Effect of different semen extenders for the storage of chilled sperm in Tigrina (Leopardus tigrinus).

To enhance the conservation of endangered populations, the present study aimed to evaluate whether Tigrinas (Leopardus tigrinus) sperm could be conserved under refrigeration for short periods while maintaining sufficient quality for use in assisted-reproductive techniques (i.e., cryopreservation, in vitro fertilization). For this purpose, semen samples from 15 Tigrinas individuals were submitted to conventional and functional tests after different cooling periods (4 °C; 0, 12, and 24 hours postcooling), using TCM 199 (TCM), Ham's F10 (HAM), Ham's F10 with bovine serum albumin (HBSA), and Tris-citrate egg yolk (TEYC) extenders. In a second step, semen cooled using TEYC was supplemented with reduced glutathione (GSH) at different concentrations (0, 0.5, 1.0, and 1.5 mM). TEYC yielded superior results compared with TCM, HAM, and HBSA even after 24 hours of cooling in regard to the sperm motility index (SMI-TEYC: 50.2 ± 1.7%), high mitochondrial activity (TEYC: 51.4 ± 1.9%), plasma membrane integrity (TEYC: 53 ± 2.1%), and DNA integrity (TEYC: 56.3 ± 2.9%). In regard to the concentration of thiobarbituric-acid-reactive substances (TBARS), TEYC (1900.1 ± 341.4 ng/106 spermatozoa) showed higher levels compared with the other extenders (HAM: 638.7 ± 121.6 ng/106 spermatozoa; HBSA: 468.7 ± 95.6 ng/106 spermatozoa; TCM: 169.6 ± 31.6 ng/106 spermatozoa). However, GSH therapy had no effect. In conclusion, the TEYC extender may be useful in maintaining sperm parameters of Tigrinas for up to 24 hours at 4 °C. Furthermore, these results allow the transport of this material at a minimum quality to be further used for artificial insemination, in vitro fertilization, and the development of semen cryopreservation protocols.

Detecção de estro em jaguatirica (Leopardus pardalis) utilizando citologia vaginal / Vaginal cytology for estrus detection in ocelot (Leopardus pardalis)

Utilizou-se a citologia vaginal por meio de diferentes métodos de coloração para detecção de cio em jaguatirica, Leopardus pardalis, pela estimulação hormonal exógena e pela avaliação das estruturas ovarianas por videolaparoscopia. Cinco fêmeas foram tratadas com eCG/hCG e FSH/LH a cada quatro meses pelo período de dois anos. Videolaparoscopia foi realizada após cada tratamento utilizando-se cetamina-xilazina e isoflurano. Esfregaços vaginais foram obtidos 15 dias antes e após a videolaparoscopia. As lâminas foram analisadas ao microscópio de luz quanto aos tipos celulares predominantes. Todos os animais apresentaram folículos maduros (>2mm) e corpos lúteos recentes em todas as intervenções. Não houve diferença significativa entre os resultados obtidos na mesma coloração de acordo com os tratamentos utilizados. Todas as técnicas mostraram-se eficientes na detecção de células superficiais queratinizadas anucleadas e nucleadas, intermediárias, parabasais e basais. Foi possível determinar a fase de estro em Leopardus pardalis por meio da citologia vaginal.

Vaginal cytology was evaluated for estrus detection using different stains after hormonal stimulation with exogenous gonadotrophin (eCG/hCG, FSH/LH) and videolaparoscopy for ovarian structure evaluation. Five L. pardalis were treated four times during two years. After each treatment, videolaparoscopy was performed using Ketamine-Xylazine and Isoflurane. Vaginal cytology was made 15 days before and after videolaparoscopy. Three stains were used: Diff Quick, Papanicolaou, and Shorr. The slides were analyzed for the typical cell predominance. All the animals showed mature follicles (>2mm) and recent corpus luteum in all procedures. No significative difference was observed between the results in the same stain according to the treatment eCG/hCG and FSH/LH. All stains were efficient in detection of nucleated and anuclear superficial keratinized cells; intermediated, parabasal, and basal cells. Vaginal cytology can be used for estrus detection in Leopardus pardalis.

