Occurrence of virulence-related sequences and phylogenetic analysis of commensal and pathogenic avian Escherichia coli strains (APEC) / Ocorrência de seqüências relacionadas com a virulência e análise filogenética de estirpes comensais e patogênicas de Escherichia coli aviário (APEC)

The presence of iron uptake (irp-2, fyuA, sitA, fepC, iucA), adhesion (iha, lpfA O157/O141, lpfA O157/O154, efa, toxB) and invasion (inv, ial-related DNA sequences and assignment to the four main Escherichia coli phylogenetic groups (A, B1, B2 e D) were determined in 30 commensal E. coli strains isolated from healthy chickens and in 49 APEC strains isolated from chickens presenting clinical signs of septicemia (n=24) swollen head syndrome (n=14) and omphalitis (n=11) by PCR. None of the strains presented DNA sequences related to the inv, ial, efa, and toxB genes. DNA sequences related to lpfA O157/O154, iucA, fepC, and irp-2 genes were significantly found among pathogenic strains, where iucA gene was associated with septicemia and swollen head syndrome and fepC and irp-2 genes were associated with swollen head syndrome strains. Phylogenetic typing showed that commensal and omphalitis strains belonged mainly to phylogenetic Group A and swollen head syndrome to phylogenetic Group D. Septicemic strains were assigned in phylogenetic Groups A and D. These data could suggest that clonal lineage of septicemic APEC strains have a multiple ancestor origin; one from a pathogenic bacteria ancestor and other from a non-pathogenic ancestor that evolved by the acquisition of virulence related sequences through horizontal gene transfer. Swollen head syndrome may constitute a pathogenic clonal group. By the other side, omphalitis strains probably constitute a non-pathogenic clonal group, and could cause omphalitis as an opportunistic infection. The sharing of virulence related sequences by human pathogenic E. coli and APEC strains could indicate that APEC strains could be a source of virulence genes to human strains and could represent a zoonotic risk.(AU)

A presença de seqüências de DNA associadas à capacidade de captação de ferro (irp-2, fyuA, sitA, fepC, iucA), adesão (iha, lpfA O157/O141, lpfA O157/O154, efa, toxB) e de invasão (inv, ial) e a classificação dentro dos quatro grupos filogenéticos principais de Escherichia coli (Grupos A, B1, B2 e D) foram determinadas, através de PCR, em 30 amostras comensais de E. coli isoladas de frangos e de 49 linhagens APEC (24 isoladas de frangos com septicemia, 14 isoladas de frangos com síndrome da cabeça inchada e 11 isoladas de embriões de galinhas com onfalite). Nenhuma das linhagens apresentou os genes inv, ial, efa, e toxB. Os genes lpfA O157/O154, iucA, fepC e irp-2 foram encontrados em freqüências significativas entre as amostras patogênicas. O gene iucA foi associado com amostras causadoras de septicemia e de síndrome da cabeça inchada. Os genes fepC e irp-2 foram associados a amostras causadoras de síndrome da cabeça inchada. A análise filogenética demonstrou que linhagens comensais e causadoras de onfalite pertenceram principalmente ao Grupo filogenético A, não patogênico. Amostras causadoras de síndrome da cabeça inchada pertenceram, em sua maioria, ao Grupo patogênico D. Linhagens causadoras de septicemia pertenceram aos Grupos A e D. Estes dados sugerem que linhagens APEC causadoras de septicemia provavelmente têm uma origem ancestral múltipla: uma derivada de uma linhagem patogênica e outra de uma linhagem não patogênica que possivelmente evoluiu através da aquisição horizontal de genes de virulência. Amostras causadoras de síndrome da cabeça inchada possivelmente constituem um grupo clonal patogênico. Por outro lado, amostras causadoras de onfalite possivelmente constituem um grupo clonal não patogênico, que, possivelmente causam onfalite devido a uma infecção oportunista. A presença de genes de virulência também encontrados em E. coli de origem humana pode indicar a possível ocorrência de zoonoses causadas por APEC.(AU)

Study of the adhesion and invasion capacities of an invasive avian pathogenic escherichia coli strain (APEC) to in vitro cultivated HEP-2 cells

