecular epidemiology of dengue virus type 3 (DENV-3) in Brazil and Paraguay by analyzing the 5' and 3' untranslated regions (5' and 3'UTRs) and the E protein gene of viruses isolated between 2002 and 2004. Both 5' and 3'UTRs were highly conserved. However, the 3'UTR of two isolates from Brazil contained eight nucleotide deletions compared with the remaining 26 viruses. Phylogenetic analyses suggested that DENV-3 was introduced into Brazil from the Caribbean Islands at least twice and into Paraguay from Brazil at least three times.
Assuntos
Vírus da Dengue/genética , Dengue/epidemiologia , Proteínas do Envelope Viral/genética , Regiões 3' não Traduzidas/química , Sequência de Aminoácidos , Sequência de Bases , Brasil/epidemiologia , Sequência Consenso , DNA Complementar/química , DNA Viral/química , Dengue/virologia , Vírus da Dengue/classificação , Humanos , Paraguai/epidemiologia , Filogenia , RNA Viral/genética , RNA Viral/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa , Proteínas do Envelope Viral/químicaRESUMO
A infecçäo por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em Escherichia coli, multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídico, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente, que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforéticas dos amplicons de amostras clínicas, comparadas às da titulaçäo de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitativa, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua padronizaçäo, podendo ser testada na detecçäo da carga de CMV em diferentes tipos de pacientes com suspeita de citomegalovirose