Follicular dynamics in heifers during pre-pubertal and pubertal period kept under two levels of dietary energy intake.

The objective of this study was to characterize follicular dynamics in pre-pubertal, pubertal and post-pubertal periods, as well as the effect of high-energy intake on follicular development and age at puberty in heifers. Thirty-one Nelore (Bos indicus) heifers, 6 months old, were randomly assigned to receive two different diets: one of low (GI) and other of high dietary energy intake (GII). Animals were evaluated in relation to body weight gain by being weighed every 21 days. Heifers were evaluated every other day by real-time linear ultrasonography to characterize ovarian structures development from weaning to post-pubertal period. Blood samples were collected to determine plasmatic concentrations of progesterone by RIA method. The ovulation was determined when progesterone concentrations were >1 ng/mL in three consecutive samples, and by ultrasound images of corpus luteum; and oestrous behaviour in some animals. Age at puberty differed among heifers of GII (17.00 +/- 0.46 months) compared with heifers of GI (19.87 +/- 0.47 months; p < or = 0.05). Maximum size of the dominant follicles at pre-pubertal period was greater in GII heifers than in GI (10.52 +/- 0.33 and 9.76 +/- 0.15 mm, respectively; p < or = 0.05). As heifers approached first ovulation time, size of dominant follicle increased (11.75 +/- 0.37 mm for GI and 12.52 +/- 0.91 mm for GII; p < or = 0.05). Body weight at puberty was not different in both groups (302.33 +/- 27.31 kg for GI and 326.19 +/- 27.78 kg for GII heifers; p > 0.05). We conclude that animals receiving high dietary energy intake attained the puberty earlier and the development of follicles were different than in low dietary energy intake.

Effects of dexamethasone treatment (to mimic stress) and Vitamin E oral supplementation on the spermiogram and on seminal plasma spontaneous lipid peroxidation and antioxidant enzyme activities in dogs.

The objective was to determine if treatment with dexamethasone (to mimic stress) has a deleterious effect on the spermiogram and on the composition of seminal plasma in the dog and whether adverse effects were reduced by oral supplementation with Vitamin E. Eighteen adult male Rottweiler dogs were randomly allocated in a 2 x 2 factorial treatment design (with or without dexamethasone treatment versus with or without Vitamin E supplementation). Dogs in the supplemented group received 500 mg of alpha-tocopherol (Vitamin E)/dog/day per os for 10 weeks. Dexamethasone (0.01 mg/kg/day i.m.) was given once daily for 7 days, starting 7 days after the onset of Vitamin E supplementation. Food intake, body condition score and body weight were assessed daily. Semen collections (digital manipulation) were performed twice weekly for 14 weeks and blood samples (for plasma concentrations of cortisol and testosterone) were collected once a week. Dexamethasone treatment significantly reduced ejaculate volume and increased thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS) in the seminal plasma. In contrast, supplementation with Vitamin E increased sperm motility, vigor and concentration and decreased the percentage of major sperm defects. In conclusion, dexamethasone treatment (to mimic stress) had a deleterious effect on the spermiogram and on the seminal plasma lipid peroxidation in dogs; however, some of these effects were prevented by oral supplementation with Vitamin E.