An avian pathogenic Escherichia coli strain (APEC), designated strain sep17, was isolated from the liver of a chicken suffering from septicaemia. Its biological characteristics, including antimicrobial drug resistances, colicin production, plasmid profile, adhesion and invasion capacities to in vitro cultivated HEp-2 cells, and PCR detection of DNA sequences related to pathogenicity genes (fimA, tsh, papA, crl, csgA, afa, sfa, eae, lpfAO157/OI-141, lpfAO157/OI-154, toxB, iha, ial, efa, inv, invA/invE and ibeA) were determined. This strain (Lac+, TcR, fimA, csgA, crl, lpfAO157/OI-154) harbored a 70 MDa plasmid and was able to adhere to and invade in vitro cultured HEp-2 cells. Transference of this 70 MDa plasmid by conjugation rendered a non-pathogenic recipient strain HB101 (Lac-, SmR, csgA) capable of adhering to and invading the same type of cell. Scanning electron microscopy and light microscopy confirmed the adhesion capacity of the wild and the transconjugant strains, while the in vitro invasion technique and light microscopy confi rmed the invasion capacity of these strains. The FAS technique, which is used to visualize actin accumulation on cells where the adhesion process occurs, was negative for all those strains. None of the genes detected in strain sep17 were transferred by conjugation, which indicates that they are chromosomally located and are not related to the adhesion and invasion processes. The presence and absence of pathogenicity-related genes are discussed.

Biological and molecular characterization of Streptococcus crista strains isolated from human dental biofilm by means of arbitrary primers - PCR (AP-PCR)

Streptococcus spp são importantes componentes do biofilme dental sendo Streptococus crista considerado um interessante modelo de interações bacterianas que nele ocorrem. No presente trabalho linhagens de S. crista, foram isoladas do biofilme dental de indivíduos brasileiros, e estudadas em relação a suas características biológicas e ao seu perfil molecular através da técnica do AP-PCR, usando-se os iniciadores RR2, 434, OPR2, OPR8 e OPR13. Os resultados nos permitiram construir um dendrograma de similaridade. A análise do dendrograma de similaridade permitiu a separação das linhagens estudadas em grupos de similaridade. Todos os isolados apresentaram tufo de fibrilas, quando estudados por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Estes isolados foram capazes de se ligar à amilase salivar e de se aderir a células epiteliais bucais. Algumas linhagens, que apresentam tufo de fibrilas e aderência positiva, não foram capazes de coagregar com a Fusobacterium nucleatum, sugerindo que diferentes grupos de adesinas estão presentes nestas amostras.

Identificaçäo dos genes que codificam para a enterotoxina termolábil LT-II em amostras de Escherichia coli isoladas de bezerros com diarréia na regiäo de Jaboticabal, SP, Brasil / Identification of the genes that encode for the LT-II thermolabile enterotoxin among strains of Escherichia coli isolated from calves with diarrhea in the region of Jaboticabal, Sp, Brazil

Examinando 52 espécimes fecais de bezerros com diarréia de fazendas da regiäo de Jaboticabal, SP, Brasil, uma das amostras de Escherichia coli isoladas, quando analisada pela Reaçäo em Cadeia da Polimerase (PCR), demonstrou a presença dos genes que codificam para a enterotoxina termolábil do tipo LT-II. Este é o primeiro relato de amostra de E. coli enterotoxigênica, isolada de bezerros com diarréia no Brasil, contendo os genes para codificaçäo da enterotoxina LT-II. Encontram-se apenas citaçöes de isolamento no Brasil de amostras de E. coli LT-II+ de alimentos de origem animal.

Human Immunodeficiency Virus Seroprevalence among Inmates of the Penitentiary Complex of the Region of Campinas, State of São Paulo, Brazil

Six hundred and ninety three male inmates from three penitentiaries, two (A and B) maximum-security systems and one (C) minimum-security facility, located in Campinas, State of São Paulo, Brazil were studied for the presence of human immunodeficiency virus (HIV) antibodies, using a cross-sectional design. The search for anti-HIV antibodies in 693 samples of sera collected was carried out by two serological tests: (a) the Microparticle enzyme immunoassay-HIV-1 and HIV-2 (MEIA) (Abbott Laboratories) and (b) the Western Blot-HIV-1 (WB) (Cambridge Biotech Corporation) to confirm positive results with MEIA. Sera reactivity for HIV antibodies was 14.4 percent. The highest frequency of anti-HIV antibodies was found in the A and B maximum-security prisons: 17 percent and 21.5 percent, respectively. In prison C, the frequency of reagents was 10.9 percent. Seventy three inmates, initially negative in the MEIA test, were checked again five and seven months later. Three of them, all from the maximum-security facilities, became reactive in the MEIA test, with confirmation in the WB, suggesting that serological conversion had occurred after imprisonment

