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1.
Mol Cell Biol ; 25(8): 2946-56, 2005 Apr.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-15798184

RESUMO

Sterol regulatory element-binding proteins (SREBPs) are a subfamily of basic helix-loop-helix-leucine zipper proteins that regulate lipid metabolism. We show novel evidence of the in vivo occurrence and subnuclear spatial localization of both exogenously expressed SREBP-1a and -2 homodimers and heterodimers obtained by two-photon imaging and spectroscopy fluorescence resonance energy transfer. SREBP-1a homodimers localize diffusely in the nucleus, whereas SREBP-2 homodimers and the SREBP-1a/SREBP-2 heterodimer localize predominantly to nuclear speckles or foci, with some cells showing a diffuse pattern. We also used tethered SREBP dimers to demonstrate that both homo- and heterodimeric SREBPs activate transcription in vivo. Ultrastructural analysis revealed that the punctate foci containing SREBP-2 are electron-dense nuclear bodies, similar or identical to structures containing the promyelocyte (PML) protein. Immunofluorescence studies suggest that a dynamic interplay exists between PML, as well as another component of the PML-containing nuclear body, SUMO-1, and SREBP-2 within these nuclear structures. These findings provide new insight into the overall process of transcriptional activation mediated by the SREBP family.


Assuntos
Proteínas Estimuladoras de Ligação a CCAAT/análise , Proteínas Estimuladoras de Ligação a CCAAT/fisiologia , Núcleo Celular/química , Proteínas de Ligação a DNA/análise , Proteínas de Ligação a DNA/fisiologia , Fatores de Transcrição/análise , Fatores de Transcrição/fisiologia , Ativação Transcricional , Proteínas Estimuladoras de Ligação a CCAAT/genética , Linhagem Celular , Núcleo Celular/metabolismo , Núcleo Celular/ultraestrutura , Proteínas de Ligação a DNA/genética , Dimerização , Transferência Ressonante de Energia de Fluorescência , Genes Reporter/genética , Humanos , Metabolismo dos Lipídeos , Luciferases/análise , Luciferases/genética , Proteínas de Neoplasias/análise , Proteínas de Neoplasias/metabolismo , Proteínas Nucleares/análise , Proteínas Nucleares/metabolismo , Fótons , Regiões Promotoras Genéticas/genética , Proteína da Leucemia Promielocítica , Estrutura Terciária de Proteína , Receptores de LDL/genética , Proteína SUMO-1/análise , Proteína SUMO-1/metabolismo , Deleção de Sequência , Proteína de Ligação a Elemento Regulador de Esterol 1 , Proteína de Ligação a Elemento Regulador de Esterol 2 , Fatores de Transcrição/genética , Fatores de Transcrição/metabolismo , Transcrição Gênica , Proteínas Supressoras de Tumor
2.
Obstet Gynecol ; 102(6): 1269-77, 2003 Dec.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-14662214

RESUMO

OBJECTIVE: To examine the association between the size and number of promyelocyte protein-containing nuclear bodies, their colocalization with the small ubiquitin-like modifier protein, and existing histopathologic staging of cervical neoplasia progressing toward squamous cell carcinoma. METHODS: Fluorescence-based immunodetection of the promyelocyte protein and the small ubiquitin-like modifier protein was performed on paraffin-embedded and histopathologically graded human uterine cervical tissues. Quantitative measurements of the size and number of the promyelocyte protein-containing nuclear bodies were made and statistically analyzed. RESULTS: We found that promyelocyte protein-containing nuclear bodies exhibit changes in both size and number throughout the continuum of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and cervical squamous cell carcinoma. An increase in number and size of the bodies occurs with progression from normal to CIN I/CIN II. In CIN III, two new subcategories of nuclear body are present with distinctly different promyelocyte protein patterns, with the type B CIN III losing the small ubiquitin-like modifier protein partnership. In squamous cell carcinoma, we see the loss of this colocalization in both well and poorly differentiated tumors, with a distinctly different promyelocyte protein pattern. Well-differentiated tumors have bigger nuclear bodies that are more numerous than those of the poorly differentiated tumors. CONCLUSION: These data support the use of promyelocyte and small ubiquitin-like modifier proteins as a cytodiagnostic marker that parallels cervical cancer progression.


Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas/patologia , Proteínas de Neoplasias/fisiologia , Proteínas Nucleares/fisiologia , Fatores de Transcrição/fisiologia , Ubiquitinas/fisiologia , Displasia do Colo do Útero/patologia , Neoplasias do Colo do Útero/patologia , Adulto , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Carcinoma de Células Escamosas/química , Progressão da Doença , Feminino , Humanos , Pessoa de Meia-Idade , Proteínas de Neoplasias/análise , Estadiamento de Neoplasias , Proteínas Nucleares/análise , Proteína da Leucemia Promielocítica , Fatores de Transcrição/análise , Proteínas Supressoras de Tumor , Ubiquitinas/análise , Neoplasias do Colo do Útero/química , Displasia do Colo do Útero/química
3.
J Biomed Opt ; 8(3): 357-61, 2003 Jul.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-12880339

RESUMO

We have employed a spectroscopic approach for monitoring fluorescence resonance energy transfer (FRET) in living cells. This method provides excellent spectral separation of green fluorescent protein (GFP) mutant signals within a subcellular imaging volume using two-photon excited fluorescence imaging and spectroscopy (TPIS-FRET). In contrast to current FRET-based methodologies, TPIS-FRET does not rely on the selection of optical filters, ratiometric image analysis, or bleedthrough correction algorithms. Utilizing the intrinsic optical sectioning capabilities of TPIS-FRET, we have identified protein-protein interactions within discrete subcellular domains. To illustrate the applicability of this technique to the detection of homodimer formation, we demonstrated the in vivo association of promyleocyte (PML) homodimers within their corresponding nuclear body.


Assuntos
Epitélio/metabolismo , Transferência Ressonante de Energia de Fluorescência/métodos , Espaço Intracelular/metabolismo , Neoplasias Laríngeas/metabolismo , Microscopia de Fluorescência por Excitação Multifotônica/métodos , Proteínas de Neoplasias/metabolismo , Proteínas Nucleares , Fatores de Transcrição/metabolismo , Linhagem Celular Tumoral , Dimerização , Proteínas de Fluorescência Verde , Humanos , Proteínas Luminescentes , Substâncias Macromoleculares , Proteína da Leucemia Promielocítica , Ligação Proteica , Proteínas Recombinantes de Fusão/metabolismo , Proteínas Supressoras de Tumor
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