HIV-1 Gag and Vpr impair the inflammasome activation and contribute to the establishment of chronic infection in human primary macrophages.

The successful establishment of HIV-1 infection is related to inflammasome blocking or inactivation, which can result in the viral evasion of the immune responses and formation of reservoirs in several tissues. In this sense, we aimed to evaluate the viral and cellular mechanisms activated during HIV-1 infection in human primary macrophages that allow an effective viral replication in these cells. We found that resting HIV-1-infected macrophages, but not those activated in classical or alternative patterns, released IL-1ß and other pro-inflammatory cytokines, and showed increased CXCL10 expression, without changes in the NLRP3, AIM2 or RIG-I inflammasome pathways. Also, similar levels of Casp-1, phosphorylated NF-κB (p65) and NLRP3 proteins were found in uninfected and HIV-1-infected macrophages. Likewise, no alterations were detected in ASC specks released in the culture supernatant after HIV-1 infection, suggesting that macrophages remain viable after infection. Using in silico prediction studies, we found that the HIV-1 proteins Gag and Vpr interact with several host proteins. Comparable levels of trans-LTB4 were found in the supernatants of uninfected and HIV-1-infected macrophages, whereas ROS production was impaired in infected cells, which was not reversed after the PMA stimulus. Immunofluorescence analysis showed structural alterations in the mitochondrial architecture and an increase of BIM in the cytoplasm of infected cells. Our data suggest that HIV-1 proteins Gag and Vpr, through interacting with cellular proteins in the early steps of infection, preclude the inflammasome activation and the development of effective immune responses, thus allowing the establishment of the infection.

CCR2 Plays a Protective Role in Rocio Virus-Induced Encephalitis by Promoting Macrophage Infiltration Into the Brain.

Rocio virus (ROCV) is a highly neuropathogenic mosquito-transmitted flavivirus responsible for an unprecedented outbreak of human encephalitis during 1975-1976 in Sao Paulo State, Brazil. Previous studies have shown an increased number of inflammatory macrophages in the central nervous system (CNS) of ROCV-infected mice, implying a role for macrophages in the pathogenesis of ROCV. Here, we show that ROCV infection results in increased expression of CCL2 in the blood and in infiltration of macrophages into the brain. Moreover, we show, using CCR2 knockout mice, that CCR2 expression is essential for macrophage infiltration in the brain during ROCV infection and that the lack of CCR2 results in increased disease severity and mortality. Thus, our findings show the protective role of CCR2-mediated infiltration of macrophages in the brain during ROCV infection.

Zika Virus Meningoencephalitis in an Immunocompromised Patient.

The World Health Organization considers the Zika virus (ZIKV) outbreak in the Americas a global public health emergency. The neurologic complications due to ZIKV infection comprise microcephaly, meningoencephalitis, and Guillain-Barré syndrome. We describe a fatal case of an adult patient receiving an immunosuppressive regimen following heart transplant. The patient was admitted with acute neurologic impairment and experienced progressive hemodynamic instability and mental deterioration that finally culminated in death. At autopsy, a pseudotumoral form of ZIKV meningoencephalitis was confirmed. Zika virus infection was documented by reverse trancriptase-polymerase chain reaction, immunohistochemistry, and immunofluorescence and electron microscopy of the brain parenchyma and cerebral spinal fluid. The sequencing of the viral genome in this patient confirmed a Brazilian ZIKV strain. In this case, central nervous system involvement and ZIKV propagation to other organs in a disseminated pattern is quite similar to that observed in other fatal Flaviviridae viral infections.

Influence of the CCR-5/MIP-1 α axis in the pathogenesis of Rocio virus encephalitis in a mouse model.

Rocio virus (ROCV) caused an outbreak of human encephalitis during the 1970s in Brazil and its immunopathogenesis remains poorly understood. CC-chemokine receptor 5 (CCR5) is a chemokine receptor that binds to macrophage inflammatory protein (MIP-1 α). Both molecules are associated with inflammatory cells migration during infections. In this study, we demonstrated the importance of the CCR5 and MIP-1 α, in the outcome of viral encephalitis of ROCV-infected mice. CCR5 and MIP-1 α knockout mice survived longer than wild-type (WT) ROCV-infected animals. In addition, knockout mice had reduced inflammation in the brain. Assessment of brain viral load showed mice virus detection five days post-infection in wild-type and CCR5-/- mice, while MIP-1 α-/- mice had lower viral loads seven days post-infection. Knockout mice required a higher lethal dose than wild-type mice as well. The CCR5/MIP-1 α axis may contribute to migration of infected cells to the brain and consequently affect the pathogenesis during ROCV infection.