Studies of the genetic expression of 31A finbriae by two bovine septicaemic Escherichia coli strains

Using transposon tnphoA, classical bacterial genetic assays, SDS-PAGE and Western blot of superficial proteins, we have studied the expression of the 31A fimbriae of two bovine wild-type septicaemic Escherichia coli strains. The genes responsible for encoding colonization factor 31A were located in both the plasmid (strain BZ2468) and the chromosome (strain BZ43). The results obtained using HeLa cell cultures led us to believe that the BZ43 strain could have another colonization factor besides 31A, since one mutatnt, which did not express fiinbriae, was still able to adhere to HeLa cells.

Enterotoxin of Aeromonas sp: some culture conditions which affect its production

Cepas de Aeromonas sobria e Aeromonas hydrophila, isoladas de diferentes alimentos, foram submetidas ao teste de produçäo de enterotoxina (teste do camundongo recém-nascido) usando diferentes meios de cultura (BHI, TSI e CAYE) e condiçöes de cultivo (temperatura, aeraçäo e volume de meio de cultura em relaçäo à capacidade do frasco). Os resultados mostraram que näo houve produçäo de toxina no meio CAYE. A presença de enterotoxina foi detectada em baixa temperatura (16o.C) e em volumes mais elevados de meio (60 ml) e em culturas estacionárias, sugerindo que a aeraçäo e a temperatura de incubaçäo, embora näo críticos, säo fatores importantes na produçäo de enterotoxinas por Aeromonas

Identificacao de agentes enteropatogenicos nas fezes de criancas com diarreia aguda no município de Paulínia-SP / Identification of enteropathogenic agents in the feces of children with acute diarrhea in the municipality of Paulinia-SP

Num periodo de doze meses, de outubro de 1987 a setembro de 1988, bacterias, virus, protozoarios e helmintos foram pesquisados em amostras de fezes de 288 criancas com diarreia aguda e de 45 assintomaticas, atendidas em nivel ambulatorial na cidade de Paulinia, Centro-Sul do Estado de Sao Paulo.agentes virais predominaram nos meses de inverno em contraste com os bacterianos mais frequentes no verao. O agente mais comumente encontrado foi o rotavirus(13,5 por cento ), seguido pela Escherichia coli enterotoxigenica (12,1 por cento ) e pelas associacoes de enteropatogenos (11,1 por cento ). EPEC foi identificada em 7,0 por cento e G. lamblia em 6,2 por cento dos episodios. G. lamblia, rotavirus e ETC foram os enteropatogenos comumente identificados em amostras de criancas assintomaticas. Algumas caracteristicas do padrao etiologico desta populacao diferem das demais casuisticas nacionais. Dentreelas destacam-se o predominio da ETC entre as bacterias, a maior frequencia da S.sonnei entre as especies de Shigela, um baixo percentual de ETC e a ausencia deidentificacao de bacterias do genero Salmonella .

Estudo em camundongos (CBA x C57B1/10) F1 da influência da enterotoxina termoestável (STa) de Escherichia coli na fagocitose / Study in mice (CBA x C57B1/10) F1 of the influence of termostable (STa) enterotoxin from Escherichia coli in phagocytosis

Camundongos (CBA x C57B1/10) F1 foram utilizados para se estudar a atividade fagocitária de seus macrófagos após a inoculaçäo, nos animais, da enterotoxina termoestável (STa) de Escherichia coli, obtida a partir de um amostra origem humana (sorogrupo 0128), semipurificada de acordo com Ricci e col (1982). Foi utilizada a técnica de Depuraçäo de Carbono Coloidal em camundongos inoculados com 250 unidades tóxicas (UT) de STa, em diferentes intervalos de tempo. Os resultados mostraram que 25OUT de STa aumentaram a velocidade de depuraçäo do carbono coloidal quando inoculados com a toxina 24, 48, 72 e 96 horas antes da administraçäo da substância coloidal. Em incoulaçöes feitas antes e após estes tempos näo houve interferência signficativa da toxina, sendo que a injeçäo de STa 48 horas antes do carbono coloidal, correspondia ao pico de depuraçäo do mesmo