Colheita e avaliaçäo do sêmen em onça pintada (Panthera onca) / Semen collection and evaluation in the jaguar (Panthera onca)

Foram submetidas à eletroejaculaçäo 10 onças pintadas, de origem desconhecida, mantidas na Fundaçäo Parque Zoológico de Säo Paulo (n = 7) e Parque Zoológico Municipal "Quinzinho de Barros"- Sorocaba (n = 3), recebendo alimentaçäo de acordo com a dieta de rotina de cada instituiçäo. Nos 54 procedimentos realizados, foram obtidos ejaculados, ocorrendo contaminaçäo por urina em 3,7 por cento (n = 2) e em 11 (20,4 por cento) ocasiöes em que näo foram observados espematozóides. O volume médio obtido foi 7,42 ñ 3,69 ml, com motilidade média de 62,6 ñ 11,0 por cento e vigor de 2,71 ñ 0,52. A concentraçäo espermática foi 6,20 ñ 3,03 x 10 elevado a sexta potência espematozóides/ml, sendo que a porcentagem média de espermatozóides morfologicamente normais foi 46,7 ñ 5,8 por cento. A técnica de colheita de sêmen por eletroejaculaçäo é eficiente na espécie Panthera onça

Inseminaçäo artificial em cabras com sêmen congelado: resultados preliminares / Artificial insemination in goats with frozen semen: preliminary results

Com o objetivo de avaliar o sêmen de caprinos congelado em diluidor à base de TRIS contendo baixa quantidade de gema de ovo, foi feita a análise da motilidade retilínea e progressiva logo após o congelamento e após 4 anos de estocagem em nitrogênio líquido, resultando respectivamente em 38,2 ñ 7,47 por cento e 31,43 ñ 13,55 por cento. Foi feita a sincronizaçäo do cio de 16 cabras com esponjas intravaginais impregnadas com progesterona e aplicaçöes de PMSG no nono dia. No 11º dia as esponjas foram retiradas e após 46 horas foi feita a inseminaçäo artificial com palhetas estocadas por 4 anos. Houve 31,2 por cento de näo-retorno ao cio. O diluidor à base de TRIS contendo baixa quantidade de gema de ovo se mostrou eficiente quanto à preservaçäo dos espermatozóides quando avaliados in vitro através da motilidade retilínea e progressiva e in vivo através da inseminaçäo artificial

Efeito de diferentes gonadotrofinas sobre o crescimento folicular e a ovulaçäo na cobaia (Cavia porcellus) / Effect of different gonadotrophins on the follicular development and ovulation in guinea pig (Cavia porcellus)

Para estudar a resposta superovulatória em cobaias, frente a vários esquemas de tratamentos com diferentes gonadotrofinas, foram utilizadas 60 fêmeas, divididas em 10 grupos de 6 animais cada um. Em uma 1§ fase, formada por 6 grupos, cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: PMSG; FSH-p em dose única; FSH-p em 3 doses; FSH-h; HMG e soluçäo de NaCl 0,9 por cento (grupo controle), respectivamente. Numa 2§ fase, constituída por 4 grupos, cada um recebeu 22 UI de FSH-h, 15 UI de FSH-h; HMG e soluçäo de NaCl 0,9 por cento (grupo controle), respectivamente. Nos 3 grupos experimentais da 2§ fase foi aplicada também PGF2alfa. Todos os grupos, com exceçäo dos 2 controles, receberam também HCG. Os 3 primeiros grupos da 1§ fase tiveram ovulaçäo bloqueada, sendo que a PMSG causou luteinizaçäo generalizada dos folículos e as demais gonadotrofinas induziram luteinizaçäo folicular precoce com aprisionamento dos óvulos. Na 2§ fase, obteve-se um número médio de ovulaçöes em um grupo e a superovulaçäo de 2 animais. Concluiu-se que a PGF2alfa participa dos mecanismos de ovulaçäo na cobaia e que é possível obter aumento do crescimento folicular múltiplo com o emprego de FSH-h + HCG e HMG + HCG, associados ou näo à PGF2alfa

Características seminais de cäes da raça Pastor Alemäo / Seminal characteristics of German Shepherd dogs