Molecular epidemiology of dengue type 3 virus in Brazil and Paraguay, 2002-2004.

We studied the molecular epidemiology of dengue virus type 3 (DENV-3) in Brazil and Paraguay by analyzing the 5' and 3' untranslated regions (5' and 3'UTRs) and the E protein gene of viruses isolated between 2002 and 2004. Both 5' and 3'UTRs were highly conserved. However, the 3'UTR of two isolates from Brazil contained eight nucleotide deletions compared with the remaining 26 viruses. Phylogenetic analyses suggested that DENV-3 was introduced into Brazil from the Caribbean Islands at least twice and into Paraguay from Brazil at least three times.

Desenvolvimento de uma metodologia de PCR semiquantitativa utilizando plasmídio clonado com parte do gene gB de citomegalovírus / Development of a semi-quantitative PCR method using a plasmid cloned with part of the gB gene of cytomegalovirus

A infecçäo por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em Escherichia coli, multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídico, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente, que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforéticas dos amplicons de amostras clínicas, comparadas às da titulaçäo de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitativa, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua padronizaçäo, podendo ser testada na detecçäo da carga de CMV em diferentes tipos de pacientes com suspeita de citomegalovirose

Dengue: inquérito sorológico pós-epidêmico em zona urbana do Estado de Säo Paulo (Brasil) / Dengue fever: a post-epidemic sero-epidemiological survey in an urban setting at a Northwestern county of S. Paulo State, Brazil

Objetivo: Avaliar o tamanho real da epidemia sobre dengue ocorrida na zona urbana do Município de Santa Bárbara D'Oeste, SP, Brasil, de abril a junho de 1995. Métodos: Foi realizado um inquérito soroepidemiológico pós-epidêmico 5 meses após o final da epidemia da dengue. Foram processados 1.113 soros através de amostragem aleatória domiciliar da populaçäo da cidade pesquisada. As taxas de infecçäo em diferentes partes da cidade foram relacionadas com os graus de infestaçäo por Aedes aegipty e com a quantidade de casos notificados durante a epidemia. Resultados e Conclusöes: Foi encontrada variaçäo concomitante e diretamente proporcional entre as taxas de infecçäo pelo vírus da dengue, em diferentes partes da cidade, e os graus de infestaçäo domiciliar por Aedes aegipty, bem como em relaçäo ao número de casos notificados durante a epidemia. Encontrou-se prevalência de 630 por 100 mil habitantes, representando valor 15 vezes superior ao de incidência de casos confirmados laboratorialmente durante a epidemia. Através de comparaçäo retrospectiva com dados de notificaçäo comulsória, observou-se que a vigilância epidemiológica näo detectou a maioria das pessoas soro-reativas. Apesar disso, notificou grande quantidade de casos que näo eram de indivíduos com dengue, tipificando um valor preditivo positivo baixo (15,6 por cento) para o diagnóstico clínico de dengue quando o resultado laboratorial (HAI) é tomado como padräo-ouro

Infecçäo perinatal por citomegalovirus: muito freqüente mas pouco diaagnosticada / Perinatal cytomegalovirus infection: commonly occurring but rarely diagnosed

Objetivo: Avaliar a freqüência da infecçäo d perinatal por citomegalovirus (CMV) em lactentes e descrever a sua apresentaçäo clínica. Casuística e métodos: Foram estudados, prospectivamente, 34 recém-nascidos até o quarto mês de vida. Colheram-se amostras de urina ao nascimento, com 15 dias e mensalmente, bem como amostras de sangue ao nascimento e ao terceiro mês de vida. O diagnóstico laboratorial de citomegalovirose foi realizado pela detecçäo dos CMV na urina por isolamento viral de culturas de células e por detecçäo de DNA viral através da reaçäo de amplificaçäo gênica catalisada pela polimerase (PCR). Em todas as crianças foi excluído o diagnóstico de citomegalovirose congênita. Resultados: A incidência da infecçäo perinatal foi de 38,2 por cento (13/34) e apenas três dessas crianças apresentaram manifestaçöes clínicas. Obsevou-se um caso com quadro respitatório e diarréia, e outros dois pacientes apresentaram esplenomegalia. Conclusöes: Obsevou-se uma elevada taxa de incidência de infecçäo perinatal por CMV. Das crianças infectadas, 23 por cento apresentaram sintomas. Esses resultados estimulam a que se faça a pesquisa dos CMV como parte da investigaçäo etiológica de pneumonites e esplenomegalia em lactentes jovens