Detecçäo da adesina FY em amostras de Escherichia coli isoladas de bezerros com diarréia no Brasil / Detection of FY adhesin in strains of Escherichia coli isolated from calves with diarrhea in Brazil

Foram estudadas 86 amostras de E. coli isoladas de fezes diarréicas de bezerros, com o objetivo de verificar a ocorrência da adesina FY nestas amostras. Pelo ensaio de microhemaglutinaçäo manose-resistente com hemácias bovinas e de soroaglutinaçäo em lâmina com antissoro anti-FY, observamos que 9,3% das amostras de E. coli apresentaram a adesina FY, sendo que estas näo produziram enterotoxinas (LT e/ou STa) ou verotoxina (VT)

Uso de eritrócitos de diferentes origens em testes sorológicos para a detecçäo da enterotoxina termolábil (LT) de Escherichia coli, de origem humana e suína / Use of erythrocytes of different origins in serological tests for detection of thermolabile enteroxin of Escherichia coli, of human and porcine origins

Os testes sorológicos de imuno-hemólise passiva (IHP), imuno-hemólise radial (IHR) e hemaglutinaçäo indireta (HI), utilizados no diagnóstico da enterotoxina termolábil (LT) de E. coli, säo normalmente desenvolvidos usando-se hemácias de carneiro. Neste trabalho analisamos a possibilidade dos mesmos serem realizados com eritrócitos das seguintes origens: galinha, boi, cobaia, coelho e humana, utilizando-se amostras de E. coli enterotoxigênicas de orgiem humana e suína, produtoras de enterotoxina termo-lábil (LT). Com relaçäo à IHP, observamos resultados negativos quando usamos nos testes hemácias de cobaia e humanas. Resultados parcialmente concordantes aos de carneiro foram encontrados com as hemácias de galinha e coelho, na faixa de 35,7% a 66,7%. Nas provas de IHR e HI todos os eritrócitos analisados foram sensibilizados pela enterotoxina LT, embora com afinidades diferentes. Em todos os testes analisados, os resultados obtidos com as hemácias bovinas foram 100% concordantes aos observados com hemácias de carneiro nos testes sorológicos utilizados para detec çäo de LT é a de origem bovina

Comparaçäo do Staphy-test e o teste de coagulase em tubo, na identificaçäo de amostras patogênicas de Estafilococos de origem animal / Comparative evaluation of the Staphy-test and the tube coagulase test for the identification of pathogenic staphylococci from animal sources

Setenta e cinco amostras de Staphylococcus sp. isoladas de bovinos e suínos foram estudadas comparativamente pela prova de coagulase em tubo e pelo Staphy-Test. Na primeira foram usados plasmas de origem humana, bovina e de coelho, considerando-se como reaçäo positiva a produçäo de fibrina em pelo menos um dos plasmas. Onze (14,66%) amostras foram negativas em ambos os testes, sendo considerados como estafilococos näo patogênicos. As demais amostras, num total de 64 (85.33%), sendo 18 de origem bovina e 46 de origem suína, foram enquadradas como estafilococos patogênicos por terem sido positivas na prova de coagulase em tubo e/ou no Staphy-Test. Para a prova de coagulase em tubo foi verificado que a origem do plasma a ser utilizado influi nos resultados obtidos, principalmente em relaçäo às amostras de origem suína, que apresentaram um maior número de resultados falso-positivos quando se usou plasma bovino. Par as amostras bovinas, os plasmas usados tiveram comportamento semelhante, sendo aparentemente superiores os de origem bovina e de coelho. Os resultados da comparaçäo da prova de coagulase em tubo com o Staphy-Test revelaram, para as amostras bovinas e suínas, respectivamente, correlaçöes de positividade a 94,4% e 89,1%. Entre as primeiras, das 18 amostras estudadas, apenas 1 (5,55%) foi negativa no Staphy-Test. Em relaçäo às amostras suínas, 3 (6,53%) foram negativas no Staphy-Test, embora positivas em prova de coagulase em tubo. Duas (4,34%) outras amostras apresentaram resultado inverso. Os dados obtidos na presente pesquisa, quando comparados a outros testes comerciais rápidos para a detecç äo do "clumping factor" permitem recomendar o Staphy-Test para estudos epidemiológicos ou de rotina laboratorial, a identificaçäo rápida de amostras patogênicas de estafilococos de origem bovina e suína

