Effects of the PARP Inhibitor Olaparib on the Response of Human Peripheral Blood Leukocytes to Bacterial Challenge or Oxidative Stress.

Prior studies demonstrate the activation of poly-(ADP-ribose) polymerase 1 (PARP1) in various pathophysiological conditions, including sepsis. We have assessed the effect of olaparib, a clinically used PARP1 inhibitor, on the responses of human peripheral blood leukocytes (PBMCs) obtained from healthy volunteers in response to challenging with live bacteria, bacterial lipopolysaccharide (LPS), or oxidative stress (hydrogen peroxide, H2O2). The viability of PBMCs exposed to olaparib or to the earlier generation PARP inhibitor PJ-34 (0.1-1000 µM) was monitored using Annexin V and 7-aminoactinomycin D. To evaluate the effects of olaparib on the expression of PARP1 and its effects on protein PARylation, PBMCs were stimulated with Staphylococcus aureus with or without olaparib (1-10 µM). Changes in cellular levels of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) and adenosine triphosphate (ATP), as well as changes in mitochondrial membrane potential (MMP), were measured in PBMCs exposed to H2O2. Bacterial killing was evaluated in PBMCs and polymorphonuclear leukocytes (PMNs) incubated with S. aureus. Cytokine production was measured in supernatants using a cytometric bead array. Reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO) production, and phagocytic activity of monocytes and neutrophils were measured in whole blood. For ROS and NO production, samples were incubated with heat-killed S. aureus; phagocytic activity was assessed using killed Escherichia coli conjugated to FITC. Olaparib (0.1-100 µM) did not adversely affect lymphocyte viability. Olaparib also did not interfere with PARP1 expression but inhibits S. aureus-induced protein PARylation. In cells challenged with H2O2, olaparib prevented NAD+ and ATP depletion and attenuated mitochondrial membrane depolarization. LPS-induced production of TNF-α, MIP-1α, and IL-10 by PBMCs was also reduced by olaparib. Monocytes and neutrophils displayed significant increases in the production of ROS and NO after stimulation with S. aureus and phagocytic (E. coli) and microbicidal activity, and these responses were not suppressed by olaparib. We conclude that, at clinically relevant concentrations, olaparib exerts cytoprotective effects and modulates inflammatory cytokine production without exerting adverse effects on the cells' ability to phagocytose or eradicate pathogens. The current data support the concept of repurposing olaparib as a potential experimental therapy for septic shock.

Gut Microbiota Imbalance Can Be Associated with Non-malabsorptive Small Bowel Shortening Regardless of Blind Loop.

INTRODUCTION: Some traditional bariatric surgery procedures may lead to functional gut shortening, which may unsettle the fine-tuned gastrointestinal physiology and affect gut microbiota balance. PURPOSE: Evaluate the gut microbiota behavior in rat models facing gut shortening due to intestinal bypass. MATERIALS AND METHODS: Wistar rats (n = 17) were randomly distributed in three groups: (1) sham group (n = 5); (2) blind loop group (n = 6); and (3) resection group (n = 6). Intestinal samples and feces were analyzed to measure bacterial concentrations (small intestinal bacterial overgrowth-SIBO) 12 weeks after the experimental procedures. Bacterial translocation (BT) was investigated in the mesenteric lymph node (MLN), liver, spleen, and lung of the animals. In addition, inflammatory aspects were investigated in their liver and small bowel through histological analysis. RESULTS: Regardless of blind loop, gut shortening groups recorded similar high level of bacterial concentrations in intestine compartments, greater than that of the sham group (p ≤ 0.05). BT was only observed in the MLN of gut shortening models, with higher percentage in the blind loop group (p ≤ 0.05). The gut and liver histopathological analysis showed similar low-grade chronic inflammation in both gut shortening groups, likely associated with SIBO/BT events. CONCLUSION: Sustained SIBO/BT was associated with proximal gut shortening in half regardless of blind loop, whereas the GI tract's ability to restore gut microbiota balance after a surgical challenge on the small bowel appears to be linked to the functional remaining gut.

Mg-Al and Zn-Al Layered Double Hydroxides Promote Dynamic Expression of Marker Genes in Osteogenic Differentiation by Modulating Mitogen-Activated Protein Kinases.