Prevalência e aspectos clínicos da infecçäo congênita por citomegalovirus / Prevalence and clinical aspects of congenital cytomegalovirus infection

Objetivos: Determinar a prevalência da infecçäo congênita por citomegalovirus (CMV), bem como avaliar o palel desse agente como causa de doença congênita r descrever as principais manifestaçöes clínicas dessa doença em crianças atendidas em hospital universitário de Ribeiräo Preto. Casuística e métodos: Para determinaçäo da prevalência da infecçäo congênita, foram estudados 189 recém-nascidos e suas mäes, constituindo um primeiro grupo de estudo. Para avaliaçäo da importância do CMV na etiologia da doença congênita e descriçäo das manifestaçöes clínicas da citomegalovirose congênita, foram incluídos outros 130 recém-nascidos e 74 lactentes com clínica sugestiva de infecçäo congênita, constituindo um segundo grupo. O diagnóstico laboratorial foi realizado pelo isolamento viral na urina em cultura de fibroblastos humanos, pela detecçäo do DNA viral na urina através da reaçäo de amplificaçäo gênica catalizada pela polimerase e pela reaçäo de imunofluorescência para pesquisa de IgM e IgG específicos anti-CMV. Resultados: A prelência da infecçäo congênita foi de 2,6 por cento e 95 por cento das mäes tinham IgG anti-CMV. Todas as crianças infectadas do primeiro grupo eram assintomáticas ao nascimento, porém em uma evidenciaram-se calcificaçöes intracranianas ao exame radiológico. No segundo grupo de estudo, CMV foi detectado na urina 12(5,9 por cento) das crianças com apresentaçäo clínica compatível com doença congênita. Destas, em 10 (83 por cento), o diagnóstico foi relaizado após o período neonatal. Os achados clínicos incluíram hepatoesplenomegalia (75 por cento), icterícia neonatal em hiperbilirrubinemia direta (42 por cento) e anormalidades neurológicas caracterizadas por microcefalia e calcificaçöes intracranianas (42 por cento). Conclusöes: Observou-se uma prevalência de infecçäo congênita por CMV similar à encontrada nos estudos realizados em populaçöes de soroprevalência elevada para CMV. Crianças com citomegalovirose assintomática podem ter acomentimento do SNC, clinicamente imperceptível ao nascimento, e crianças sintomáticas apresentam doença multissistêmica. O diagnóstico diferencial de qualquer recém-nascido com anormalidades, incluindo envolvimento hepático, hematopoético e neurológico, deve incluir pesquisa para citomegalovirose congênita. Os CMV mostraram ser agaentes importantes na etiologia dessas afecçöes, e a grande maioria das crianças sintomáticas foram identificadas após o período neonatal, dificultando um diagnóstico definitivo

Comparaçäo de dois testes de neutralizaçäo, utilizados no diagnóstico sorológico do vesiculovírus Piry / Comparison of two neutralization test for the use in the Piry serologic vesiculovirus diagnose

Realizou-se inquérito sorológico para pesquisar anticorpos neutralizantes contra o vesiculovírus Piry, na cidade de Catolândia, Bahia, Brasil. Duas técnicas de vírus-neutralizaçäo foram comparadas em cultura das células C6/36, com revelaçäo pelo método imunoenzimático (TN-C6/36) e em camundongos recém-nascidos (TN-camundongos), que é considerada a prova maior. Em 204 soros, dos 1.274 colhidos, a concordância das duas técnicas foi de 98,7 por cento (K=0,9853). Com este resultado do TN-C6/36, que também é mais exeqüível, decidiu-se desenvolver o estudo soro-epidemiológico do vesiculovírus Piry, em Catolândia, baseado nesta nova técnica