Sêmen de 25 cäes da raça Pastor Alemäo, com 1 a 7 anos de idade e pesando 30 a 35 quilos, foi coletado por masturbaçäo. Com o objetivo de utilizar o material para inseminaçäo artificial, colheu-se a segunda e parte da terceira fraçäo, constatando-se, em média, volume de 7,17 ml; cor branca e aspecto leitoso; motilidade de 68,84 por cento; vigor de 3,5; concentraçäo de 136.192 espermatozóides por mm3 e de 889.772.000 por ejaculado; defeitos espermáticos maiores de 9,92 por cento e menores de 7,62 por cento. O pH do sêmen, dos diluidores e do sêmen diluído variou, respectivamente, de 6,02 a 6,60; 5,85 a 6,90; e 5,97 a 6,76; a pressäo osmótica de 285,20 a 295,00; 240,00 a 310,00; e 272,32 a 303,92 mOsmois e a concentraçäo de sódio e potássio, respectivamente, para o plasma seminal e os 4 diluidores, de 134,40 a 156,00; 7,80 a 13,72; 3,00 a 270,00; e 6,00 a 25,00 mEq/l. Verificou-se que entre cäes, houve variaçäo significante de todas as características seminais, exceto a pressäo osmótica e, ainda, correlaçöes entre os caracteres seminais e entre estes e os totais de patologias espermáticas. A variabilidade das características seminais entre os cäes foi bem maior quando comparada entre as colheitas de cada animal, exceto a pressäo osmótica e a concentraçäo de sódio, que se apresentaram de maneira inversa

Testosterone concentration in blood serum of buffalo bulls during 24 hours in winter and summer seasons

Concentraçöes de testosterona foram determinadas por radioimunoensaio em 30 amostras de soro sanguíneo obtidas cinco vezes durante 24 horas, de 6 búfalos adultos Jaffarabadi x Mediterrâneo. As amostras foram obtidas durante um dia do inverno e um dia do veräo de 1991. As concentraçöes de testosterona variaram de 0,10 a 1,36 ng/ml no inverno e de 0,10 a 2,454 ng/ml no veräo. Valores máximos foram obtidos às 6,00 horas (0,52 ng/ml) no veräo e 0,82 ng/ml no inverno, ocorrendo entäo duas quedas abruptas, a primeira às 12 horas (0,37 ng/ml) no veräo e 0,21 ng/ml no inverno e a segunda 24 horas (0,17 ng/ml) no veräo e 0,49 ng/ml no inverno. No veräo, níveis mais altos de testosterona sérica foram observados durante o dia

Efeitos do hormônio folículo estimulante (FSH) e da gonadotrofina da menopausa humana (hMG) como agentes superovulantes em tratamentos sucessivos de vacas da raça Holandesa variedade preta e branca, utilizadas em transferência de embriöes / Effect of follicle stimulating hormone (FSH) and human menopausae gonadotrophin (hMG) as superovulating agents in consecutive treatments of Holstein black and white cows used in embryo transfer

Para verificar o efeito superovulante de 38mg de FSH e de 2400 U.I. de hMG (1200 U.I. de FSH + 1200 U.I. de LH) em doses diárias decrescentes durante 4 dias consecutivos, a partir do 10§ dia do ciclo estral, foram utilizadas 10 vacas Holandêsas, variedade preta e branca. No 3§ dia após o início do tratamento, os animais receberam 500 ug de Cloprostenol para sincronizaçäo do ciclo estral, sendo inseminados 12 e 24 horas após o início do cio. O processo de superovulaçäo foi repetido por 5 vezes, com intervalo de 60 dias, empregando-se os mesmos animais e as mesmas doses hormonais para verificar as possíveis alteraçöes das respostas superovulatórias. Realizaram-se as colheitas dos embriöes no 7§ dia após o cio, através do método näo cirúrgico, em sistema fechado e com o auxílio de catéter Neustadt Ad-Aisch. Utilizaram-se, para cada corno uterino, 500ml do meio de Dulbecco modificado (PBS), aquecidos a 37§C e enriquecidos com 1 por cento de soro fetal bovino. O meio recuperado permaneceu em repouso por 30 minutos, sifonando-se o sobrenadante. Os 100ml restantes foram colocados em placas de Petri quadriculadas para localizaçäo das estruturas, empregando-se estereomicroscópio com aumentos de 10 e 40 vezes. Das 105 estruturas obtidas com FSH e 43 com hMG, 79 (75 por cento) e 31 (72 por cento) eram viáveis, sendo os embriöes inovulados nos cornos uterinos ipsolaterais aos corpos lúteos através do método näo cirúrgico. O diagnóstico de gestaçäo foi realizado através de palpaçäo retal, 45-60 dias após as transferências, obtendo-se taxas de 43 por cento (34/79) para o FSH e 55 por cento (17/31) para o hMG