Incidência de rotavírus em suínos na regiäo de Campinas, Säo Paulo

Foi realizado um estudo preliminar na incidência de rotavírus em suínos na regiäo de Campinas, S.P. Noventa e duas amostras de fezes diarréicas foram coletadas durante o período de 1985 a 1986. As técnicas utilizadas para a detecçäo de rotavírus foram a imunoeletromicroscopia (IEM), ensaio imunoenzimático (EIE) e a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Das 92 amostras estudadas, 18 (19,5%) foram positivas para rotavírus, em pelo menos dois dos testes utilizados. O teste de PAGE mostrou-se mais sensível que os outros dois métodos, uma vez que das 18 amostras positivas, 17 (94,4%) apresentaram um perfil eletroforético típico de rotavírus do grupo A. O EIE foi positivo para 14 amostras, sendo que uma delas näo foi detectada em PAGE. Das 54 amostras analisadas em IEM, somente 11 amostras (20,3%) foram positivas, todas elas também diagnosticadas em PAGE e/ou EIE. Sendo assim, podemos concluir que no presente estudo, a técnica de PAGE foi mais sensível que os testes de EIE e IEM para a detecçäo de rotavírus em fezes suínas. A análise do perfil eletroforético das amostras mostrou que as mesmas apresentaram 5 tipos diferentes, sendo que em um deles foi possível a visualizaçäo de uma mistura de rotavírus do grupo A e do grupo C

Plasmid mediated production of a new colonization factor (F42) in enterotoxigenic Escherichia coli

A amostra 567/7 de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) isolada em Säo Paulo, SP, Brasil, de um leitäo com diarréia produz enterotoxina termoestável (STa) e um novo fator de colonizaçäo, provisoriamente denominado F42 (Yano et al., 1986). Neste trabalho, a presença de plasmídios na amostra 567/7 foi correlacionada com a resistência a vários antibióticos, produçäo de uma colicina (V), adesina F42 e enterotoxina STa. Através de técnica de eletroforese em gel de agarose, determinou-se a presença de seis plasmídios nesta amostra. Um plasmídio de 65,1 megadaltons (Md) é o responsável pela resistência à tetraciclina enquanto que as resistências para estreptomicina, canamicina e produçäo de colicina V säo codificadas por um plasmídio conjugativo de 48,8 Md embora um plasmídio de 5,8 Md é o responsável também pela resistência à canamicina. Através de transformaçäo foi demonstrado que um plasmídio de 21,1 Md provavelmente näo conjugativo é responsável tanto pela presença de adesina F42 quanto pela enterotoxina STa. Dois outros plasmídios (2,6 Md e 2,3 Md) foram considerados plasmídios crípticos

Detecçäo de VERO citotoxina (VT) em amostras de escherichia coli isoladas de bezerros com diarréia / Detection of VERO cytotoxin (VT) among strains of escherichia coli isolated from calves with diarrhea

Entre 104 amostras de Escherichia coli isoladas de bezerros com diarréia, 70 produziram citoxina ativa em células VERO.Nenhuma das amostras produziu enteroxina termoestável (STa) detectável pelo teste do camundongo recém-nascido ou enterotoxina termolábel ensaiada pelo teste de imunohemólise radial. Os autores fazem consideraçöes sobre o papel que essa citotoxina pode desempenhar na etiologia da diarréia neonatal em bezerros.

