RESUMO
Introduction: Antigen binding to the T cell antigen receptor (TCR) leads to the phosphorylation of the immunoreceptor tyrosine-based activation motifs (ITAMs) of the CD3 complex, and thereby to T cell activation. The CD3ε subunit plays a unique role in TCR activation by recruiting the kinase LCK and the adaptor protein NCK prior to ITAM phosphorylation. Here, we aimed to investigate how phosphorylation of the individual CD3ε ITAM tyrosines impacts the CD3ε signalosome. Methods: We mimicked irreversible tyrosine phosphorylation by substituting glutamic acid for the tyrosine residues in the CD3ε ITAM. Results: Integrating CD3ε phospho-mimetic variants into the complete TCR-CD3 complex resulted in reduced TCR signal transduction, which was partially compensated by the involvement of the other TCR-CD3 ITAMs. By using novel CD3ε phospho-mimetic Chimeric Antigen Receptor (CAR) variants, we avoided any compensatory effects of other ITAMs in the TCR-CD3 complex. We demonstrated that irreversible CD3ε phosphorylation prevented signal transduction upon CAR engagement. Mechanistically, we demonstrated that glutamic acid substitution at the N-terminal tyrosine residue of the CD3ε ITAM (Y39E) significantly reduces NCK binding to the TCR. In contrast, mutation at the C-terminal tyrosine of the CD3ε ITAM (Y50E) abolished LCK recruitment to the TCR, while increasing NCK binding. Double mutation at the C- and N-terminal tyrosines (Y39/50E) allowed ZAP70 to bind, but reduced the interaction with LCK and NCK. Conclusions: The data demonstrate that the dynamic phosphorylation of the CD3ε ITAM tyrosines is essential for CD3ε to orchestrate optimal TCR and CAR signaling and highlights the key role of CD3ε signalosome to tune signal transduction.
Assuntos
Complexo CD3 , Receptores de Antígenos de Linfócitos T , Receptores de Antígenos Quiméricos , Transdução de Sinais , Humanos , Proteínas Adaptadoras de Transdução de Sinal/genética , Proteínas Adaptadoras de Transdução de Sinal/metabolismo , Complexo CD3/metabolismo , Células HEK293 , Motivo de Ativação do Imunorreceptor Baseado em Tirosina , Células Jurkat , Ativação Linfocitária/imunologia , Proteína Tirosina Quinase p56(lck) Linfócito-Específica/metabolismo , Proteína Tirosina Quinase p56(lck) Linfócito-Específica/genética , Fosforilação , Ligação Proteica , Complexo Receptor-CD3 de Antígeno de Linfócitos T/metabolismo , Complexo Receptor-CD3 de Antígeno de Linfócitos T/imunologia , Complexo Receptor-CD3 de Antígeno de Linfócitos T/genética , Receptores de Antígenos de Linfócitos T/metabolismo , Receptores de Antígenos de Linfócitos T/imunologia , Receptores de Antígenos Quiméricos/metabolismo , Receptores de Antígenos Quiméricos/imunologia , Receptores de Antígenos Quiméricos/genética , Transdução de Sinais/genética , Linfócitos T/imunologia , Linfócitos T/metabolismo , Proteína-Tirosina Quinase ZAP-70/metabolismo , Proteína-Tirosina Quinase ZAP-70/genéticaRESUMO
A escrita é a forma majoritariamente utilizada para produção e divulgação de conhecimentos. O seu papel na comunicação já é um consenso. No que diz respeito à sua parte na criação, entretanto, a escrita abre um campo de possibilidades das quais a universidade faz um aproveitamento, no mínimo, exíguo. Este artigo pretende adentrar um espaço de diluição das figuras tradicionais da escrita - como o eu que escreve e os regimes imutáveis de significação - a fim de espreitar a expressão, com a crença na possibilidade de reunir as funções da ciência com os afectos da escritura. A contribuição à escrita acadêmica assemelha-se, então, a um sopro de inesperado quando tudo parece estar demasiado claro. É o aparecimento de inúmeras possibilidades de experiências com a palavra, através das quais o escrever acadêmico pode investigar suas zonas informes.
Writing is the most commonly used form in production and dissemination of knowledge. Its role in communication is already a consensus. Regarding to its part in creation; however, writing unfolds to a vast range of possibilities, of which the university usage is, at least, meager. This article aims at entering a space of dilution of the traditional figures of writing - for instance, the "I" that writes and the immutable systems of meaning - in order to stalk the expression, with the belief in the possibility of merging functions of science and the affection of writing. The contribution to academic writing resembles, thus, to an unexpected blow, when everything seems too settled. It is the appearing of innumerous opportunities of experience with words, through which the academic writing can investigate its own shapeless areas.
La escritura es la forma principal utilizada para la producción y difusión de conocimientos. Su papel en la comunicación es ya un consenso. Por su parte en la creación, sin embargo, la escritura se abre a un campo de posibilidades que la Universidad hace una recuperación al menos escasa. Este artículo pretende introducir un espacio de diluición de las figuras tradicionales de escritura - como el yo que escribe y los regímenes inmutables de significado - a fin de escuchar la expresión, con la creencia en la posibilidad de reunir las funciones de la ciencia con la calidez de la escritura. La contribución a la escritura académica es similar, pues, un golpe inesperado cuando todo parece ser demasiado claro. Es la aparición de numerosas posibilidades de experimentar con la palabra, a través del cual la escritura académica puede investigar sus zonas informes.
