Simultaneous detection of Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae and Streptococcus sp. by polymerase chain reaction for the diagnosis of bacterial meningits

Avaliamos o desempenho da reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção simultânea da Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus sp. no diagnóstico das meningites bacterianas e sua aplicabilidade na rotina diagnóstica. Foi realizado um estudo de coorte com 182 crianças apresentando suspeita de meningite bacteriana. Em 84, havia alterações clínicas e laboratoriais sugestivas de meningite bacteriana. Destas, 65 tiveram o agente etiológico identificado pelos métodos laboratoriais de rotina e 19 ficaram sem diagnóstico etiológico. Em 98 pacientes foi excluído o diagnóstico de meningite bacteriana. Analisando o desempenho da PCR encontramos sensibilidade de 88,1%, especificidade de 99,0% e valores preditivos positivo e negativo de 98,7% e 90,1% respectivamente. Nos 19 pacientes com meningite bacteriana mas sem diagnóstico etiológico a PCR detectou microrganismos em 14, sendo 12 N. meningitidis, um H. influenzae e um Streptococcus sp. A PCR possui o potencial de poder aumentar os índices de identificação das técnicas tradicionais, principalmente nas situações onde a microscopia direta, cultura ou identificação antigênica são negativos ou inconclusivos.

Polymerase chain reaction for the laboratory diagnosis of aseptic meningitis and encephalitis

A protocol for testing cerebrospinal fluid specimens using a range of PCR assays for the diagnosis of central nervous system infection was developed and used to test prospectively 383 specimens. PCR assays were used for the detection of adenovirus, Borrelia burgdorferi, enteroviruses, Epstein Barr virus, cytomegalovirus, herpes simplex virus, human herpes virus type 6, JC virus, Leptospira interrogans, Listeria monocytogenes, lymphocytic choriomeningitis virus, measles virus, mumps virus, Mycobacterium sp., Mycoplasma pneumoniae, Toxoplasma gondii and varicella zoster virus. Of the 383 specimens tested in this study, 46 (12.0 percent) were found to be positive. The microorganisms detected were CMV, enterovirus, Epstein Barr virus, herpes simplex virus, human herpes virus type 6, JC virus, L. monocytogenes, Mycobacterium genus, Toxoplasma gondii and varicella zoster virus. The introduction of the PCR protocol described has improved the diagnosis of a range of central nervous system infections in our laboratory. We believe however that further evaluation of these assays in immunocompromised patients is necessary to better determine the predictive value of positive PCR results in these patient groups

Utilizaçäo da Reaçäo em Cadeia da Polimerase no diagnóstico precoce da infecçäo pelo HIV em crianças nascidas de mäes soropositivas / The use of Polimerase Chain Reaction (PCR) in the early diagnosis of HIV infection in infants born to seropositive mothers

O diagnóstico da infecçäo pelo HIV é feito através de testes sorológicos que detectam a presença de anticorpos específicos contra o HIV. Em crianças com menos de 24 meses esses testes näo säo conclusivos devido a transferência passiva de anticorpos IgG anti-HIV das mäes infectadas para seus recém-nascidos, positivando todas as reaçöes sorológicas. A transmissäo vertical do HIV ocorre em 15 a 50 porcento dessas crianças, sendo importante diferenciar precocemente as infectadas das näo infectadas para oferecer tratamento e profilaxia adequados. O desenvolvimento de técnicas que detectam a presença do vírus, entre elas a reaçäo em cadeia da polimerase (PCR), tem permitido essa diferenciaçäo. Desde 1994 temos realizado o teste PCR-HIV-DNA qualitativo em filhos de mäes HIV soropositivas. Foram testadas um total de 205 pacientes, sendo que, em 149 foi possível definir o estado de infecçäo pelo HIV independente do resultado da PCR. Nas 43 crianças consideradas infectadas a PCR foi positiva em 40 (sensibilidade de 93,3 porcento). Todas as 106 crianças näo infectadas apresentaram PCR negativo (especificidade de 100 porcento). O valor preditivo positivo encontrado foi de 100 porcento e o valor preditivo negativo de 97,2 porcento. Observamos também, que crianças nascidas de mäes HIV positivas tratadas com AZT na gestaçäo e trabalho de parto apresentaram nítida diminuiçäo nos índices de infectividade (9,4 porcento) em relaçäo aos filhos de mäes näo tratadas (33,7 porcento)

Diagnóstico molecular das infecçöes do Sistema Nervoso Central pela Reaçäo em Cadeia da Polimerase (PCR) / Molecular diagnosis of Central Nervous System infections by Polimerase Chain Reaction (PCR)

A identificaçäo do agente etiológico é de fundamental importância no tratamento e prognóstico das infecçöes do Sistema Nervoso Central (SNC) porém, os métodos convencionais de diagnóstico tem limitado sucesso. A Reaçäo em Cadeia da Polimerase (PCR) tem possibilitado o diagnóstico de infecçöes virais,bacterianas e por protozoários de maneira mais rápida e precisa. O objetivo deste estudo foi implantar, em nosso serviço, uma rotina ágil para o diagnóstico molecular dos microorganismos que mais freqüentemente acometem o SNC. As amostras de líquor (LCR) foram testadas para 20 agentes infecciosos: Herpes simplex, Herpes zooster, Enterovírus, vírus da Linfocoriomeningite, vírus Epstein-Barr, Adenovírus, Herpes hominis tipo 6, Sarampo, Caxumba, Mycobacterium sp, Citomegalovírus, Toxoplasma gondii, vírus JC, Listeria monocytogenes, Borrelia burgdorferi, Mycoplasma pneumoniae, Leptospira interrogans, Neisseria meningitidis, Haemophylus influenzae e Streptococcus sp. A técnica usada foi o PCR "nested" com extraçäo do RNA ou DNA das amostras pelo método de Boom modificado. Em algumas reaçöes utilizou-se a combinaçäo de "primers" de patógenos diferentes ("multiplex"), possibilitando a pesquisa de até três microrganismos na mesma reaçäo, agilizando os resultados. Foram testadas 281 amostras de LCR suspeitos de meningite ou meningo-encefalite linfocitária ou asséptica. A PCR foi positiva em 18 amostras (6,4 porcento). microrganismos detectados foram: Mycobacterium sp, Herpes simplex, Citomegalovírus, Herpes hominis tipo 6 e Toxoplasma gondii. Em estudo paralelo com 22 amostras liquóricas de pacientes com meningite bacteriana, a PCR foi positiva em 21 casos (95,4 porcento). Os microrganismos encontrados foram: H. influenzae, Streptococcus sp e N. meningitidis. Em quatro pacientes com PCR positiva a cultura do LCR foi negativa. A introduçäo da técnica de PCR em nosso laboratório otimizou o diagnóstico etiológico das infecçöes do SNC e tem se revelado de grande importância clínica.