Detection of antitoxin against thermolabile (LT) enterotoxin of Escherichia coli in porcine sera, by immune haemolysis reactions

Amostras de soros pareadas, coletadas de 69 leitöes recém-nascidos, de diferentes leitegadas, foram examinadas quanto a presença de anticorpos anti-enterotoxina termolábil (LT) de Escherichia coli, pelos testes de imuno hemólise passiva (PIH) e imuno hemólise radial (SRIH). Quinze amostras foram negativas em ambos os testes enquanto 47 näo mostraram nenhum aumento no nível de antitoxina LT. Sete amostras pareadas de soros apresentaram algum aumento no nível de anti-LT. Os resultados negativos obtidos com 15 soros pareados indicam uma provável susceptibilidade dos respectivos leitöes a infecçöes por amostras de E. coli LT+. A diminuiçäo nos níveis de antitoxina LT em muitas das amostras de soros pareados sugere que esses anticorpos foram transmitidos via colostro. Nosso achados mostram que as reaçöes de imuno hemólise podem ser usadas na avaliaçäo da imunidade passiva humoral anti-LT de E. coli em suínos recém-nascidos

Fatores de virulência em amostras de Escherichia coli enteropatogênicas para suínos isoladas no Brasil / Virulence factors present in strains of porcine enteropathogenic Escherichia coli isolated in Brazil

Trezentas e vinte e três amostras de Escherichia coli, isoladas de suínos com diarréia em Porto Alegre, RS, pertencentes aos sorogrupos 08, 09, 010, 035, 045, 064, 0108, 0115, 0119, 0138, 0139, 0141, 0147, 0149 e 0157, considerados enteropatogênicos para suínos, foram examinadas quanto à presença de fatores de virulência. A enterotoxina termolábil (LT) foi detectada através do teste de imunohemólise passiva em 56 amostras (17,3%), principalmente nos sorogrupos 08 e 0149, que totalizaram 52 amostras (92.85%) das 56 LT+. Amostras pertencentes aos sorogrupos 035, 0141 e 0157 também produziram LT, ao passo que as amostras pertencentes aos demais sorogrupos näo produziram estA enterotoxina. A enterotoxina termoestável, detectável pelo teste do camundongo recém-nascido, (STa), foi encontrada em 33 (10,2%) amostras pertencentes aos sorogrupos 09, 064, 0138, 0141 e 0149. Entre as 122 amostras STa-, examinadas para a detecçäo de enterotoxina termoestável, pelo teste de alça ligada de leitäo de 6 semanas, (STb), 31 (25,4%) foram positivas e pertenceram aos sorogrupos 035, 064, 0108, 0115, 0119, 0139, 0149 e 0157. Ao que se sabe, é a primeira vez que se relata no Brasil a produçäo de STb por amostras de E. coli de origem suína. Quanto às provas de microhemaglutinaçäo manose-resistente com hemácias de cobaia e cavalo, para a detecçäo dos antígenos K88 e K99, respectivamente, observou-se uma frequência maior de positividade entre as amostras LT+. A presença do antígeno 987P, também relatado pela primeira vez em nosso país, foi detectado sorologicamente em 12 (8,75%) das 137 amostras examinadas

Nove anos de leptospirose no Instituto Biológico de São Paulo / Nine years of leptospirosis at the Instituto Biológico of São Paulo, Brazil

Foram relatados os trabalhos sôbre leptospirose realizados no Instituto Biológico de São Paulo, no período de janeiro de 1960 a dezembro de 1968. Durante o período foram examinados 21263 soros, com uma taxa de positividade de 22,4%, dentre várias espécies animais, inclusive o homem. O maior número de soros testados foi de bovinos, com 23,6% de positivos e com uma predominância do soro-tipo wolffi, em três casos, aglutinando a 1/12 800. O título maior, porém, foi visto em um sôro que aglutinou a 1/25 600 para o sorotipo pamona. Em suínos, a taxa de positividade foi de 19,5%, tendo em primeiro lugar o sorotipo pomona, sendo que o maior título encontrado foi de 1/409 600. Em equinos encontraram-se 22,8% de positivos predominando também pomona; nêles foi vista também uma correlação entre soros positivos e oftalmia periódica. Em ovinos predominou o sorotipo canicola e a taxa de positivos foi de 39,8%, enquanto que em caninos foi de 14% na maioria dos casos para icterohaemorrhagiae. Foram apresentados, em cinco quadros demonstrativos, detalhes dos resultados; em outro quadro, o número de soros recebidos de outros Estados, bem como número de positivos e respectivas percentagens. Ao lado das reações sorológicas, muitas foram as tentativas de isolamento. O número de cepas isoladas, assim como os sorotipos encontrados em quadro (AU).