Assuntos
Escrita ManualRESUMO
Este artigo discute a temática da escrita de vida, a partir de um campo de problematizações em que ela difere de uma ordenação dos signos que aparecem ao pesquisador. Integra a experiência de escrita com vidas de arquivo do projeto de pesquisa "Potência Clínica das Memórias da Loucura", cujo campo é o Acervo da Oficina de Criatividade do Hospital Psiquiátrico São Pedro, em Porto Alegre. A investigação teórica do conceito de acontecimento, com Gilles Deleuze, faz da escrita uma seta para o que mais pode um corpo, uma pesquisa, uma linguagem. A tarefa que se coloca é a de extrair de uma vida suas potencialidades, na aspiração de ser justo com o que dela insiste, e resiste em ser significado. É assim que se encontra o biografema, ferramenta de escrita de vida proposta por Roland Barthes, que sugere uma procura pelos pormenores injustificáveis de uma existência. É contar o que dela sobrevive à tentação de torná-la inteira, total, autoexplicativa. Procura traduzir-se, assim, a vida em estado de criação, enquanto índice de singularidades que ultrapassam a existência pessoal.
This article discusses the theme of life writing, in a field of problematization in which it differs from an ordering of signs that emerges to the researcher. It integrates the experience of writing lives of archive, in the research project "Clinical Potency of Memoirs of Madness", whose field is the Collection of the Creativity Workshop in São Pedro Psychiatric Hospital, in Porto Alegre. The theoretical investigation on the concept of happenning (événement), by Gilles Deleuze, makes of writing an arrow pointing to what else can a body, a research, a language. The task that arises is that of extracting of a life its potential, on the aspiration of being fair to what insists, and resists to be signified. It is in such a way that we find the biographems, Roland Barthes' life writing tool, that suggests a search for the unjustifiable details of an existence. To tell what survives to the temptation of making it fulfilled, total, self-explanatory. We seek to translate, therefore, life in creation state, such as an index of singularities that goes beyond personal existence.
RESUMO
A partir da análise do material decorrente de um curso de Biopsicologia Infantil ministrado em 1940 por psiquiatras do Hospital Psiquiátrico São Pedro, e destinado a professores de escolas públicas da cidade de Porto Alegre, Brasil, buscamos mostrar a pulverização do saber psiquiátrico para além dos muros do hospital. A organização dos conteúdos do curso, assim como os destinatários do mesmo, denotam as estratégias pelas quais o paradigma psiquiátrico presente no Rio Grande do Sul em meados do século passado foi disseminado para outros espaços institucionais. O curso explicita uma primeira aproximação entre os campos da psiquiatria e da educação com o intuito de instrumentalizar os professores na identificação de alunosproblema, contribuindo, assim, para a criação de dispositivos de controle e prevenção dos desvios do comportamento. O referencial teórico e metodológico fundamenta-se na perspectiva genealógica de Michel Foucault, em especial nos cursos proferidos no Collège de France em 1974 e 1975.
From analysis on material resulting from a child biopsychology course given by psychiatrists at São Pedro Psychiatric Hospital in 1940, which was aimed at public schools teachers in the city of Porto Alegre, Brazil, we aimed to show the spread of psychiatric knowledge beyond the hospital walls. The organization of the subjects in this course, along with its public, denote the strategies through which the psychiatric paradigm in Rio Grande do Sul in the middle of the last century was disseminated to other institutional spaces. The course shows an early instance of bringing the fields of psychiatry and education together, with the aim of providing teachers with the means to recognize problematic pupils. This contributed towards creating mechanisms for controlling and preventing deviant behavior. The theoretical and methodological reference points are based on Michel Foucault's genealogical perspective, especially the courses given at Collège de France in 1974 and 1975.
A partir del análisis del material obtenido de un curso de Bio-psicología Infantil ministrado en 1940 por psiquiatras del Hospital Psiquiátrico São Pedro destinado a profesores de escuelas públicas de la ciudad brasileña de Porto Alegre, estado de Rio Grande do Sul, buscamos mostrar la pulverización del saber psiquiátrico más allá de los muros del hospital. La organización de los contenido del curso, así como sus destinatarios, denotan las estrategias por las cuales el paradigma psiquiátrico en Rio Grande do Sul a mediados del siglo pasado fue diseminado hacia otros espacios institucionales. El curso explicita una primera aproximación entre los campos de la psiquiatría y de la educación con la intención de instrumentalizar a los profesores en la identificación de alumnos-problema, contribuyendo así para la creación de dispositivos de control y prevención de desvíos del comportamiento. El referencial teórico y metodológico se fundamenta en la perspectiva genealógica de Michel Foucault, especialmente en los cursos proferidos en el Collège de France en 1974 y 1975.