Evaluation of murine monoclonal antibodies targeting different epitopes of the hepatitis B virus surface antigen by using immunological as well as molecular biology and biochemical approaches.

The hepatitis B virus surface protein (HBsAg) displays the major B cells antigenic determinants that can induce protective immunity and prevent the hepatitis B virus (HBV) infection, a major health problem. A panel of murine monoclonal antibodies against the HBsAg (MAb anti-HBs), raised after mice immunization with a pool of plasma of hepatitis chronic carriers, has been established. Mainly using simple immunological tools such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Western blot analysis, we could trace the location of the epitopes on the HBsAg determinants. We also report the use of two specific methodology approaches based on molecular biology and biochemical techniques such as, respectively, cloning and expression of preS1 major neutralizing epitope of the HBsAg in Escherichia coli and ELISA accomplished to chemical reduction with dithiothreitol (DTT), which were able to complete the MAb anti-HBs characterization. Our results showed that the majority of the MAbs anti-HBs were directed to the HBV common determinant a. One MAb recognizes a discontinuous epitope present in all forms of the HBsAg when evaluated by Western blot.

Aspectos fundamentais à implantação da tecnologia de produção de anticorpos monoclonais humanizados com potencial aplicação terapêutica / Key aspects for the deployment of technology for producing humanized monoclonal antibodies with potential therapeutic application

Os anticorpos monoclonais possuem diversas aplicações em transplantes, na composição de conjuntos de reativos para diagnóstico, grande variedade de doenças auto-imunes e, principalmente, na terapia do câncer. A tecnologia de produção de anticorpos monoclonais recombinantes revolucionou a geração de imunoglobulinas, possibilitando a obtenção de anticorpos humanizados dirigidos a uma grande variedade de antígenos específicos. A baixa seletividade das metodologias atuais para diagnósticos e terapia de neoplasias constitui um dos principais empecilhos para a prática oncológica. Nesse particular, a utilização de imunoglobulinas submetidas à engenharia genética já é uma realidade e significa um avanço estratégico, abrangendo cerca de 25 por cento do mercado biofarmacêutico global de proteínas terapêuticas. Este trabalho aponta os aspectos fundamentais à concretização da metodologia de humanização de anticorpos por transplante das regiões determinantes de complementaridade – CDR, com ênfase em uma proposta de produção do anticorpo anti – CD20 contra o Linfoma Não-Hodgkin. A introdução do Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos – Bio-Manguinhos nesse promissor e importante mercado de biofármacos através da implantação da metodologia de humanização do anticorpo monoclonal murino anti-CD20 é objeto desta dissertação. Viabilizar sua produção torna-se extremamente importante, tanto para a identificação precisa e precoce da enfermidade, quanto para atender um segmento do mercado brasileiro ainda desprovido de tratamento abrangente e eficaz. A apresentação do estudo dos anticorpos, sua estrutura e características, o estudo dos diferentes sistemas de expressão, cultivo, purificação, bem como a proposta de reestruturação e redimensionamento do Laboratório de Tecnologia de Anticorpos Monoclonais, parcerias, colaborações, recursos humanos necessários e aspectos de mercado, são aqui considerados.