The effect of LDH samples comprised of chloride anions intercalated between positive layers of magnesium/aluminum (Mg-Al LDH) or zinc/aluminum (Zn-Al LDH) chemical composition on pre-osteoblast performance is investigated. Non-cytotoxic concentrations of both LDHs modulated pre-osteoblast adhesion by triggering cytoskeleton rearrangement dependent on recruiting of Cofilin, which is modulated by the inhibition of the Protein Phosphatase 2A (PP2A), culminating in osteoblast differentiation with a significant increase of osteogenic marker genes. The alkaline phosphatase (ALP) and bone sialoprotein (BSP) are significantly up-modulated by both LDHs; however, Mg-Al LDH nanomaterial promoted even more significance than both experimental controls, while the phosphorylations of mitogen-activated protein kinase (MAPKs)- extracellular signal-regulated kinases (ERK) and c-Jun N-terminal kinase (JNK) significantly increased. MAPK signaling is necessary to activate Runt-related transcription factor 2 (RUNX2) gene. Concomitantly, it is also investigated whether challenged osteoblasts are able to modulate osteoclastogenesis by investigating both osteoprotegerin (OPG) and Receptor activator of nuclear factor kappa-ligand (RANKL) in this model; a dynamic reprogramming of both these genes is found, suggesting LDHs in modulating osteoclastogenesis. These results suggest that LDHs interfere in bone remodeling, and they can be considered as nanomaterials in graft-based bone healing or drug-delivery materials for bone disorders.

The composition and behavior of capsules around smooth and textured breast implants in pigs.

BACKGROUND: The surface of the implant is one of the many factors often associated with the occurrence of capsular contracture, the etiopathogeny of which remains unclear. The purpose of this study was to analyze the behavior of capsular contracture by means of applanation tonometry and histology using a midsized animal model. METHODS: Silicone breast implants were implanted into 33 pigs and observed at 30, 60, 180, and 270 postoperative days. RESULTS: Capsular contracture in smooth implants showed significantly greater pressure values of tonometry, and the smooth implant capsule was significantly thicker than the textured implant capsule. Both pressure and thickness of the capsules increased at each period. The collagenous layer did not show any difference considering the periods of time in which the total thickness was analyzed; on the other hand, the increase in total capsular thickness occurred by thickening of the noncollagenous layer in both smooth and textured implants. Taking into consideration both kinds of implants, histomorphometric analysis showed that thin fibers were replaced by thick fibers in later postoperatives periods (180 and 270 days). CONCLUSIONS: The greater incidence of capsular contracture in smooth implants was correlated with the progressive increase in total capsule thickness, due to a higher concentration of collagenous fibers, when compared with textured implants (p = 0.011; mean difference, 6.61), and a higher concentration of thick fibers (p = 0.034; average, >5.51 percentage points per field of thick fibers than the textured implants in all periods). Pigs are good animal models for studying the healing process after breast augmentation with implants.

Reconstituição da válvula ileocecal em cães / Ileocecal valve reconstruction in dogs

OBJETIVO: Avaliar uma técnica de reconstituição da válvula ileocecal com base em técnicas anti-refluxo vesicoureteral. MÉTODOS: Quatorze beagles foram operados. Em sete foi reconstituída a válvula ileocecal com a técnica proposta e nos outros sete realizou-se apenas a anastomose ileocólica término-terminal. Para avaliar a neoválvula realizou-se o acompanhamento clínico dos cães, a análise microbiológica e o estudo manométrico. RESULTADOS: Clinicamente, durante os 45 dias de pós-operatório, não houve diferença entre os cães com e sem reconstituição da válvula ileocecal. Na análise de bactérias aeróbias, a bactéria predominante foi a Escherichia coli. Quantitativamente, as culturas cresceram de modo irregular, não permitindo a comparação do crescimento bacteriano entre os grupos com e sem válvula ileocecal. A neoválvula apresentou uma pressão de refluxo ileocólica semelhante a da válvula ileocecal fisiológica (P>0,05). Em relação ao grupo sem válvula, as pressões de refluxo da válvula fisiológica e da neoválvula foram significantemente maiores, sendo P<0,05 e P<0,001, respectivamente. CONCLUSAO: A neoválvula ileocecal serviu de obstáculo ao refluxo colo-ileal de maneira semelhante à válvula ileocecal fisiológica.