Electroejaculation and seminal characteristics in chinchilla (Chinchilla laniger)

O método da eletroejaculaçäo foi utilizado em chinchila através de eletrodo introduzido a 3 cm no reto do animal, obtendo-se os melhores resultados com uma série de 9 choques de 12,5 mA, 6 choques de25,0 mA e 19 choques de 50,0 mA. O sêmen obtido nestas condiçöes foi considerado de boa qualidade, comportando-se satisfatoriamente tanto no processo de congelamento, quanto no descongelamento

Biochemical study of semen of buffaloes. I. Determinantions of fructose, calcium, GOT and GPT

Seis búfalos provenientes de cruzamentos entre as raças Jaffarabadi e Mediterrâneo, com aproximadamente 36 meses de idade, foram submetidos a 16 colheitas de sêmen, quinzenalmente, entre os meses de maio a agosto de 1990, por meio de eletroejaculaçäo ou vagina artificial. No sêmen total foram determinadas, em mg/ml, as concentraçöes de frutose e cálcio, enquanto que, na fraçäo rica em espermatozóides, fizeram-se dosagens de GOT e GPT, em ug/ml. Verificou-se que nas amostras colhidas com vagina artificial os valores de frutose foram significantemente maiores, ao passo que, naquelas obtidos por eletroejaculaçäo, predominaram valores mais altos de GOT e GPT. Relativamente ao cálcio, näo houve diferença significativa quanto aos métodos de colheita

Níveis de progesterona em leite desnatado de vacas no período pós-parto e diagnóstico precoce de gestaçäo / Progesterone levels in fat-free milk of cows during post partum period and early pregnancy diagnosis

Foram avaliados os períodos pós-parto de vacas primíparas mestiças Gir x Caracu e Nelore x Caracu, mantidas em regime extensivo de pastagem. Para a determinaçäo dos níveis hormonais de progesterona, amostras de leite foram coletadas semanalmente até que os animais apresentassem o 1§ estro perceptível, quando foram inseminadas artificialmente. Decorridos 21 dias da inseminaçäo, amostras foram coletadas e dosadas para fazer o diagnóstico precoce de gestaçäo. Os resultados mostraram início de ciclicidade ovariana com 9,89 semanas após o parto para vacas Gir x Caracu, com valores médios de progesterona de 0,28 nmol/l no dia do estro e 7,62 nmol/l aos 21 dias após a inseminaçäo. Para vacas Nelore x Caracu, o estro se deu com 12,08 semanas após o parto e com valores médios de progesterona de 0,46 nmol/l e 9,23 nmol/l para o dia do estro e no 21§ dia, respectivamente. Dez gestaçöes de doze diagnosticadas no 21§ dia foram confirmadas por palpaçäo retal, tendo ocorrido um caso de mortalidade embrionária precoce. Outras três vacas foram inseminadas durante a fase luteínica. A eficiência na observaçäo dos estros foi de 52,94 por cento, pois de 34 identificados pelos níveis hormonais, 18 foram percebidos visualmente. A variaçäo entre os cruzamentos näo alterou significativamente o nível de progesterona no dia do estro, tampouco no 21§ dia após inseminaçäo e também quanto ao período necessário ao reinício da atividade ovariana pós-parto