RESUMO
In flaviviruses and hepatitis C virus (HCV), the NS3 gene encodes the N-terminal protease (NS3pro) and the C-terminal helicase (NS3hel). In HCV, the downstream NS4A is required for the NS3pro activity and exhibits a conserved EFDEMEE motif. To identify the role of this motif, we compared the ATPase and helicase activities of NS3 alone with those of the NS3-NS4A constructs. Our results suggest that the EFDEMEE motif is essential for regulating the ATPase activity of NS3hel. It is likely that this motif interferes with the ATP-binding site of NS3hel. It is becoming clear that NS4A functions as a cofactor of both proteinase and helicase in HCV.
Assuntos
Proteínas de Transporte/genética , Proteínas de Transporte/metabolismo , Hepacivirus/genética , Hepacivirus/metabolismo , Proteínas não Estruturais Virais/genética , Proteínas não Estruturais Virais/metabolismo , Adenosina Trifosfatases/química , Adenosina Trifosfatases/genética , Adenosina Trifosfatases/metabolismo , Trifosfato de Adenosina/metabolismo , Motivos de Aminoácidos , Sequência de Aminoácidos , Substituição de Aminoácidos , Sequência de Bases , Sítios de Ligação/genética , Proteínas de Transporte/química , Primers do DNA/genética , Genes Virais , Humanos , Hidrólise , Peptídeos e Proteínas de Sinalização Intracelular , Modelos Moleculares , Dados de Sequência Molecular , Mutagênese Sítio-Dirigida , Conformação Proteica , RNA Helicases/química , RNA Helicases/genética , RNA Helicases/metabolismo , Proteínas Recombinantes de Fusão/química , Proteínas Recombinantes de Fusão/genética , Proteínas Recombinantes de Fusão/metabolismo , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Proteínas não Estruturais Virais/químicaRESUMO
Using constructs that encode the individual West Nile virus (WNV) NS3helicase (NS3hel) and NS3hel linked to the hydrophilic, N-terminal 1-50 sequence of NS4A, we demonstrated that the presence of NS4A allows NS3hel to conserve energy in the course of oligonucleotide substrate unwinding. Using NS4A mutants, we also determined that the C-terminal acidic EELPD/E motif of NS4A, which appears to be functionally similar to the acidic EFDEMEE motif of hepatitis C virus (HCV) NS4A, is essential for regulating the ATPase activity of NS3hel. We concluded that, similar to HCV NS4A, NS4A of WNV acts as a cofactor for NS3hel and allows helicase to sustain the unwinding rate of the viral RNA under conditions of ATP deficiency.