Efeitos da desvascularização da operação de abaixamento do cólon em cães / Effects of the devascularization on the pulled-through of dogs colon

O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos dadesvascularização sobre o cólon submetido à operação de abaixamento. Foram utilizados 20 cães da raça Beaggle, adultos, de ambos os sexos, distribuídos em 3 grupos. O primeiro grupo, de 6 animais, foi utilizado para estabelecer os parâmetros de normalidade. No segundo grupo, também de 6 animais, foi realizada a desvascularização parcial do cólon, com ligadura dos vasos mesentéricos caudais. No terceiro grupo, de 8 animais, foi realizada a operação de abaixamento endorretal do cólon. Nos 3 grupos, após a anestesia, foi realizado enema opaco pré-operatório. Após 6 meses de observação, os animais foram anestesiados, submetidos a enema opaco e, a seguir, reoperados, com retirada de fragmentos em 3 locais padronizados do cólon, para análise histológica e estudo da contractilidade, in vitro, da musculatura longitudinal, com estímulo pela acetilcolina. A evolução clínica dos animais ocorreu sem complicações. Também não foram observadas alterações radiológicas, quando comparados os exames pré e pós-operatórios. Na análise histológica não foram encontradas alterações significativas. As células ganglionares dos plexos mientéricos não sofreram alterações morfológicas ou numéricas. Do ponto de vista funcional, observou-se que a musculatura longitudinal do cólon manteve sua capacidade contráctil máxima. No entanto, apresentou diminuição da sensibilidade à acetilcolina. Esse fato pode ser correlacionado com a hipoxia, pois ocorreu no local de menor vascularização do cólon abaixado. Concluiu-se que a hipoxia provocada pelo abaixamento do cólon, em cães, não foi suficiente para promover alterações morfológicas do cólon, porém, provocou alteração da contractilidade...

Estudo comparativo de duas técnicas operatórias para o tratamento cirúrgico do apêndice vermiforme, por secçäo e por invaginaçäo: estudo experimental em coelhos Oryctolagus cuniculus / Comparative study of 2 operative techniques for the surgical treatment of the vermiform appendix, by section and by invagination: experimental study in rabbits Oryctolagus cuniculus

O objetivo deste trabalho foi comparar duas técnicas de apendicectomia sob os aspectos ma roscópico, radiológico, histológico e de resistência, a insuflaçäo gasosa do ceco. Foram utilizados trinta e seis coelhos infantis, distribuidos em dois grupos iguais, denominados grupos A e B. No grupo A foi utilizada a técnica de apendicectomia por secçäo pós-ligadura e sepultamento do coto apendicular. No grupo B foi utilizada a técnica de apendicectomia por secçäo pós-ligadura e sepultamento do coto apendicular. No grupo B foi utilizada a técnica de apendicectomia por invaginaçäo-ligadura e sepultamento do coto apendicular. Cada grupo foi dividido em três subgrupos de seis coelhos, que foram sacrificados no 7§, 14§ e 28§ dia de pós-operatório (P.P.). Os resultados comparativos das duas técnicas näo mostraram diferenças significativas quanto ao aspecto macroscópico, radiológico e da resistência à insuflaçäo gasosa do ceco, exceto no aspecto histológico onde o grupo B, comparado ao A, apresentou menor proporçäo de deiscências na regiäo de sutura em bolsa aplicada à parede do ceco para o sepultammento do coto apendicular e maior porporçäo de deiscências na regiäo de ligadura do coto apendicular, ambos estatisticamente significantes

Aderências peritoneais produzidas experimentalmente em ratos / Peritoneal adhesions experimentally induced in rats

O trabalho apresenta cinco modelos de produçäo de aderências estudados comparativamente, em ratos. Foram utilizados 140 ratos da linhagem Wistar, divididos em 7 grupos de 20 ratos: 1) contrôle; 2) iintroduçäo de soro fisiológico e manuseio das alças intestinais; 3) sangue na cavidade peritoneal; 4) escarificaçäo de um segmento intestinal; 5) duas ligaduras vaculares de um segmento instetinal; 6) três ligaduras vasculares de um segmento intestinal; 7) introduçäo de talco na cavidade peritoneal. Os animais foram re-operados no 7§, 14§ e 21§ dias pós-operatório. O grupo da escarificaçäo de um segmento intestinal apresentou maior porcentagem de aderencias peritoneais. Nos grupos submetidos a duas e três ligaduras vasculares observou-se uma provável correlaçäo entre a hipóxia e aderências peritoneais